东北制药辽宁生物生物分子诊断试剂培训材料
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以罗氏COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV Test, v2.0作 为参比试剂，同时检测20例病人血清样本，分析两者试剂检测的显著 关系。实验结果如下图：
实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.56%，两者符合度非常高东。药生物
人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）
磁珠法 提取核酸
30 min
PCR反应液准备 30µl样本+
20µlPCR混合液
10 min
PCR扩增 结果
70 min
上机检测
东药生物
产品特点1
• 线性范围宽：每个样本重复2次检测
准确定量线性范围为:5x109~5x102IU/ml
东药生物
• 灵敏度高：
产品特点2
60份100 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。
东药生物
与罗氏产品对比试验
以罗氏COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Test作为 参比试剂，同时检测20例病人血清样本，分析两者试剂检测的显著关 系。实验结果如下图：
实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.55%，两者符合度非常高。
东药生物
专利申请
东药生物
东药生物假病毒制备过程
噬菌体RNA
噬菌体改造的表达载体
表达的假病毒颗粒
假病毒RT-PCR Real time PCR 检测
东药生物
产品介绍
• 乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量检测试剂盒 （荧光探针法）
• 人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试 剂盒（荧光探针法）
东药生物
乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）
洗涤
1次完成
核酸洗脱 无需加热
更换离心管 无需更换
核酸回收率 高
核酸纯度 高
耗时
20-30分钟
常规磁珠法 备 注
需要
简化操作，降低成本，节省时间。
55-65℃
洗涤 3-4次 加热洗脱
加热增大交叉污染概率，同时导致核酸降解，降低 了检测灵敏度。
简化操作，提高操作效率，减少污染。
简化操作，降低交叉污染概率。
某公司 能 部分能 部分能 是 是 否
罗氏公司 能 能 能 否 否 是
东药生物 能 能 能 否 否 是
最终判断结果 与罗氏试剂等效性判断
失败 严重偏差
成功 ——
成功 等效
目前，东药生物建立的内对照系统，是国内唯一一个能够真正对样 本检测全程起到质控作用的高效系统，达到美国罗氏试剂的同级水平。
东药生物
准确定量线性范围为:3x108~3x101IU/ml
东药生物
• 灵敏度高：
产品特点2
25份10 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。
东药生物
产品特点3
• HBV基因型检测范围广：可检 测HBV A、B、C、D、E、F、 G、H已有所有基因型。
检测的基因型血清盘来源于Seracare Life Sciences。
东北制药辽宁生物生物分子诊断 试剂培训材料
公 司 简 介
➢东北制药集团辽宁生物医药有限公司建于2010年2月，是由东北制药集团与国外
先进技术团队共同创办的高科技合资企业。
➢公司以重大传染病分子诊断试剂作为先导产品，陆续推出其他系列分子诊断试剂
，同时开展保健品和基因工程药物等产品的研发和生产。
➢公司位于辽宁本溪经济开发区医药产业园，项目计划投资2.52亿元，分两期建设
10 IU/ml 30-3×108 IU/ml HIV-1型的10个亚型 200 µl 100 min 有 简便，精确，稳定
磁珠法 提取核酸
30 min
PCR反应液准备 30µl样本+
20µlPCR混合液
10 min
PCR扩增 结果
70 min
上机检测
东药生物
产品特点1
• 线性HBV）的方法及其试剂盒
2.
申请号：2.9
2. 定性定量检测病原微生物遗传物质的方法及其试剂盒
申请号：2.2
3. 快速定量检测肝炎病毒核酸的试剂盒及其检验方法
申请号：2.3
4. 一种易操作实用型磁性分离架
专利号：2.5
东药生物
东北制药辽宁生物医药公司
东药生物
谢谢！
完成。设有符合GMP要求的生产车间，研发中心和质检中心。
➢公司有6个分子诊断试剂产品投入生产，可以年产3000万人份诊断试剂。 ➢公司积极引进国内外高技术人才，不断提升研发能力和生产技术水平，在生物
医药领域为客户提供高品质产品和优质服务，是国内一流的临床诊断试剂和生物 医药产品的生产和供应商。
分子精确检测技术平台
产品特点5
• 严格的假阳性控制：设置了UNG酶+dUTP防污染措施，有效地防范了 PCR扩增产物的污染，避免假阳性结果，提高临床诊断依据的可靠性
非UNG+dUTP系统 UNG+dUTP系统
东药生物
产品特点6
• 试剂精密度高：批内(重复 10次测试) 、批间(重复30 次测试)Ct值变异系数 （CV）均<2%；
公司引进国外原创技术，创建了分子精确检 测技术平台，开发了系列重大传染病病原体 （如乙肝，丙肝和艾滋病病毒等）荧光定量 检测试剂。其检测灵敏度，精确性和稳定性 达到国际同类产品的先进水平，同时检测程 序简单，容易操作，更具有产品优势。
技术平台建立
纳米磁珠核酸提取技术 平台介绍
东药生物
磁珠核酸提取基本原理
RNA 假病毒（Armored RNA） 质控系统介绍
东药生物
RNA假病毒的重要性
由于裸露的RNA标准品和质控品极不稳定。而使用病原体颗粒或 细胞作为标准品和质控品，则有传染的危险性。因此美国罗氏公司开 发了耐核糖核酸酶病毒样颗粒-MS2噬菌体样颗粒，又称RNA假病毒 颗粒，解决了上述RNA标准品和质控品的长期储存的问题。本公司借 鉴罗氏公司的技术，开发了适合本公司产品特点的假病毒制备技术。 目前该技术已经成功的应用在丙肝，艾滋病等RNA病毒核酸定量检测 试剂中。
第一步：细胞的裂解， 释放核酸
第二步：磁珠选择性的与核酸结合
第三步：用洗涤液将杂质清洗。
第四步：用洗脱液将核酸洗脱下来。
东药生物
东药生物磁珠法介绍
全分散高科技纳米磁珠（显微照片）
磁珠分离器
东药生物磁珠样品
东药生物
东药生物磁珠核酸纯化过程
1.常温裂解
2.磁珠吸附
3.一次清洗
4.磁珠吸附
5.常温洗脱
东药生物
产品特点4
• 假阴性控制：设置高效的内对 照系统，内标探针与HBV目标 基因探针采用不同的荧光报告 基团标记，通过内标来检测 PCR检测的全过程，避免PCR假 阴性。
目的基因
内标
HEX:555nm
内标对高值样本和低值样本都能够起到监测作用 。样本为 3x108~3x101IU/ml
东药生物
6.转移核酸
东药生物
常规磁珠核酸纯化基本过程
1.加入裂解液
2.高温裂解病毒 3.磁珠吸附
4.一次清洗
5.磁珠吸附
6.二次清洗
7.磁珠吸附
8.三次清洗
9.磁珠吸附
10.洗脱核酸
11.高温助洗脱
12.转移核酸
国内现有试剂操作过程
东药生物
东药生物磁珠核酸纯化平台技术优势
比较项目 酶促裂解 裂解温度
东药生物 不需要 室温
产品优势
➢通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量 (200µl)，提高检测灵敏度和精确度； ➢通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物， 避免假阴性； ➢通过优化PCR体系中的UNG酶+dUTP措施 ， 高效降 解可能的污染产物，避免假阳性。
产品性能
灵敏度 线性范围 基因型检测 样本量 出结果时间 内标 操作优势
东药生物
产品特点3
• 漏检率低，基因型覆盖范围广：可检测HIV-1型中M， 和O族的所有基因型。
检测的基因型血清盘来源NIBSCHIV-1基因型血清盘（包括M，N和O族）。
东药生物
产品特点4
• 假阴性控制：设置高效的内对照系统，内标探针与HIV 目标基因探针采用不同的荧光报告基团标记，通过内 标来检测PCR检测的全过程，避免PCR假阴性。
东药生物
产品特点5
• 工作校准品和质控品稳定性高，同时参与核酸提取过程。
校准品经过37℃处理6天后，检测表明RNA没有任何降解。
东药生物
产品特点6
• 抗干扰能力强：实验证明，本试剂对于高血脂、高胆红素， 以及抗病毒治疗等复杂样本具有很好的抗干扰能力，所含 内、外源性干扰物质对定量结果没有影响。
检测样本分别模拟溶血，高胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物齐多 夫定，拉米夫定，司他夫定等患者血清样本。
东药生物
内对照系统监控流程
1.内标监控核酸提取全程
2.内标监控PCR扩增全程
3.内标监控PCR仪器孔间差异
东药生物
内对照系统有效性的比较
比较项目 是否能够监测核酸提取过程？ 是否能够监测PCR抑制物质？ 是否能监测PCR扩增空间差异？ 是否对靶基因扩增产生抑制效应？ 是否干扰灵敏度？ 是否对95%以上的阳性样本起到监测作用？
产品优势
产品性能
➢通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量 (200µl)，提高检测灵敏度和精确度； ➢通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物， 避免假阴性； ➢通过使用假病毒技术，提高工作标准品和质控品的 稳定性。
灵敏度 线性范围 基因型检测 样本量 出结果时间 内标 操作优势
100 IU/ml 500-1×109 IU/ml HIV-1型的9个亚型 200 µl 100 min 有 简便，精确，稳定
东药生物
产品特点7
• 抗干扰能力强：实验证明 ，本试剂对于高血脂、高 胆红素，以及抗病毒治疗 等复杂样本具有很好的抗 干扰能力，所含内、外源 性干扰物质对定量结果没 有影响。
检测样本分别模拟溶血，高胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物派罗 欣，拉米夫定，替比夫定等患者血清样本。
东药生物
与罗氏产品对比试验
更换2-3次 简化操作，降低成本，减少污染
低
操作过程少，无热损耗，核酸损失率低
低
灵敏度好，重复性好
40-60分钟 24个样本
东药生物
内对照分子监测系 统介绍
东药生物
内对照系统的重要性
1. 真实反应扩增效率避免假阴性，假阴性是目前PCR方 法诊断试剂体系中最重视的问题之一，是检测结果可靠 性的重要标示。 2. 内对照能够对整个实验流程，包括样品提取、分装、 PCR热循环仪孔间差、PCR抑制元素等等可能的影响因 素进行监控，能够提高检测系统的安全性。
实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.56%，两者符合度非常高东。药生物
人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）
磁珠法 提取核酸
30 min
PCR反应液准备 30µl样本+
20µlPCR混合液
10 min
PCR扩增 结果
70 min
上机检测
东药生物
产品特点1
• 线性范围宽：每个样本重复2次检测
准确定量线性范围为:5x109~5x102IU/ml
东药生物
• 灵敏度高：
产品特点2
60份100 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。
东药生物
与罗氏产品对比试验
以罗氏COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Test作为 参比试剂，同时检测20例病人血清样本，分析两者试剂检测的显著关 系。实验结果如下图：
实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.55%，两者符合度非常高。
东药生物
专利申请
东药生物
东药生物假病毒制备过程
噬菌体RNA
噬菌体改造的表达载体
表达的假病毒颗粒
假病毒RT-PCR Real time PCR 检测
东药生物
产品介绍
• 乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量检测试剂盒 （荧光探针法）
• 人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试 剂盒（荧光探针法）
东药生物
乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）
洗涤
1次完成
核酸洗脱 无需加热
更换离心管 无需更换
核酸回收率 高
核酸纯度 高
耗时
20-30分钟
常规磁珠法 备 注
需要
简化操作，降低成本，节省时间。
55-65℃
洗涤 3-4次 加热洗脱
加热增大交叉污染概率，同时导致核酸降解，降低 了检测灵敏度。
简化操作，提高操作效率，减少污染。
简化操作，降低交叉污染概率。
某公司 能 部分能 部分能 是 是 否
罗氏公司 能 能 能 否 否 是
东药生物 能 能 能 否 否 是
最终判断结果 与罗氏试剂等效性判断
失败 严重偏差
成功 ——
成功 等效
目前，东药生物建立的内对照系统，是国内唯一一个能够真正对样 本检测全程起到质控作用的高效系统，达到美国罗氏试剂的同级水平。
东药生物
准确定量线性范围为:3x108~3x101IU/ml
东药生物
• 灵敏度高：
产品特点2
25份10 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。
东药生物
产品特点3
• HBV基因型检测范围广：可检 测HBV A、B、C、D、E、F、 G、H已有所有基因型。
检测的基因型血清盘来源于Seracare Life Sciences。
东北制药辽宁生物生物分子诊断 试剂培训材料
公 司 简 介
➢东北制药集团辽宁生物医药有限公司建于2010年2月，是由东北制药集团与国外
先进技术团队共同创办的高科技合资企业。
➢公司以重大传染病分子诊断试剂作为先导产品，陆续推出其他系列分子诊断试剂
，同时开展保健品和基因工程药物等产品的研发和生产。
➢公司位于辽宁本溪经济开发区医药产业园，项目计划投资2.52亿元，分两期建设
10 IU/ml 30-3×108 IU/ml HIV-1型的10个亚型 200 µl 100 min 有 简便，精确，稳定
磁珠法 提取核酸
30 min
PCR反应液准备 30µl样本+
20µlPCR混合液
10 min
PCR扩增 结果
70 min
上机检测
东药生物
产品特点1
• 线性HBV）的方法及其试剂盒
2.
申请号：2.9
2. 定性定量检测病原微生物遗传物质的方法及其试剂盒
申请号：2.2
3. 快速定量检测肝炎病毒核酸的试剂盒及其检验方法
申请号：2.3
4. 一种易操作实用型磁性分离架
专利号：2.5
东药生物
东北制药辽宁生物医药公司
东药生物
谢谢！
完成。设有符合GMP要求的生产车间，研发中心和质检中心。
➢公司有6个分子诊断试剂产品投入生产，可以年产3000万人份诊断试剂。 ➢公司积极引进国内外高技术人才，不断提升研发能力和生产技术水平，在生物
医药领域为客户提供高品质产品和优质服务，是国内一流的临床诊断试剂和生物 医药产品的生产和供应商。
分子精确检测技术平台
产品特点5
• 严格的假阳性控制：设置了UNG酶+dUTP防污染措施，有效地防范了 PCR扩增产物的污染，避免假阳性结果，提高临床诊断依据的可靠性
非UNG+dUTP系统 UNG+dUTP系统
东药生物
产品特点6
• 试剂精密度高：批内(重复 10次测试) 、批间(重复30 次测试)Ct值变异系数 （CV）均<2%；
公司引进国外原创技术，创建了分子精确检 测技术平台，开发了系列重大传染病病原体 （如乙肝，丙肝和艾滋病病毒等）荧光定量 检测试剂。其检测灵敏度，精确性和稳定性 达到国际同类产品的先进水平，同时检测程 序简单，容易操作，更具有产品优势。
技术平台建立
纳米磁珠核酸提取技术 平台介绍
东药生物
磁珠核酸提取基本原理
RNA 假病毒（Armored RNA） 质控系统介绍
东药生物
RNA假病毒的重要性
由于裸露的RNA标准品和质控品极不稳定。而使用病原体颗粒或 细胞作为标准品和质控品，则有传染的危险性。因此美国罗氏公司开 发了耐核糖核酸酶病毒样颗粒-MS2噬菌体样颗粒，又称RNA假病毒 颗粒，解决了上述RNA标准品和质控品的长期储存的问题。本公司借 鉴罗氏公司的技术，开发了适合本公司产品特点的假病毒制备技术。 目前该技术已经成功的应用在丙肝，艾滋病等RNA病毒核酸定量检测 试剂中。
第一步：细胞的裂解， 释放核酸
第二步：磁珠选择性的与核酸结合
第三步：用洗涤液将杂质清洗。
第四步：用洗脱液将核酸洗脱下来。
东药生物
东药生物磁珠法介绍
全分散高科技纳米磁珠（显微照片）
磁珠分离器
东药生物磁珠样品
东药生物
东药生物磁珠核酸纯化过程
1.常温裂解
2.磁珠吸附
3.一次清洗
4.磁珠吸附
5.常温洗脱
东药生物
产品特点4
• 假阴性控制：设置高效的内对 照系统，内标探针与HBV目标 基因探针采用不同的荧光报告 基团标记，通过内标来检测 PCR检测的全过程，避免PCR假 阴性。
目的基因
内标
HEX:555nm
内标对高值样本和低值样本都能够起到监测作用 。样本为 3x108~3x101IU/ml
东药生物
6.转移核酸
东药生物
常规磁珠核酸纯化基本过程
1.加入裂解液
2.高温裂解病毒 3.磁珠吸附
4.一次清洗
5.磁珠吸附
6.二次清洗
7.磁珠吸附
8.三次清洗
9.磁珠吸附
10.洗脱核酸
11.高温助洗脱
12.转移核酸
国内现有试剂操作过程
东药生物
东药生物磁珠核酸纯化平台技术优势
比较项目 酶促裂解 裂解温度
东药生物 不需要 室温
产品优势
➢通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量 (200µl)，提高检测灵敏度和精确度； ➢通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物， 避免假阴性； ➢通过优化PCR体系中的UNG酶+dUTP措施 ， 高效降 解可能的污染产物，避免假阳性。
产品性能
灵敏度 线性范围 基因型检测 样本量 出结果时间 内标 操作优势
东药生物
产品特点3
• 漏检率低，基因型覆盖范围广：可检测HIV-1型中M， 和O族的所有基因型。
检测的基因型血清盘来源NIBSCHIV-1基因型血清盘（包括M，N和O族）。
东药生物
产品特点4
• 假阴性控制：设置高效的内对照系统，内标探针与HIV 目标基因探针采用不同的荧光报告基团标记，通过内 标来检测PCR检测的全过程，避免PCR假阴性。
东药生物
产品特点5
• 工作校准品和质控品稳定性高，同时参与核酸提取过程。
校准品经过37℃处理6天后，检测表明RNA没有任何降解。
东药生物
产品特点6
• 抗干扰能力强：实验证明，本试剂对于高血脂、高胆红素， 以及抗病毒治疗等复杂样本具有很好的抗干扰能力，所含 内、外源性干扰物质对定量结果没有影响。
检测样本分别模拟溶血，高胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物齐多 夫定，拉米夫定，司他夫定等患者血清样本。
东药生物
内对照系统监控流程
1.内标监控核酸提取全程
2.内标监控PCR扩增全程
3.内标监控PCR仪器孔间差异
东药生物
内对照系统有效性的比较
比较项目 是否能够监测核酸提取过程？ 是否能够监测PCR抑制物质？ 是否能监测PCR扩增空间差异？ 是否对靶基因扩增产生抑制效应？ 是否干扰灵敏度？ 是否对95%以上的阳性样本起到监测作用？
产品优势
产品性能
➢通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量 (200µl)，提高检测灵敏度和精确度； ➢通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物， 避免假阴性； ➢通过使用假病毒技术，提高工作标准品和质控品的 稳定性。
灵敏度 线性范围 基因型检测 样本量 出结果时间 内标 操作优势
100 IU/ml 500-1×109 IU/ml HIV-1型的9个亚型 200 µl 100 min 有 简便，精确，稳定
东药生物
产品特点7
• 抗干扰能力强：实验证明 ，本试剂对于高血脂、高 胆红素，以及抗病毒治疗 等复杂样本具有很好的抗 干扰能力，所含内、外源 性干扰物质对定量结果没 有影响。
检测样本分别模拟溶血，高胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物派罗 欣，拉米夫定，替比夫定等患者血清样本。
东药生物
与罗氏产品对比试验
更换2-3次 简化操作，降低成本，减少污染
低
操作过程少，无热损耗，核酸损失率低
低
灵敏度好，重复性好
40-60分钟 24个样本
东药生物
内对照分子监测系 统介绍
东药生物
内对照系统的重要性
1. 真实反应扩增效率避免假阴性，假阴性是目前PCR方 法诊断试剂体系中最重视的问题之一，是检测结果可靠 性的重要标示。 2. 内对照能够对整个实验流程，包括样品提取、分装、 PCR热循环仪孔间差、PCR抑制元素等等可能的影响因 素进行监控，能够提高检测系统的安全性。