004-SPD-20A液相色谱仪标准操作规程【可编辑全文】

可编辑修改精选全文完整版
一、目的：建立SPD-20A液相色谱仪标准操作规程。

二、范围：SPD-20A液相色谱仪。

三、责任者：研发部。

四、正文
1、开机将电源插头分别插入插座，打开泵、真空脱气机、紫外检测器、柱温箱和自动进样器的电源开关；打开计算机，鼠标双击桌面上的【LCsolution】图标打开一个窗口。

1.1进入在线工作站：点击【分析】图标，在弹出窗口后点击【确定】即可进入在线工作站，点击命令栏【仪器】—【系统配置】，弹出窗口后，双击【泵A（LC-20AT）】，点击【电磁阀】，有【None】、【LPGE设备】等选项，如选择【LPGE设备】选项，输液泵参数设置在【泵】窗口中有【等浓度洗脱】、【低压梯度】及【二元高压梯度】三种泵模式。

进入在线操作页面后，可看到如下几部分组成：
--最上方为命令栏，依次为【文件】、【编辑】、【视图】、【方法】等；
--命令栏下方为常用命令的快捷操作图标，分别用于【数据采集参数】、【单次运行】、【仪器开/关】、【泵开/关】、【系统检查】等；
--左侧为辅助栏，显示几个分析作业流程的操作图标，如【仪器参数】、【单次运行】、【批处理】，【数据分析】等；
--中部为数据信号输出视图及仪器参数视图；
--右侧为仪器工作实时参数栏：包括泵流速、压力、检测波长、样品瓶、进样体积等；1.2进入离线工作站：如要进行离线分析方法的建立和修改，则点击【再解析】图标进入数据分析和处理界面。

2、开机清洗
2.1手动排气：在仪器参数设置界面中的【高级】-【自动排气】窗口进行选择和设置清洗的管路及时间后，打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转90度），点击A、B泵面板上按钮【Purge】键，可对仪器管路进行冲洗。

2.2自动排气：在仪器参数设置界面中的【高级】-【自动排气】窗口设置【排气顺序】—【流动相名称】—【第1为流动相A、第2为流动相B、第3为流动相C及第4为流动相D】，排气时间均设置为3min，点击命令栏下【自动排气】图标，即可执行“自动排气”命令。

3、分析方法的建立、保存和调用
3.1 分析方法的建立在仪器运行参数设置界面，点击【正常】出现主要运行参数，点击【高级】出现全部运行参数。

3.1.1 采样时间设置在【简单设置】窗口中，在【LC停止时间】框中输入样品运行时间，并点击【应用于所有采集时间】，使得结束时间与LC停止时间保持一致。

3.1.2 输液泵参数设置在【泵】窗口中，如选择【二元高压梯度】模式，输入总流速和泵B浓度；如选择【低压梯度】模式，分别输入泵A及泵B流速，以及设置各管路浓度，其中溶剂A浓度未显示（其数值为100%-溶剂B浓度-溶剂C浓度-溶剂D浓度）。

3.1.3洗脱程序的设置进行等度洗脱，只需在【泵】窗口设置即可；如要进行梯度洗脱，则在【LC时间程序】窗口中写入梯度程序，其中【时间】栏输入时间，【单元】栏选择【Pumps】，【操作】栏选择【B.Conc】，【值】栏输入B泵浓度百分比值。

写入若干条梯度程序后，在最末行写入结束命令，其中【时间】栏键入分析结束时间，【单元】栏选择【Controller】，【操作】栏选择【Stop】，以示样品分析结束。

3.1.4 检测器参数设置在【检测器A】窗口中，【波长通道1】中输入检测波长，如需要进行双波长检测，可在前述在线操作页面，点击最上方命令栏栏【仪器】-【系统设置】进入系统设置，双击【检测器A：SPD-20A】，在【双波长模式开启】前打勾，点击【确定】，返回，则可输入两个检测波长。

3.2 分析方法的保存点击【文件】下的【另存方法文件为】，选择方法保存路径及名称。

3.3 分析方法的调用点击【文件】下的【打开方法文件】，选择所需要的分析方法并单击“打开”即可。

4、供试品分析
4.1 先建立或调用一种分析方法，单击【下载】按钮，若仪器的系统控制器没有打开，可单击命令栏上的【仪器开/关】按钮，此时仪器将按照所选的分析方法条件开始运行。

4.2 单次分析点击命令栏【单次运行】快捷按钮，键入样品名称、选择方法文件、数据文件存储路径、进样量、样品盘编号（左侧大样品盘编号为1，右侧小样品盘编号为0）、进样量等参数，点击“确定”，即进行单次样品分析。

4.3 批处理分析
4.3.1 批处理文件的建立、保存和调用点击左侧辅助栏【批处理】按钮，出现一个空白的序列表，输入各项信息（主要有供试品在自动进样架上的瓶号、自动进样架号、样品名、方法名、文件名、进样量等信息）。

右键菜单可帮助快速地建立序列表，主要的几项功能为，【向下填充】用于在点击位置以下所有框中自动填入相同信息，【向下填充(详细信息)】可用于在点击位置所在列中自动填入相同信息或依次增加的信息。

【表样式】可任意增减批处理文件项目。

点击【文件-另存批处理文件为】选择路径及名称对批处理文件进行保存。

点击【文件-打开批处理文件】选择所需要的批处理文件，单击“打开”，可进行批处理文件的调用。

4.3.2 批处理进样分析调用一个批处理后，点击命令栏上【批处理开始】按钮，在【执行范围】中选择全部或部分选定的序列范围，点击“开始"，仪器开始序列进样采集分析。

4.3.3 批处理分析的暂停和停止在运行批处理分析的状态下，如点击暂停按钮，可暂停序列表运行，此状态下可对批处理文件进行修改、增减等操作，再次点击暂停按钮，
则批处理分析继续运行；如点击停止按钮，则批处理分析停止。

5、分析数据的处理和分析报告的打印
5.1 分析数据的处理
5.1.1 积分参数的设置和峰命名点击【再解析】进入数据分析和处理界面。

点击命令栏中的【文件-打开数据文件】选择一个所需的数据文件，单击“打开”。

点击【方法-数据分析参数】进行积分参数的设置，设置后单击【方法-分析】按钮，仪器将按照积分参数对数据文件进行处理。

点击色谱图下侧的“编辑”键，进入编辑状态，在表格“名称”项下键入峰的名称。

在“保留时间”项下键入峰的保留时间，然后点击“视图”回到查看状态，再点击左侧辅助栏中的【应用到方法】按钮，选择与原来相同的方法名进行保存，则对积分参数进行了保存。

5.1.2 数据处理如需对数据文件进行批处理，先点击左侧辅助栏中的【批处理】按钮，进入数据批处理界面。

从左侧数据文件夹中选中需要进行批处理的数据文件，拖入右侧批处理表，点击上方命令栏中的“开始”按钮，即可按照5.1.1设置的积分方法进行数据批处理。

5.1.3 分析报告的打印点击左侧辅助栏中的【报告模板】按钮，进入分析报告处理界面。

首先选择报告的模板，可自己制作报告模板，也可点击命令栏中的【文件-打开报告格式文件】选择已有的报告模板，工作站自带模板的存储路径为C：\Labsolution s\Lcsolution\Template。

一般单个文件报告选择“Peak table”文件夹中的模板，两个或两个以上文件报告选择“Summary”文件夹中的模板。

选择好模板后，在左侧数据文件夹中选中数据文件，拖入右侧模板中，点击“打印”即可。

6、色谱柱的清洗
6.1 实验前冲洗
利用仪器的“开机”功能完成冲洗，具体操作为：在命令栏下点击【仪器→开机】，输入所需开机时间以及冲洗方法，点击确定后系统会在指定时间时运行该方法实验前冲
洗功能；
6.2 实验后冲洗及自动关机
设置一个自动关机的批处理文件，第一栏将关机冲洗方法设置为梯度洗脱的形式（0-60min冲洗甲醇水（5%-10%），60min-120min冲洗100%甲醇）LC停止时间为120min,进样瓶位置设置为“-1”（表示不进样），其他项按4.3.1所述设置，第二栏设置关机方法，LC停止时间为0.01min流速设置为0ml/min，进样瓶位置设置为“-1”（表示不进样），其他项按4.3.1所述设置，点击命令栏上【批处理开始】按钮，在【执行范围】中选择全部序列范围，点击“开始"，仪器开始序列冲洗，在仪器开始【批处理】后，在命令栏下点击【仪器→关机】，待弹出对话框提示加载至批处理队列中后，点击确定，系统会显示所在进行中的批处理队列和已加载的关机序列，点击关闭仪器会完成第一个批处理队列后，自动关闭泵、检测器、进样器进入待机状态（显示灯为黄色），完成自动关机程序。

7、关机
7.1 手动关机分析和清洗工作结束后，单击命令栏中的【仪器开/关】按钮，依次关闭各个界面，退出【LCsolution】色谱工作站；关闭仪器电源开关。

7.2 自动关机
见6.2 实验后冲洗及自动关机
8、注意事项
8.1 避免气泡进入泵，引起柱压过高而损坏色谱柱。

若有气泡进入，应立即点击“泵开/关”图标使泵停止运行，打开排空阀，按“purge”键使泵开始运行（“pump”指示灯亮），排出仪器管路中的空气后，再按“purge”键，停止泵的运行（“pump”指示灯灭），排出空气后，关闭排空阀，再点击“泵开/关”“pump”键继续工作。

8.2 四元阀安装在A泵，构成A、B、C、D四个低压梯度流路，若仅使用A泵，仍需开启B泵；若A泵与B泵同时使用，则构成二元高压。

8.3 自动进样器进样时，下侧进样架外的门不可打开。

8.4 每次实验完毕，先用过滤5%甲醇水洗柱70-90分钟，后用色谱级甲醇洗柱60分钟，避免无机盐堵柱或霉变。

8.5 下次使用前先过滤5%甲醇水洗柱45-60分钟，后用流动相洗40-60分钟，待柱压稳定后方可进样。

9、清洁与维护
9.1 流动相要过滤；常用缓冲液时，停泵前要用纯化水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔。

9.2 更换流动相时，要保证两种流动相的相容性；如不互溶，要用一种中间溶剂过滤。

9.3 如长时间不用检测器，可以关掉紫外灯。

9.4 不要让缓冲液长期停滞在检测池内。

9.5 采用30%磷酸作为清洗剂，用6mol/L硝酸钝化，先清洗再钝化。

9.6 四元阀的清洗与维护：若流动相中使用乙腈或缓冲盐，则需在实验结束后，①首先用90%的甲醇水冲洗A、B、C及D四个流路（溶剂浓度均设置为25%）0.5h—1h；②若短期不用，则用50%甲醇水再冲洗0.5h—1h；若长期不用，则需用纯甲醇再冲洗0.5h —1h，以防止四元阀堵塞。

五、变更历史。