BML-111抑制Hep3B细胞迁移及机制初探

网络出版时间：２０２０－５－２５１４：４４　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．ｒ．２０２００５２２．０８５４．０１６．ｈｔｍｌ
ＢＭＬ １１１抑制Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移及机制初探
徐　芬１，郝　华２，吴德强３，汪庆余２，李里香２，徐　静２，林　兰２，冯　雨２
（南昌大学第二附属医院１．全科医学科、２．病理科、３．药剂科，江西南昌　３３０００６）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２０．０６．００８
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２０）０６－０７７４－０５中国图书分类号：Ｒ３２９ ２４；Ｒ３４５；Ｒ７３ ３７；Ｒ７３５ ７０２ ２；Ｒ９７７ ３
摘要：目的　研究ＢＭＬ １１１对Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移的作用并对其机制进行初步探讨。

方法　分别用Ｂ
ＭＬ １１１和（或）Ｂｏｃ ２（ＢＭＬ １１１受体阻断剂）刺激Ｈｅｐ３Ｂ细胞，观察两者对细胞形态的影响；
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验研究ＢＭＬ １１１和（或）Ｂｏｃ ２对Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移的影响；免疫荧光及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＢＭＬ １１１和（或）Ｂｏｃ ２对Ｈｅｐ３Ｂ细胞５ 脂加氧酶（５ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ，５ ＬＯＸ）核转位的影响，ＲＴ ＰＣＲ检测ＢＭＬ １１１和（或）Ｂｏｃ ２对Ｈｅｐ３Ｂ细胞ＭＭＰ ２及ＭＭＰ ９基因表达的影响。

结果　空白组Ｈｅｐ３Ｂ细胞伸出许多突起，排列不紧密，即肝癌细胞发生了上皮
间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ），而加入ＢＭＬ １１１后，细胞恢复了上皮细胞的形态特点，Ｂｏｃ ２能阻断其作用；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验显示，ＢＭＬ １１１能明显抑制Ｈ
ｅｐ３Ｂ细胞迁移，而Ｂｏｃ ２能阻断其作用。

免疫荧光显示，ＢＭＬ １１１能明显降低５ ＬＯＸ蛋白的表达，并促进其向胞质转位，而Ｂｏｃ ２能增加５ ＬＯＸ蛋白的表达，并促进其向核转位；ＲＴ ＰＣＲ实验发现，ＢＭＬ １１１能下调ＭＭＰ ２及９ｍＲ ＮＡ的表达，
而Ｂｏｃ ２能逆转这种效应。

结论　ＢＭＬ １１１可能通过抑制５ ＬＯＸ进而抑制Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移。

关键词　５ 脂加氧酶；ＢＭＬ １１１；迁移；上皮 间质转化；转位；基质金属蛋白酶
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
收稿日期：２０２０－０１－１０日期：２０２０－０３－２５
基金项目：江西省自然科学基金资助项目（Ｎｏ２０１７１ＢＡＢ２０５０５４）作者简介：徐　芬（
１９８５－）女，硕士，主治医师，研究方向：脂氧素及类似物与炎症和肿瘤的关系，Ｅ ｍａｉｌ：ｘｕｆｅｎ６８４＠１６３．ｃｏｍ郝　华（１９８０－），男，博士，副主任医师，硕士生导师，研究方向：脂氧素及类似物与炎症和肿瘤的关系，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｈａｏｈｕａ４１０＠１２６．ｃｏｍ
肝癌是消化系统常见恶性肿瘤，其发病与慢性肝炎病毒（乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒）密切相关。

如何抑制肝癌组织中的炎症反应成为肝癌治疗
的重要策略。

脂氧素是人体内最重要的炎症自稳物
质，在免疫自稳（包括炎症［
１－２］及肿瘤［３－４］
）中扮演着重要角色，然而其半衰期极短且容易降解，不适合进行在体实验研究。

而ＢＭＬ １１１是其类似物，在结构上与脂氧素类似，而且两者的受体相同（均为甲酰肽受体２，ＦＰＲ２），保留了脂氧素功能所必需的基团，且不易降解，性质稳定，因而在实验研究中应用
较广，研究发现其对炎症［５－６］及妊高症［７］
具有明显
的抑制作用。

我们课题组研究发现，脂氧素及ＢＭＬ
１１１调控ＩＬＫ轴抑制肝细胞癌ＥＭＴ及转移［８］。

而
近年来研究发现，
５ 脂加氧酶（５ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ，５ ＬＯＸ）在多种癌组织中高表达并参与肿瘤的演进。

本研究拟以人肝癌细胞细胞系（Ｈｅｐ３Ｂ）为实验对象，采用ＢＭＬ １１１及Ｂｏｃ ２（ＦＰＲ２阻断剂）干预Ｈｅｐ３Ｂ细胞，观察ＢＭＬ １１１对Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移的作用及对５ ＬＯＸ的调控作用，为抗肝癌研究提供实验依据。

１　材料与方法
１．１　试剂　ＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１５５９６０１８）；引物设计及合成（上海赛百盛）；逆转录相关试剂、ＰＣＲ扩增仪（美国ＭＪｒｅｓｅａｒｃｈＡＢＩ９６００）；兔抗５ ＬＯＸ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｓｃ ２０７８５）；ＦＩＴＣ荧光二抗（Ｂｏｓｔｅｒ，ＳＡ １０６８）；Ｂｏｃ ２（Ｓｉｇｍａ，０６７３１）；ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ，３１８７００７４）；ＢＭＬ １１１（Ｃａｙｍａｎ，１０００５０３２）；血清（杭州四季青，２１０４）。

１．２　细胞培养与实验分组　实验用Ｈｅｐ３Ｂ购于中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，置于培养箱培养。

培养液中含２０％胎牛血清（ＦＣＳ）及双抗（青霉素和链霉素）。

使用胰酶消化传代。

采用第３～５代细胞进行实验。

实验分为三组：（１）空白组；（２）ＢＭＬ １１１组；（３）ＢＭＬ １１１＋Ｂｏｃ ２组（Ｂｏｃ ２预处理３０ｍｉｎ后，最后加入ＢＭＬ １１１）。

参考以往的文献，ＢＭＬ １１１选择浓度为２００
μｇ·Ｌ－１［９］。

１．３　免疫荧光实验　２４孔板接种细胞，给药，２４ｈ
后弃上清，用ＰＢＳ洗板，冰甲醇固定，Ｔｒｉｔｏｎ破膜，ＢＳＡ封闭，４０ｍｉｎ后加入５ ＬＯＸ一抗孵育４ｈ（４℃）后ＰＢＳ洗，二抗（荧光）孵育ｌｈ（室温），Ｈｏｅ ｃｈｅｓｔ染核，１５ｍｉｎ后显微镜下观察，拍照。

荧光强
·４
７７·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ｊｕｎ；３６（６）：７７４～８
度为５ ＬＯＸ的表达水平，分析采用ＩｍａｇｅＪ软件。

１．４　ＲＴ ＰＣＲ技术检测ＭＭＰ ２和ＭＭＰ ９表达　ＴＲＩｚｏｌ法提取ＲＮＡ。

逆转录具体过程如下：先测定ＲＮＡ的浓度，将上样的总ＲＮＡ量定为４μｇ，根据浓度计算出需要上样的体积Ｖ，而后加入ＯｌｉｇｏｄＴ１μＬ，用ＤＥＰＣ补足，总体积定为１６μＬ。

短暂离心后，接着７０℃水浴约５ｍｉｎ，迅速置于冰上至少１ｍｉｎ。

接着加入其它成分（包括５×ｂｕｆｆｅｒ５μＬ，ｄＮＴ Ｐｍｉｘ３μＬ，Ｍ ＭＬＶ１μＬ），最后总体积为２５μＬ，离心后４２℃水浴（６０ｍｉｎ），然后８５℃水浴（７ｍｉｎ），从而得到ｃＤＮＡ样本。

ＰＣＲ过程：反应体系总体积为２５μＬ，包括有１２．５μＬＰＣＲ混合液，加入上、下游引物各１μＬ，ｃＤＮＡ的上样量为１ ５μＬ，最后体积定为２５μＬ（用无菌水补足）。

内参为ＧＡＰＤＨ。

反应条件及引物序列见Ｔａｂ１。

经扩增、电泳、成像，最后半定量分析，每个样本均重复３次实验，以目的基因与内参之比作为其相对表达量。

１．５　Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验　（１）细胞的准备：上室加入细胞悬液２００μＬ，加药。

下室中，加入６００～７００μＬ培养基，孵箱中培养，时间为２４ｈ。

（２）细胞计数：取出培养板，弃培养液，ＰＢＳ洗２次。

再加入冰甲醇固定细胞（１０ｍｉｎ），用棉签擦去上室中未迁移的细胞，然后用苏木素染色５ｍｉｎ，蒸馏水冲洗，在显微镜下拍照（随机选取视野）并计数。

显微镜下计数细胞，统计学分析。

１．６　ＨＥ染色　将细胞接种于六孔板中，加药作用２４ｈ后，弃去上清，固定，染色。

１．７　统计学方法　结果以珋ｘ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１８ ０统计软件，进行单因素方差分析。

２　结果
２．１　ＢＭＬ １１１对Ｈｅｐ３Ｂ细胞形态的影响　Ｆｉｇ１Ａ所示，Ｈｅｐ３Ｂ细胞在未加任何刺激物的情况下，细胞呈多角形，多突起，细胞排列松散，体现了间质细胞的特点，即发生了上皮 间质转化（ＥＭＴ）。

而加入ＢＭＬ １１１后，细胞排列紧密，突起明显减少，体现了上皮细胞的特点。

而先加入受体阻断剂Ｂｏｃ ２后，ＢＭＬ １１１并不能使其恢复上皮细胞形态，说明ＢＭＬ １１１需要与受体结合发挥抑制ＥＭＴ作用。

２．２　ＢＭＬ １１１对Ｈｅｐ３Ｂ细胞迁移的影响　Ｆｉｇ１Ｂ１及Ｂ２所示，在Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验中，３组穿膜细胞数分别为４４ ６６６７±１１ ２３８９１、１８ ６６６７±５ ５０７５７和４４ ３３３３±１１ ９３０３５。

空白组Ｈｅｐ３Ｂ穿膜细胞的数目较多，而加入ＢＭＬ １１１后，细胞数减少显著（Ｐ＝０ ０１９），说明细胞迁移作用能被ＢＭＬ １１１抑制。

ＢＭＬ １１１作用能被Ｂｏｃ ２阻断（Ｐ＝０ ０２０）。

Ｆｉｇ１　ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１ｏｎＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ（Ｂａｒ＝２０μｍ，珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｐ＜０ ０５ｖｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢＭＬ １１１ｇｒｏｕｐ
２．３　ＢＭＬ １１１对Ｈｅｐ３Ｂ５ ＬＯＸ表达及细胞定位的影响　Ｆｉｇ２Ａ，Ｂ所示，在免疫荧光实验中，空白组Ｈｅｐ３Ｂ５ ＬＯＸ主要定位于细胞质和细胞核，加入ＢＭＬ １１１后，５ ＬＯＸ表达明显减少（Ｐ＝０ ０００），并且主要定位于细胞质。

而用Ｂｏｃ ２预处理后，再加入ＢＭＬ １１１，并不能抑制５ ＬＯＸ的表达（Ｐ＝０ ０００）。

Ｔａｂ１　ＬｉｓｔｏｆｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｕｓｅｄａｓＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ＴａｒｇｅｔｇｅｎｅｓＰｒｉｍｅｒｓｓｅｑｕｅｎｃｅｐａｉｒｓ
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ＩｎｉｔｉａｌｍｅｌｔＭｅｌｔＡｎｎｅａｌＥｘｔｅｎｄＣｙｃｌｅｓ
ＭＭＰ ２５′ ＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＣ ３′
５′ ＴＣＣＧＴＣＣＴＴＡＣＣＧＴＣＡＡＡ ３′
９４℃，５ｍｉｎ９５℃，３０ｓ５７℃，４５ｓ７２℃，３０ｓ３５ＭＭＰ ９５′ ＧＡＣＴＣＧＧＴＣＴＴＴＧＡＧＧＡＧＣＧ ３′
５′ ＧＡＡＣＴＣＡＣＧＣＧＣＣＡＧＴＡＧＡＡ ３′
９４℃，５ｍｉｎ９５℃，３０ｓ５６℃，４５ｓ７２℃，３０ｓ３５
ＧＡＰＤＨ５′ ＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＧ ３′５′ ＴＴＣＡＡＧＧＧＧＴＣＴＡＣＡＴＧＧＣＡＡＣＴＧ ３′９４℃，５ｍｉｎ９５℃，３０ｓ５６℃，４５ｓ７２℃，３０ｓ３５
·
５
７
７
·
中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ｊｕｎ；３６（６）
Ｆｉｇ２　ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１ｏｎＨｅｐ３Ｂ５ ＬＯＸｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｅｌｌｌｏｃａｔｉｏｎ（Ｂａｒ＝２０μｍ，珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｐ＜０ ０５ｖｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢＭＬ １１１ｇｒｏｕｐ
２．４　ＢＭＬ １１１下调５ ＬＯＸ进而抑制ＭＭＰ ２、ＭＭＰ ９ｍＲＮＡ表达　如Ｆｉｇ３Ａ１及Ａ２所示，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验中，空白组、ＢＭＬ １１１组及ＢＭＬ
１１１＋Ｂｏｃ ２组５ ＬＯＸ的蛋白表达量（以与内参的灰度值比较）分别为１ ５６３７±０ １１６２９、０ ４４３３±０ １１０６０和１ ６１６７±０ １３７９６。

在ＢＭＬ １１１的作用下，５ ＬＯＸ的蛋白表达量明显减少，与空白组比较，差异有显著性（Ｐ＝０ ０００）。

而用Ｂｏｃ ２预处理可阻断其作用，５ ＬＯＸ并不减少（Ｐ＝０ ０００）。

如Ｆｉｇ３Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３所示，在ＲＴ ＰＣＲ实验中，空白组ＭＭＰ ２、ＭＭＰ ９的表达量分别为０ ５４３３±０ ０７０９５和０ ７９３３±０ ０４５０９，加入ＢＭＬ １１１后，两者的表达量明显减少，分别为０ １１００±０ ０３０００和０ ３９６７±０ ０４７２６，与空白组比，差异均有显著性（Ｐ值均为０ ０００）。

而加入Ｂｏｃ ２预处理后，再加入ＢＭＬ １１１，两者的表达量分别为０ ５５６７±０ １０９７０和０ ８１３３±０ ０７５０６，与ＢＭＬ １１１组比，差异均有显著性（Ｐ值均为０ ０００）。

３　讨论
肝癌是国内常见的恶性上皮性肿瘤，其主要特征是生长迅速，早期发现困难，发现时往往为晚期，患者预后极差。

如何抑制肿瘤转移是当前肿瘤研究的热点。

肿瘤细胞由原发部位首先发生ＥＭＴ转变，进而发生迁移、累及并侵犯周围组织，侵入脉管（包
括血管和淋巴管），转移至远隔脏器。

而众所周知，肝癌与慢性肝炎、肝硬化（乙肝、丙肝所致）关系密切。

持续的慢性炎症所致肝细胞的增生是肝癌发生的主要原因，因而，如何抑制肝癌组织内的慢性炎症是抑制肝癌的治疗靶点。

脂氧素由花生四烯酸合成，
是体内最重要的免
Ｆｉｇ３　ＭＭＰ ２ａｎｄＭＭＰ ９ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＢＭＬ １１１ｖｉａｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ５ ＬＯＸ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｐ＜０ ０５ｖｓＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢＭＬ １１１ｇｒｏｕｐ
·
６７７·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ｊｕｎ；３６（６）
疫自稳物质，对炎症的消退及抗肿瘤方面都发挥着重要的功能，是体内调控免疫自稳的重要物质。

我们课题组近年来研究发现，脂氧素及其类似物对肝损伤
［５］
及肝癌
［８］
均具有调控作用。

但由于脂氧素
的半衰期短，性质不稳定，不适合实验动物研究。

而脂氧素类似物Ｂ
ＭＬ １１１在结构上具有与脂氧素相同的功能基团，而性质又相对稳定，因此被广泛应用于实验研究。

５ ＬＯＸ是脂氧素合成过程中的最重要的酶类，并且参与了肿瘤演进过程。

有研究证明，５ ＬＯＸ在多种恶性肿瘤中高表达，并且调控了肿瘤演进的多个过程，研究５ ＬＯＸ的抑制剂成为抗肿瘤研究的热点
［１０－１４］。

侵袭和迁移是恶性肿瘤的重要特
征，与肿瘤的进展与预后密切相关。

而我们的研究发现，ＢＭＬ １１１能有效抑制肝癌细胞ＥＭＴ和迁移，ＢＭＬ １１１在蛋白水平能明显抑制５ ＬＯＸ的表达，并且通过其受体发挥作用。

ＭＭＰ ２和ＭＭＰ ９与肿瘤迁移密切相关，所以我们进一步在ｍＲＮＡ水平研究了ＢＭＬ １１１是否能抑制ＭＭＰ ２和ＭＭＰ ９的表达，结果与我们预期的一致。

综上所述，ＢＭＬ １１１的抗肝癌作用可能是调控多通路、多靶分子的功能。

我们的研究为其抗肿瘤研究提供了新的思路，５ ＬＯＸ可作为肿瘤治疗的靶点，ＢＭＬ １１１抗肝癌机制非常复杂，尚需进一步深入并多方面研究。

（本实验是在南昌乐悠生物有限公司实验平台完成，感谢何远桥老师及其团队所给予的支持和帮助）
参考文献：
［１］　ＣｈｅｎＹ，ＺｈｅｎｇＹ，ＸｉｎＬ，ｅｔａｌ．１５ ｅｐｉ ｌｉｐｏｘｉｎＡ４ｉ
ｎｈｉｂｉｔｓＴＮＦ α ｉｎｄｕｃｅｄｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｉａｔｈｅＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＮＦ κＢａｘｉｓｉｎｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈ ｅｒ，２０１９，１１７：１０９０９９．
［２］　ＷｕＱ，ＣｈｏｎｇＬ，ＳｈａｏＹ，ｅｔａｌ．ＬｉｐｏｘｉｎＡ４ｒｅｄｕｃｅｓｈｙｐｅｒｏｘｉａ ｉｎ
ｄｕｃｅｄｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｎｅｏｎａｔａｌｒａｔｓｔｈｒｏｕｇｈＰＩＮＫ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈ ｗａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，７３：４１４－２３．
［３］　ＺｈａｎｇＴ，ＨａｏＨ，ＺｈｏｕＸＹ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｌｉｐｏｘｉｎｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒ
ｉｍｍｕｎｅｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓＯｔｈｅｒＬｉｐｉｄＭｅｄｉ ａｔ，２０１９，１４４：１０６３４１．
［４］　ＬｉｕＺ，ＱｕＭ，ＹａｎｇＱ，ｅｔａｌ．ＬｉｐｏｘｉｎＡ４ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｒｅｎａｌｉｓｃｈａｅ
ｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＥｘｐＰｈａｒｍａｃｏｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１９，４６（１）：６５－７４．
［５］　ＣｈｅｎＱＦ，ＨａｏＨ，ＫｕａｎｇＸＤ，ｅｔａｌ．ＢＭＬ １１１，ａｌｉｐｏｘｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ
ａｇｏｎｉｓｔ，ｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔａｃｕｔｅｉｎｊｕｒｙｖｉａｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｒｅｎｉｎａｎｇｉｏ ｔｅｎｓｉｎ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓＯｔｈｅｒＬｉｐｉｄＭｅｄｉａｔ，２０１９，１４０：９－１７．
［６］　ＬｉｕＨ，ＺｈｏｕＫ，ＬｉａｏＬ，ｅｔａｌ．ＬｉｐｏｘｉｎＡ４ｒｅｃｅｐｔｏｒａｇｏｎｉｓｔＢＭＬ
１１１ｉｎｄｕｃｅｓａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｓｆｒｏｍａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＲｅｓｐｉｒＲｅｓ，２０１８，１９（１）：２４３．
［７］　ＺｈａｎｇＫ，ＨｕＭ，ＺｈａｎｇＬ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１ｉｎｐｒｅ
ｅｃｌａｍｐｓｉａｒａｔｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｌｏｗｄｏｓｅｏｆｃａｄｍｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ［Ｊ］．ＡＪＰＲｅｐ，２０１９，９（３）：ｅ２０１－８．
［８］　ＸｕＦ，ＺｈｏｕＸ，ＨａｏＪ，ｅｔａｌ．ＬｉｐｏｘｉｎＡ４ａｎｄｉｔｓａｎａｌｏｇｓｕｐｐｒｅｓｓ
ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｖｉａｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｉｎｔｅｇｒｉｎ ｌｉｎｋｅｄｋｉｎａｓｅａｘｉｓ［Ｊ］．ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓＯｔｈｅｒＬｉｐｉｄＭｅｄｉａｔ，２０１８，１３７：９－１９．
［９］　戴　华，李里香，郝　华，等．ＢＭＬ １１１下调骨桥蛋白对脂多糖
诱导的Ｈ
ｅｌａ细胞增殖的影响及其机制［Ｊ］．实用医学杂志，２０１５，３１（３）：３４４－７
［９］　ＤａｉＨ，ＬｉＬＸ，ＨａｏＨ，ｅｔａｌ．ＢＭＬ １１１ｉｎｈｉｂｉｔｓＬＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ
ＨｅｌａｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＯＰＮ［Ｊ］．ＪＰｒａｃｔＭｅｄ，２０１５，３１（３）：３４４－７
［１０］ＬｉＺ，ＷａｎｇＺＣ，ＬｉＸ，ｅｔａｌ．Ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ
ｎｏｖｅｌｄｉａｒｙｌ １，５ ｄｉａｚｏｌｅｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｂｅａｒｉｎｇｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅａｓｐｏｔｅｎｔｄｕａｌＣＯＸ ２／５ ＬＯＸｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｎｄａｎｔｉｔｕｍｏｒａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪＭｅｄＣｈｅｍ
，２０１９，１（１６９）：１６８－８４．［１１］ＬｕＸ，ＨｕａｎｇＬ，ＺｈａｎｇＷ，ｅｔａｌ．Ｔｅｐｏｘａｌｉｎａｄｕａｌ５ ＬＯＸ ＣＯＸｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒａｎｄｅｒｌｏｔｉｎｉｂａｎＥＧＦＲｉｎｈｉｂｉｔｏｒｈａｌｔｓｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｎｔｕｍｏｒｘｅｎｏｇｒａｆｔｍｉｃｅ［Ｊ］．ＡｍＪＴｒａｎｓｌＲｅｓ，２０１８，１０（１１）：３８４７－５６．
［１２］ＭｅｒｃｈａｎｔＮ，ＢｈａｓｋａｒＬＶＫＳ，ＭｏｍｉｎＳ，ｅｔａｌ．５ Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ：Ｉｔｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔＲｅｖＯｎｃｏｌＨｅｍａｔｏｌ，２０１８，１２７：５０－５．
［１３］ＣｈａｎｇＪ，ＴａｎｇＮ，ＦａｎｇＱ，ｅｔａｌ．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＣＯＸ ２ａｎｄ５ ＬＯＸ
ｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇＰＴＥＮａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇＰＩ３Ｋ／ＡＫＴｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２０１９，５１７（１）：１－７．
［１４］ＧａｕｔａｍＳ，ＲｏｙＳ，ＡｎｓａｒｉＭＮ，ｅｔａｌ．ＤｕＣＬＯＸ ２／５ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ：ａ
ｐｒｏｍｉｓｉｎｇｔａｒｇｅｔｆｏｒｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ，２０１７，２４（２）：１８０－９０．
［１５］徐　珊，周　游，刘钰妮，等．力达霉素对人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞
周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化能力的影响［Ｊ］．中国药理学通报，２０１９，３５（１０）：１４０６－１５．
［１５］ＸｕＳ，ＺｈｏｕＹ，ＬｉｕＹＮ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｉｄａｍｙｃｉｎｏｎｃｅｌｌｃｙｃｌｅ，
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣｈｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＢｕｌｌ，２０１９，３５（１０）：１４０６－１５．
ＢＭＬ １１１ｉｎｈｉｂｉｔｓＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｖｉａ５ ＬＯＸｐａｔｈｗａｙａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ＸＵＦｅｎ１，ＨＡＯＨｕａ２，ＷＵＤｅ ｑｉａｎｇ３，ＷＡＮＧＱｉｎｇ ｙｕ２，ＬＩＬｉ ｘｉａｎｇ２，ＸＵＪｉｎｇ２，ＬＩＮＬａｎ２，ＦＥＮＧＹｕ
２
（１．ＤｅｐｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，２．ＤｅｐｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，３．ＤｅｐｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆ
ＮａｎｃｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３０００６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ　ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１ｏｎｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｌｉｎｅｓａｎｄｐｏｓｓｉｂｌｅｕｎ
·
７７７·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ｊｕｎ；３６（６）
ｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ：Ｃｏｎｔｒｏｌ，ＢＭＬ １１１ａｎｄＢＭＬ １１１＋Ｂｏｃ ２（ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＦＰＲ２）ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄａｆｔｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１ｏｎｍｉｇｒａ ｔｉｏｎｏｆＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙ．５ ＬＯＸｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｌｏｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ａｎｄｉｎＲＴ ＰＣＲｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ＭＭＰ ２ａｎｄＭＭＰ ９ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓ，ｃｅｌｌｓｓｈｏｗｅｄｌｏｓｓｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｂｅｃａｍｅｄｉｓｓｏｃｉａ ｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｌｕｓｔｅｒｓａｎｄａｃｑｕｉｒｅｄａｍｅｓｅｎ ｃｈｙｍａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅａｐｒｏｃｅｓｓｃａｌｌｅｄｔｈｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎ ｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）；ｈｏｗｅｖｅｒ，Ｂｏｃ ２ｃｏｕｌｄｂｌｏｃｋｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１，ａｎｄｃｅｌｌｓｒｅｖｅｒｔｅｄｔｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｃｏｎｔｒｏｌ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，Ｂｏｃ ２ｃｏｕｌｄｂｌｏｃｋｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＬ １１１．ＢＭＬ １１１ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｓｉｎｔｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙ．ＢＭＬ １１１ｄｅｃｒｅａｓｅｄ５ ＬＯＸｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｄｉｔｔｏｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｔｏｃｙ ｔｏｐｌａｓｍ，ｗｈｉｌｅＢｏｃ ２ｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｉｔｔｏｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｔｏｎｕｃｌｅｕｓ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ＢＭＬ １１１ｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅ５ ＬＯＸｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｔｓｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｍｏｌｅｃｕｌｅ，ｓｕｃｈａｓＭＭＰｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＢＭＬ １１１ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｓＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｖｉａ５ ＬＯＸｐａｔｈｗａｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：５ ＬＯＸ；ＢＭＬ １１１；ｍｉｇｒａｔｉｏｎ；ＥＭＴ；ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ；ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
网络出版时间：２０２０－５－２５１４：４４　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．ｒ．２０２００５２２．０８５４．０１８．ｈｔｍｌＰ２ＲＸ７介导的细胞焦亡和凋亡参与ＴＳＡ缓解的
烟草烟雾暴露所致的小鼠子宫损伤过程
丛艳飞，丁晶晶，李　芳，王莉莉
（中国医科大学附属盛京医院实验研究中心，辽宁省环境与代谢疾病动物模型研究与应用重点实验室，辽宁本溪　１１７０００）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２０．０６．００９
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２０）０６－０７７８－０６中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ１２２．７；Ｒ１６３；Ｒ３２２ ６５；Ｒ３２９ ２５；Ｒ３９２ １１；Ｒ９７７ ６
摘要：目的　探索Ｐ２ＲＸ７介导的细胞焦亡和凋亡是否参与了曲古抑菌素Ａ（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎＡ，ＴＳＡ）缓解的烟草烟雾（ｃｉｇａ ｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ，ＣＳ）暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程。

方法　通过烟草烟雾（ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ，ＣＳ）暴露３０ｄ方法制备ＣＳ暴露小鼠模型，ＣＳ暴露的同时给予ＴＳＡ进行治疗；ＨＥ染色观察ＣＳ暴露后小鼠子宫组织形态学变化；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测小鼠子宫肌层Ｐ２ＲＸ７，细胞焦亡相关蛋白（ＩＬ １β、ＡＳＣ、ＮＬＲＰ３和ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ １）和细胞凋亡相关蛋白（ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ３和ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ９）的表达水平；Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ技术检测Ｈｄａｃ１，Ｐ２ｒｘ７，Ｉｌ １β和Ａｓｃ的ｍＲＮＡ转录活性。

结果　ＨＥ染色结果显示，ＣＳ暴露后小鼠子宫肌层明显变薄，间质细胞和腺体数量明显减少；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＴＳＡ明
收稿日期：２０２０－０１－１９，修回日期：２０２０－０３－１０
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１９７１４５９）；辽宁省自然科学基金资助项目（Ｎｏ２０１９ ＭＳ ３６１）
作者简介：丛艳飞（１９９４－），女，硕士生，研究方向：先天畸形发育遗传学，Ｅ ｍａｉｌ：１０８４２７８４５９＠ｑｑ．ｃｏｍ；
王莉莉（１９７７－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向：
先天畸形发育遗传学，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｌｌ＿１９７７＿２１＠
１６３．ｃｏｍ显抑制了ＣＳ暴露诱导的小鼠子宫组织Ｐ２ＲＸ７、细胞焦亡和凋亡相关蛋白的表达；Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ结果显示，ＴＳＡ抑制了ＣＳ暴露诱导的小鼠子宫组织中Ｈｄａｃ１，Ｐ２ｒｘ７和Ａｓｃ的ｍＲ ＮＡ转录活性升高。

结论　Ｐ２ＲＸ７介导的细胞焦亡和凋亡参与了ＴＳＡ缓解的ＣＳ暴露所致的小鼠子宫损伤过程。

关键词：烟草烟雾暴露；细胞焦亡；细胞凋亡；子宫；Ｐ２ＲＸ７；ＴＳＡ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
近年来，主动吸烟和被动吸烟的人数在全世界范围内增加，女性暴露于二手烟的现象非常普遍，育龄期妇女吸烟率呈明显上升趋势［１］。

在吸烟时，烟草烟雾（ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｅ，ＣＳ）中的有害物质会通过呼吸道的粘膜进入人体的各个器官和组织造成全身性的伤害，例如ＣＳ中的有毒物质通过降低胚胎植入率，减少卵巢中类固醇激素的生成和卵泡数量等，影响女性生殖的各个阶段［２］。

ＣＳ混合物中的有毒物质也可导致子宫发育受损，子宫是哺乳动物重要的生殖器官，主要由３种类型的细胞（上皮细胞，基质细胞和子宫肌层细胞）组成。

研究发现，口服尼古
·
８
７
７
·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ｊｕｎ；３６（６）：７７８～８３。