亚洲柑桔黄龙病简介

中文名：柑桔黄龙病
学名：Candidatus Liberibacter asiaticus Jagoueix et al.（Las）
异名：黄龙病（黄梢，yellow shoot），青果病（greening，南非），立枯病（likubin，中国台湾省），枯枝（Dieback，印度），叶片斑驳（leaf mottle，菲律宾），黄脉（vein phloem degeneration，印度尼西亚），黄枝（yellow branch），黄化斑驳（blotch-mottle）。

英文名：Citrus Huanglongbing, HLB
分类地位：真细菌（Eubacter）、薄壁菌门(Gracilicute)，韧皮部杆菌属（Liberibacter）韧皮部难养菌；
分布：HLB主要分布于亚洲东南亚地区，非洲的南非及东非，南美洲的巴西等40多个国家和地区。

美国佛罗里达州和德克萨斯州1998年发现柑桔木虱，2005正式宣布在佛州发现柑桔黄龙病。

在不同的国家或地区病害名称不同，如黄龙病（中国）、台湾（立枯病）、青果病（欧洲）、枯枝（印度）、叶斑（菲律宾）、黄脉（印尼）、黄枝、黄化斑驳或青果病(南非)。

主要分布于东南亚地区：中国、孟加拉国、马来西亚、尼泊尔、巴基斯坦、香港、日本、沙特阿拉伯、泰国、也门。

由于林孔湘先生（1956）在广东汕头地区首次证实柑桔黄龙病可以通过嫁接传播。

按照同源异症和命名优先原则，1995年国际上公认柑桔黄龙病的“Huanglongbing，HLB”作为病害的名称。

70年代以前我国仅4省区发病，近年来随着全球升温气候持续变暖、病害传媒柑桔木虱的越冬北界逐年北移、柑桔种质资源的频繁调运使得HLB在国内外柑桔黄龙病发病区域呈现扩展的趋势，国内已有11个柑桔种植省区不同程度的发病。

寄主：主要为芸香科植物，除柑桔外，九里香、黄皮、酒鞆陧都是它的自然感染寄主。

经过罹病的菟丝子还可以将黄龙病传播至长春花。

Manicom等依据主栽柑桔品种对黄龙病的抗感反应将其分为高度感病型（甜橙、柑桔tangelo、中国柑桔），中毒感病型（柚子、柠檬、酸橙）和抗病型（莱檬、枳壳）。

危害情况：柑桔黄龙病（Citrus Huanglongbing Disease, HLB）是分布于中国南方部分柑桔产区和东南亚、非洲及美洲的严重影响柑桔生产的国内外检疫性细菌病害。

柑桔黄龙病在不同生育期可以表现不同的症状类型：叶片症状从典型斑驳到叶脉黄化，叶片变厚变小，以及呈现类似缺锌缺锰的缺素症；果实症状包括小果、红鼻果，种子变褐败育；整株矮化，生长缓慢，上部枝梢出现黄梢。

下部根系须根少，新根生长受到抑制，支根腐烂。

组织病理学研究发现柑桔韧皮部坏死、韧皮部过度形成、不正常的形成层活性以及淀粉累积等现象。

还观察到从叶鞘原生质膜处形成细胞质膜、叶绿体类囊体的畸变以及线粒体的崩溃现象。

这些变化说明植株中发生了可能是由毒素和/或激素引起显著的代谢紊乱。

菲律宾（1962）700万株柑桔树感病，柑桔种植面积减少60％。

泰国高达95％的柑桔树被侵染。

印度尼西亚，1960年到1970年期间不少于三百万株柑桔被毁灭。

我国沿海柑桔产区的不少柑桔农场由于黄龙病侵染致使幼树成片死亡，全园毁灭。

由于黄龙病对柑桔生产的严重影响，至今仍被中国农业部列为植物检疫性病害名单。

柑桔发病后轻者影响产量和品质，重者造成柑桔树的枯死，对于严重发病的产区只有将病树挖除烧毁。

病区内，新种植的幼龄树容易感病，且一旦发病就很快衰老死亡，而成龄树感病较轻，发病后还可维持2-3年时间，所以新果园比老果园更快受到摧毁。

形态特征：柑桔黄龙病菌是一种局限于韧皮部的难培养的胞内寄生细菌；国内外已有分离到内生菌株的报道，但是均未得到柯赫氏证病律或分子检测验证。

可以取罹病的柑桔寄主组织，超薄切片后利用透射电镜观察，可见韧皮部筛管中的细菌菌体呈圆形至长椭圆形杆状(Garnier et. al., IOCV conference 9:115-124,1984)。

罹病柑桔组织电镜观察病原菌菌体形态呈多形性，杆状、球状；菌体由具三层外壁和一层原生质内膜组成，外壁与内膜之间有肽聚糖
层(Ｒ-层)，病原菌细胞壁约厚17～25～33nm。

黄龙病可能以芽殖方式进行无性繁殖。

生物学特征：
迄今为止已报道的柑桔黄龙病菌包括亚洲韧皮部杆菌、非洲韧皮部杆菌、美洲韧皮部杆菌等三种Candidatus Liberibacter asiaticus（Las）、Ca. L. africanus（Laf）和Ca. L. americanus （Lam）。

Lafleche & Bove（1970）利用电镜在来自南非和印度感染黄龙病甜橙叶片韧皮部中观察到病原体（MLOs)；后来Garnier和Bove(1976)发现黄龙病病原菌的膜包被（17～33 nm）与MLOs (7~10 nm)不同；电镜－细胞化学研究发现黄龙病病原菌的外壁与内膜之间有肽聚糖层(Ｒ-层), 与革兰氏阴性细菌的细胞壁结构一致，因此认为应属于[39]。

由于病原体至今还未能在人工培养基上培养成功, 故称之为难培养细菌(Fastidious bacterium, FB)。

研究发现亚洲黄龙病与非洲黄龙病在传病媒介，热敏感性和血清学方面均存在差异，被称为亚洲型和非洲型。

传播途径：我国植物病理学家林孔湘先生于本世纪50年代首先证明了柑桔黄龙病能通过病树接穗嫁接传播, 苗木带病可在田间自然蔓延。

该病的远距离传播主要随罹病柑桔种苗等繁殖材料。

柑桔木虱和菟丝子是目前已知的柑桔黄龙病的两种主要传媒。

在田间传播除通过带菌柑桔木虱（Diaphorina citri）取食健株新梢传染外，还可以经过罹病菟丝子（Cuscuta spp.）传播。

黄龙病还可由菟丝子（Cuscuta spp.）传播。

大花菟丝子（C. redflexa）被用来从柑桔向柑桔传播病原体，田野菟丝子（C. campestris）则被用于从柑桔向长春花传播，而日本菟丝子（C. japonica）不能传病。

土壤、流水、大风、修剪、其它昆虫及动物传病的可能性很小。

检验检疫方法：柑桔黄龙病菌的检测方法有多种，包括症状诊断，电镜观察，免疫电镜和核酸杂交以及常规和定量PCR检测。

1）症状诊断：特异性不够，加州的柑桔顽固病病组织中也有同一生化物质。

而不同柑桔种类以及受不同季节症状诊断直观简便，是常用的病害鉴定方法。

柑桔黄龙病病害症状复杂多变，在不同生长季节柑桔黄龙病可以在叶片、果实和植株上表现不同的症状，增加了症状鉴定的不确定性。

典型的亚洲柑桔黄龙病包括叶片不均匀黄化为特征的斑驳，红鼻果、整株矮化等主要症状。

2）电镜检测：电镜检测的原理是在电镜下直接观察病原菌。

对于柑桔黄龙病菌，以柑桔叶片的中脉和侧脉为材料，固定前对材料进行真空处理可以更好的对植物材料进行固定和包埋。

1970年Bové等用电镜观察到柑桔黄龙病病原，我国利用电镜与超薄切片技术诊断柑桔黄龙病病原菌（田亚男，1978）。

在电镜下，可以观察到菌体形态，大小，壁膜结构。

但由于菌体在病树内数量少，分布不均匀以及电镜制样采用的样品小等因素的影响，所以检出率不高。

3）免疫学检测：
用病原体粗提纯物为抗原, 按常规方法免疫普通小白鼠，制备了腹水抗体IgG。

血清学测定结果表明该腹水抗体具有特异性免疫反应, 但效价较低，并伴随有非特异性免疫反应干扰。

80年代末期法国Bove研究小组建立了针对印度浦那和非洲黄龙病菌的单克隆抗体HLB 血清学检测方法。

可以鉴别来自印度（Poona）、菲律宾、留尼汪岛等非洲黄龙病样品而不能鉴别来自中国（Gao, S. J. 1988.）泰国、马来西亚和印度其它部分的病害样品，可与中国的HLB病叶样品反应的单克隆抗体不能与印度HLB反应（Gamier 1991）。

单克隆抗体因为专一性过强，难以适应不同地域的黄龙病菌变异菌株, 可能会发生漏检, 综合使用不同的单抗组合也许可以克服。

而且它必须用荧光显微镜检测。

限制了单抗免疫学检测技术的应用。

4）核酸分子杂交：Bove等1996和1997年制备出32P标记的亚洲菌株和非洲菌株探针，即
In-2.6和As-1.7，这两个探针之间有74%的同源序列。

它们都能与同源菌株杂交，在高度严格洗脱条件下，In-2.6不能与非洲菌株杂交，或者杂交信号很弱，但在不严格洗脱条件下, 有杂交信号。

利用DNA-DNA杂交Bové等人发现在毛里求斯存在柑桔黄龙病，检测了越南的柑桔黄龙病，调查了非洲及亚洲15个国家的黄龙病的分布情况。

5）PCR检测：
1993年Villechamoux等人经过克隆测序，获得亚洲菌株Poona（来自印度）的三个DNA 片段，其中In2.6和As-1.7已经用于PCR反应引物的设计。

对亚洲菌株具有特异性的OL1/OL2, 期望扩增片段563bp（Bove 1996）。

Jagoueix S(1996)根据16Sr DNA设计出引物OI1/OA1/OI2c，可以检测到病原体，但需酶解才能区别亚洲种（Las）和非洲种（Laf）。

在比对In-2.6 (M94319) 和As-1.7(U09675)的rplKAJL-rpoBC基因族序列的基础上设计出引物对A2和J5，可以扩增出大小不同的片段（Hocquellet A. 1999）。

国内廖晓兰、田亚男、孔维文等人先后利用Las相应的克隆片段序列建立了亚洲柑桔黄龙病的PCR技术检测方法。

王中康等（2006）应用建立的SGI和TaqMan探针法两种实时荧光定量PCR方法对广西柑桔黄龙病田间植株体内的亚洲黄龙病菌进行了周年种群数量的动态监测，灵敏度较常规PCR 高2－3个数量级，为柑桔黄龙病的早期诊断和鉴定提供了准确可靠的分子检测技术。

主要参考文献
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图2黄龙病传媒柑桔木虱取食。

图3柑桔黄龙病病树畸形果实。

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