血液涂片的制作与染色标准操作程序

血液涂片的制作与染色标准操作程序
1 目的
指导如何正确制作血液涂片与染色。

2 器材和试剂
2.1器材：清洁玻片、推片。

2.2试剂：瑞氏-姬姆萨复合染色液、pH 6.4～6.8 磷酸盐缓冲液。

3 程序步骤
3.1 血涂片制作
取末梢血1 滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。

血液即沿推片散开，将推片与载片保持30 ～45°角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。

血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。

血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。

3.2 血涂片染色
平置玻片于染色架上，滴加染液3～5 滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，滴加缓冲液5～10 滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5 ～10 分钟后用水冲去染液，待干。

4质量控制
4.1 一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整
齐，并留有一定的空隙。

涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。

太薄的血膜片50 ％的白细胞集中于边缘或尾部，不利于白细胞分类。

如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。

4.2 血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。

4.3 有些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜尾部细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。

4.4 配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的pH 对细胞染色的影响很重要。

在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子浓度十分敏感。

如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。

冲洗须用中性水，虽亦可用自来水（但不能保持稳定）。

4.5 对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天青B ，天青B 对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，临床上称之为成熟。

判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。

4.6 染液与缓冲液的比例要适当，以1∶2 为宜。

一般说来缓冲液稀释度愈大，染色时间愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。

缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细胞上，使细胞深
染而无法检查。

细胞较多较厚的涂片（如红细胞增多症）染液应多些，细胞较少的涂片染液应少些。

4.7 染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。

4.8 染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色，染色质结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种类颜色。

5 参考文献
5.1《全国临检操作规程》（第4版）。