解郁安神颗粒微生物限度检查方法验证
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论 ： 方 法 可 用 于解 郁 安 神 颗 粒 微 生 物 限 度检 查 。 该
【 关键词 】 解郁安神颗粒
微生物限度检 查 方法验证
解 郁 安 神 颗 粒 由柴 胡 、大 枣 、石 菖 蒲 、半 夏 （ ） 白术 （ ） 浮小 麦 、 志 （ ）甘 草 （ ） 栀 子 制 、 炒 、 远 制 、 炙 、 （ ）百 合 、 南 星 、 炒 、 胆 郁金 、 齿 、 龙 酸枣 仁 （ ）茯 苓 、 炒 、 当归 １ 中药 组成 ； ６味 具有 舒 肝 解郁 ， 安神 定 志 的 功 能 。用 于情 志 不舒 、 郁 气滞 等 精 神刺 激 所 致 的 心 肝 烦 ， 虑 、 眠 、 忘 、 年 期 症 候 群 ， 经 官 能 症 焦 失 健 更 神 等 。 目前各 国药 典对 口服 制剂 的微 生物 污染状 况有 明确 的质控 指标 】 。在对具 有抗 菌 活性 的药 品进行 微 生 物 限度 检测 时 ， 首 先 消 除其抗 菌 活性 ， 通过 应 并
１ 方 ． ２ 法
１ ． 菌 液 制 备 取 经 ３ ℃培 养 ２ ｈ的金 黄 色 葡 ．１ ２ ７ ４ 萄球 菌 、 肠 埃 希 菌 、 草 芽孢 杆 菌 肉 汤 培养 物 各 大 枯 ｌｌ ｍ ，取经 ２ ℃培 养 ４ ｈ的 白色 念珠 菌 液体 培 养物 ５ ８ ｌ ｌ分 别 加 ９ ｌ ． ｍ， ｍ ９ ０ ％无 菌 氯 化 钠 溶 液 ， １ 递 按 Ｏ倍 增 稀 释法 稀释 至 １ ～ｌ ， ０ ０ 制成 每 １ 含 ５ ｍｌ ０～１０ ０ ｃｕ菌 悬 液 ；取 经 ２ ℃培 养 ７ ｆ ５ ｄ的黑 曲霉 斜 面培 养 物 ， ３～５ ０９ 加 ｍ１．％无 菌 氯化 钠溶 液 ， 洗下 霉 菌孢 子 ， 吸 出孢 子 悬液 ， 用标 准 比浊 管 比浊 ， 与浊 度 相 当后 ， 取 ｌｌ ｍ 至无 菌 试 管 内 ，加 ９ ｌ ．％无 菌 氯 化 钠 溶 ｍ ９ ０ 液 ， 管 １ 稀 释 至 ｌ’ 制成 每 １ 含 ５ 逐 ０倍 ０， ４ ｍｌ ０～１０ ０ ｃ ｆ 悬液 ， ｕ菌 备用 。
作者单位 ： 医学 高等专科学校 合肥 ２００ 安徽 ３６１
２ １ — ５ ０ 收稿 ， ０ ０ ０ — ７修 回 ００ ０ — ７ ２１—６ １
１ ． 供 试 液 制 备 称 取 解 郁 安 神 颗 粒 供 试 样 品 ．２ ２ １ｇ ０ ，加 ４ ℃ 无菌 ｐ ７ ５ Ｈ． ０的氯化钠 一蛋白胨缓冲液 稀释 至 １０ ｌ混 匀 ， ０ｍ ， 制成 １： ０供试 液 ， １ 备用 。 １ ． 细菌 、 ．３ ２ 霉菌 及酵母 菌 计数方 法 的验证 １ ．． 平 皿法 ： 别取 供试 液及 上述 ５种试 验 菌株 ． ３１ ２ 分 菌液 ｌ ｌ 入平 皿 中 ，然 后 每皿加 营养 琼脂 培养 基 ｍ加 或玫 瑰 红钠 琼脂 培 养基 ２ ｍ ， 匀 ， 凝 固后 ， ０ ｌ摇 待 置规 定温 度 培养 ２ ４～７ ２小 时观 察 结 果 ， 菌落 计 数 ， 定 测 回收率 。 １ ．． 培养 基稀 释 法 ：分 别 取 供试 液 ０５ 、．ｍ ．３２ ２ ． ０２ ｌ ｍｌ 及 上述 ５种试 验 菌株 菌 液 ｌ ｌ加 入平 皿 中 ， ｍ， 然后 每 皿 加 营养 琼脂 培 养基 或 玫瑰 红 钠琼 脂 培养 基 ２ ｍ ， ０ｌ 摇 匀 ， 凝 固后 ， 规定 温 度 培 养 ２ 待 置 ４～７ ２小 时观察 结果 ， 菌落计 数 ， 测定 回收 率 。 １． ．３ ２ ３ 薄 膜 过 滤 法 ：取 １： ０供 试 液 ｌ 加 至 １ ｍｌ ４ ℃ １０ 的 ｐ ７０无 菌 氯 化 钠 一蛋 白胨 缓 冲液 ５ ０ｍｌ Ｈ． 中 ， 部 通过 开 放式 滤 器 （ 先用 冲洗 液润 湿 ） ， 全 滤膜 中 用 ４ ℃ ３ ０ ｌＨ ． 菌氯 化 钠 一蛋 白胨 缓 冲液 冲 ５ ０ ｍｐ ７０无 洗 ，０ ｍ／ ，在最 后一 次 冲洗 液 中加入 上述 ５ １０ ｌ次 ０～ １０ ｆ ０ｃ ｕ的试 验 菌 ， 冲洗 完毕 后 ， 滤干 ， 出滤 膜贴 于 取 规定 的琼 脂培 养基 上 ， 置规 定温度 培 养 ２ ７ ４～ ２小时 观察 结果 ， 落计 数 ， 定 回收率 。 菌 测 １ ．． 回收率 的计 算 试 验组 菌 回收率 （ ＝『试 ．３ ２ ４ ％） （ 验组平均菌落数 一供试品对照组平均菌落数） 菌 ／ｆ 液组 的平 均菌 落数 ） 】×１０ ０ ％ １ ． 控 制 菌检 查 方 法验 证 本 品为 口服 制剂 ， ．４ ２ 不 含生 药和动 物药 ， 照 《 参 中国药 典￣０ ５ 版 ， 制菌 ２０ 年 控 需对 大肠 埃希 菌进行检 查［ ４ １ 。结合细 菌计 数检测 的验 证实 验 结果 ， 直 接接 种 法 对其 进 行 验证 ， １： ０ 按 取 １ ， 加入 上述 ５ ０～１０ｆ ０ｃ ｕ的试验 菌 ， ３ ％培养 ２ 时 ， 置 ５ ４小 按 相 应 的控制 菌 的检查 法 检查 ， 验组应 检 出大肠埃 试 希菌 ； 阴性 菌对 照组 （ 黄色 葡萄球 菌 ） 得检 出。 金 不
实验验证以保证检验结果的有效性。考虑该药品部 分 有效 成 分具 有 抑 制微 生 物生 长 作 用 ， 能 影 响其 可 微 生物 限度检 查结 果 的可靠 性 。为建 立快 速有 效 的 微 生物 限度 检测 方 法 ， 参照 《 国药 典 ￣０ ５年 版方 中 ２０ 法， 对其 微生 物 限度检查 法 进行 了方 法验证 。
安徽卫生职业技术学院学报 ２ １ ０ ０年第 ９卷第 ４期
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７ ・ ７
解郁安神颗粒微生物限度检 查方法验证
蒋 大 圆 邾枝 花
【 中图分类号 】 Ｒ ７ 【 ９１ 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 １７ — ０ ４２ １）４ ０ ７ — ２ ６ １８ ５ （０ ００ — ０ ７ ０ 【 要 】 目的： 摘 建立解郁安神颗粒微 生物限度检查法。方法： 参照 中国药典收载 方法试验 ， 以回收率对方法有效性进行评 价。 结果： 采用平皿 法进行霉 菌及酵母菌计数 ， 用薄膜过滤法进 行细菌计数 ， 采 采用直接接种 法进行 大肠埃希茵检查。 结
１ 仪 器 与 材 料
１１ 仪 器 和 滤器 ：Ｙ ｕ 智 能 集 菌仪 ，开 放式 无 菌 ． Ｔ —＿ Ｉ 试验过滤培养器 样 品来源 ： 解郁安神颗粒 ， 自制 ； 培 养基 ： 胆盐 乳 糖培 养 基 、 玫瑰 红 钠 琼脂 培 养 基 、 养 营 琼脂 培 养基 、 营养 肉汤培 养 基 、 良马丁 培 养 基 、 改 改 良马 丁 琼 脂 培 养 基 等均 由北 京 三药 科 技 开 发公 司 提供 ； 证试 验用 菌 种 ： 验 金黄 色 葡萄 球 菌 ｆＭＣ （ Ｃ Ｃ Ｂ） ２ ０ ３、 草 芽 孢 杆 菌 ［ＭＣ Ｂ ６ ５ １、 肠 埃 希 ６ ０ 】枯 Ｃ Ｃ（ ） ３ ０ ］大 菌 ［ＭＣ （ ４ １ ２、 Ｃ Ｃ Ｂ）４ ０ ］白色念珠 菌 ［ ＭＣ （ ）８ ０ 】 Ｃ Ｃ Ｆ ９ ０ １、 黑 曲霉 ［ＭＣ （ ）８０１中 国药 品生 物 制 品检 定所 Ｃ Ｃ Ｆ ９０ ３， 提供 。
【 关键词 】 解郁安神颗粒
微生物限度检 查 方法验证
解 郁 安 神 颗 粒 由柴 胡 、大 枣 、石 菖 蒲 、半 夏 （ ） 白术 （ ） 浮小 麦 、 志 （ ）甘 草 （ ） 栀 子 制 、 炒 、 远 制 、 炙 、 （ ）百 合 、 南 星 、 炒 、 胆 郁金 、 齿 、 龙 酸枣 仁 （ ）茯 苓 、 炒 、 当归 １ 中药 组成 ； ６味 具有 舒 肝 解郁 ， 安神 定 志 的 功 能 。用 于情 志 不舒 、 郁 气滞 等 精 神刺 激 所 致 的 心 肝 烦 ， 虑 、 眠 、 忘 、 年 期 症 候 群 ， 经 官 能 症 焦 失 健 更 神 等 。 目前各 国药 典对 口服 制剂 的微 生物 污染状 况有 明确 的质控 指标 】 。在对具 有抗 菌 活性 的药 品进行 微 生 物 限度 检测 时 ， 首 先 消 除其抗 菌 活性 ， 通过 应 并
１ 方 ． ２ 法
１ ． 菌 液 制 备 取 经 ３ ℃培 养 ２ ｈ的金 黄 色 葡 ．１ ２ ７ ４ 萄球 菌 、 肠 埃 希 菌 、 草 芽孢 杆 菌 肉 汤 培养 物 各 大 枯 ｌｌ ｍ ，取经 ２ ℃培 养 ４ ｈ的 白色 念珠 菌 液体 培 养物 ５ ８ ｌ ｌ分 别 加 ９ ｌ ． ｍ， ｍ ９ ０ ％无 菌 氯 化 钠 溶 液 ， １ 递 按 Ｏ倍 增 稀 释法 稀释 至 １ ～ｌ ， ０ ０ 制成 每 １ 含 ５ ｍｌ ０～１０ ０ ｃｕ菌 悬 液 ；取 经 ２ ℃培 养 ７ ｆ ５ ｄ的黑 曲霉 斜 面培 养 物 ， ３～５ ０９ 加 ｍ１．％无 菌 氯化 钠溶 液 ， 洗下 霉 菌孢 子 ， 吸 出孢 子 悬液 ， 用标 准 比浊 管 比浊 ， 与浊 度 相 当后 ， 取 ｌｌ ｍ 至无 菌 试 管 内 ，加 ９ ｌ ．％无 菌 氯 化 钠 溶 ｍ ９ ０ 液 ， 管 １ 稀 释 至 ｌ’ 制成 每 １ 含 ５ 逐 ０倍 ０， ４ ｍｌ ０～１０ ０ ｃ ｆ 悬液 ， ｕ菌 备用 。
作者单位 ： 医学 高等专科学校 合肥 ２００ 安徽 ３６１
２ １ — ５ ０ 收稿 ， ０ ０ ０ — ７修 回 ００ ０ — ７ ２１—６ １
１ ． 供 试 液 制 备 称 取 解 郁 安 神 颗 粒 供 试 样 品 ．２ ２ １ｇ ０ ，加 ４ ℃ 无菌 ｐ ７ ５ Ｈ． ０的氯化钠 一蛋白胨缓冲液 稀释 至 １０ ｌ混 匀 ， ０ｍ ， 制成 １： ０供试 液 ， １ 备用 。 １ ． 细菌 、 ．３ ２ 霉菌 及酵母 菌 计数方 法 的验证 １ ．． 平 皿法 ： 别取 供试 液及 上述 ５种试 验 菌株 ． ３１ ２ 分 菌液 ｌ ｌ 入平 皿 中 ，然 后 每皿加 营养 琼脂 培养 基 ｍ加 或玫 瑰 红钠 琼脂 培 养基 ２ ｍ ， 匀 ， 凝 固后 ， ０ ｌ摇 待 置规 定温 度 培养 ２ ４～７ ２小 时观 察 结 果 ， 菌落 计 数 ， 定 测 回收率 。 １ ．． 培养 基稀 释 法 ：分 别 取 供试 液 ０５ 、．ｍ ．３２ ２ ． ０２ ｌ ｍｌ 及 上述 ５种试 验 菌株 菌 液 ｌ ｌ加 入平 皿 中 ， ｍ， 然后 每 皿 加 营养 琼脂 培 养基 或 玫瑰 红 钠琼 脂 培养 基 ２ ｍ ， ０ｌ 摇 匀 ， 凝 固后 ， 规定 温 度 培 养 ２ 待 置 ４～７ ２小 时观察 结果 ， 菌落计 数 ， 测定 回收 率 。 １． ．３ ２ ３ 薄 膜 过 滤 法 ：取 １： ０供 试 液 ｌ 加 至 １ ｍｌ ４ ℃ １０ 的 ｐ ７０无 菌 氯 化 钠 一蛋 白胨 缓 冲液 ５ ０ｍｌ Ｈ． 中 ， 部 通过 开 放式 滤 器 （ 先用 冲洗 液润 湿 ） ， 全 滤膜 中 用 ４ ℃ ３ ０ ｌＨ ． 菌氯 化 钠 一蛋 白胨 缓 冲液 冲 ５ ０ ｍｐ ７０无 洗 ，０ ｍ／ ，在最 后一 次 冲洗 液 中加入 上述 ５ １０ ｌ次 ０～ １０ ｆ ０ｃ ｕ的试 验 菌 ， 冲洗 完毕 后 ， 滤干 ， 出滤 膜贴 于 取 规定 的琼 脂培 养基 上 ， 置规 定温度 培 养 ２ ７ ４～ ２小时 观察 结果 ， 落计 数 ， 定 回收率 。 菌 测 １ ．． 回收率 的计 算 试 验组 菌 回收率 （ ＝『试 ．３ ２ ４ ％） （ 验组平均菌落数 一供试品对照组平均菌落数） 菌 ／ｆ 液组 的平 均菌 落数 ） 】×１０ ０ ％ １ ． 控 制 菌检 查 方 法验 证 本 品为 口服 制剂 ， ．４ ２ 不 含生 药和动 物药 ， 照 《 参 中国药 典￣０ ５ 版 ， 制菌 ２０ 年 控 需对 大肠 埃希 菌进行检 查［ ４ １ 。结合细 菌计 数检测 的验 证实 验 结果 ， 直 接接 种 法 对其 进 行 验证 ， １： ０ 按 取 １ ， 加入 上述 ５ ０～１０ｆ ０ｃ ｕ的试验 菌 ， ３ ％培养 ２ 时 ， 置 ５ ４小 按 相 应 的控制 菌 的检查 法 检查 ， 验组应 检 出大肠埃 试 希菌 ； 阴性 菌对 照组 （ 黄色 葡萄球 菌 ） 得检 出。 金 不
实验验证以保证检验结果的有效性。考虑该药品部 分 有效 成 分具 有 抑 制微 生 物生 长 作 用 ， 能 影 响其 可 微 生物 限度检 查结 果 的可靠 性 。为建 立快 速有 效 的 微 生物 限度 检测 方 法 ， 参照 《 国药 典 ￣０ ５年 版方 中 ２０ 法， 对其 微生 物 限度检查 法 进行 了方 法验证 。
安徽卫生职业技术学院学报 ２ １ ０ ０年第 ９卷第 ４期
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７ ・ ７
解郁安神颗粒微生物限度检 查方法验证
蒋 大 圆 邾枝 花
【 中图分类号 】 Ｒ ７ 【 ９１ 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 １７ — ０ ４２ １）４ ０ ７ — ２ ６ １８ ５ （０ ００ — ０ ７ ０ 【 要 】 目的： 摘 建立解郁安神颗粒微 生物限度检查法。方法： 参照 中国药典收载 方法试验 ， 以回收率对方法有效性进行评 价。 结果： 采用平皿 法进行霉 菌及酵母菌计数 ， 用薄膜过滤法进 行细菌计数 ， 采 采用直接接种 法进行 大肠埃希茵检查。 结
１ 仪 器 与 材 料
１１ 仪 器 和 滤器 ：Ｙ ｕ 智 能 集 菌仪 ，开 放式 无 菌 ． Ｔ —＿ Ｉ 试验过滤培养器 样 品来源 ： 解郁安神颗粒 ， 自制 ； 培 养基 ： 胆盐 乳 糖培 养 基 、 玫瑰 红 钠 琼脂 培 养 基 、 养 营 琼脂 培 养基 、 营养 肉汤培 养 基 、 良马丁 培 养 基 、 改 改 良马 丁 琼 脂 培 养 基 等均 由北 京 三药 科 技 开 发公 司 提供 ； 证试 验用 菌 种 ： 验 金黄 色 葡萄 球 菌 ｆＭＣ （ Ｃ Ｃ Ｂ） ２ ０ ３、 草 芽 孢 杆 菌 ［ＭＣ Ｂ ６ ５ １、 肠 埃 希 ６ ０ 】枯 Ｃ Ｃ（ ） ３ ０ ］大 菌 ［ＭＣ （ ４ １ ２、 Ｃ Ｃ Ｂ）４ ０ ］白色念珠 菌 ［ ＭＣ （ ）８ ０ 】 Ｃ Ｃ Ｆ ９ ０ １、 黑 曲霉 ［ＭＣ （ ）８０１中 国药 品生 物 制 品检 定所 Ｃ Ｃ Ｆ ９０ ３， 提供 。