黄芪甲苷含量测定研究进展

黄芪甲苷含量测定研究进展
王继明;陈丽娜;杜芳;韩国庆;王耀新
【摘要】对黄芪甲苷含量测定中的样品预处理和各种测定方法的研究进展进行了综述,评述了每种方法的特点,为黄芪甲苷含量的测定提供参考.
【期刊名称】《中医药学报》
【年(卷),期】2019(047)002
【总页数】6页(P116-121)
【关键词】黄芪甲苷;含量测定;研究进展
【作者】王继明;陈丽娜;杜芳;韩国庆;王耀新
【作者单位】内蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院,内蒙古呼和浩特010051;内蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院,内蒙古呼和浩特010051
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪干燥的根[1]。

黄芪主要含有多糖、黄酮类化合物及三萜皂苷[2]，其中黄芪的主要活性成分为黄芪皂苷。

黄芪甲苷为黄芪皂苷的主要成分，黄芪甲苷具有抗炎、抗肝纤维化、抗氧化、抗哮喘、降血糖、免疫调
节和心肌保护等多重功效[3]。

因此黄芪在医药和保健食品方面具有十分广泛的应用。

同时黄芪甲苷成为含有黄芪的医药和保健食品的质量控制指标之一。

《中国药典》2015年版[1]收录了黄芪甲苷做为黄芪的质量控制指标。

由于黄芪中含有多糖、黄酮、皂苷、氨基酸、色素等多种成分，为了使其他成分不对黄芪甲苷的含量测定产生影响，在对样品中黄芪甲苷的含量测定前，需对样品进行预处理。

黄芪甲苷含量的测定方法有比色法、荧光法、薄层扫描法、高效液相色谱法、超高效液相色谱法和近红外漫反射光谱法等，其中高效液相色谱法为近年来广泛应用的方法。

下面分别对样品的预处理和黄芪甲苷含量测定的方法进行综述。

1 样品的预处理
图1 黄芪甲苷含量测定预处理过程
样品用甲醇提取，将样品中的黄芪甲苷等成分溶解到甲醇中，用甲醇做为溶剂进行提取，常见的有回流提取和超声提取2种方式。

甲醇提取液脱除甲醇后用水溶解
残留固体，用乙醚或石油醚洗涤去除水溶液中的脂溶性杂质，用水饱和的正丁醇萃取，除去水溶液中的水溶性杂质，碱溶液洗涤去除酸性杂质，碱溶液一般为氨试液、1%氢氧化钠或1%氢氧化钾。

用大孔吸附树脂对样品进一步纯化，所用大孔吸附
树脂有D101型和DM-301型。

对于大多数样品的预处理均省略了乙醚或石油醚
洗涤、大孔吸附树脂处理步骤，黄芪甲苷含量的测定满足方法学的要求。

同时根据样品的性质决定是否省略甲醇提取步骤。

图1中省略乙醚或石油醚洗涤步骤，大孔吸附树脂为D101型即为《中国药典》2015年版[1]黄芪中黄芪甲苷含量测定的预处理方法。

2013年丁如贤等人[4]报道了对黄芪供试品的处理中省去大孔吸附树脂除杂步骤对黄芪甲苷峰的分离及检测没有任何影响。

2011年刘浩文等人[5]比较了中国药典和香港中药材标准黄芪中黄芪甲苷含量测定方法。

香港中药材标准方法的重现性良好，结果准确可靠，且样品前处理方法简便，测得黄芪药材中黄芪甲苷含量与中国药典相比没有统计学差异。

香
港中药材标准黄芪中黄芪甲苷含量测定供试品溶液制备流程见图2。

图2 香港中药材标准黄芪中黄芪甲苷含量测定供试品溶液制备流程
2006年朱蕾[6]报道了将保健食品用甲醇超声提取、水饱和正丁醇萃取、1%氢氧
化钾洗涤、DM-301大孔吸附树脂处理，所得的洗脱液又经过了Oasis HLB 3cc
型固相萃取柱除去样品中极性大于和小于黄芪甲苷的物质，并对其进行了富集，以达到仪器测定的灵敏度。

样品预处理的目的是通过预处理步骤将样品中的黄芪甲苷进行纯化以满足后续样品测定的要求，根据样品的性质，在满足样品测定需求的条件下，可以将样品预处理过程简化，节省样品预处理时间，进而提高样品检测效率。

2 黄芪甲苷含量测定
2.1 比色法
比色法是通过黄芪甲苷与显色剂发生显色反应后生成有色物质，再用分光光度计测定吸光度，有色物质浓度与吸光度成正比，根据样品的吸光度值计算样品中黄芪甲苷的含量。

2004年李永吉等人[7]利用香草醛-高氯酸比色法测定了复方黄芪注射
液中总皂苷含量。

复方黄芪注射液经水饱和正丁醇萃取、1%氢氧化钠溶液洗涤、
正丁醇饱和的水洗涤、溶剂脱除和甲醇溶解步骤得到供试品溶液。

取供试品溶液脱除甲醇，依次加入5%香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，70℃水浴加热20 min，冷却
后加入冰醋酸，于540 nm处测定吸光度。

该方法的精密度、重现性和稳定性的RSD分别为1.5%、1.0%和0.34%。

黄芪甲苷在8.33～41.67 μg/mL浓度范围内线性良好(r=0.999 7)，回收率为100.64%。

2016年卢伟等人[8]将黄芪经甲醇回流提取、水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤、溶剂脱除和甲醇溶解步骤得到了供试品溶液。

向供试品溶液中依次加入5%亚硝酸钠、10%硝酸铝溶液和4%氢氧化钠溶液，每加一种溶液放置一段时间，然后在367 nm处测定吸光度。

该方法的精密度、重现性和稳定性的RSD分别为1.9%、1.72%
和1.81%，加标回收率为99.5%，黄芪甲苷在进样量0～0.04 mg/mL范围内线
性较好(r=0.959 5)。

由于黄芪中含有多种三萜皂苷，黄芪甲苷为其中的一种，其他三萜皂苷也可能会与显色剂发生相同的显色反应，因此利用比色法可以测定总皂苷的含量，对于黄芪甲苷含量的测定较为困难。

2.2 荧光法
荧光法是利用黄芪甲苷与某些试剂反应生成在紫外光照射后能发射荧光的物质特性而定量分析的方法。

2010年杨连梅等人[9]利用大茴香酸在硫酸介质中与黄芪甲苷反应产生强烈荧光的特性测定黄芪中黄芪甲苷含量，黄芪甲苷反应物最大激发波长为320 nm，最大发射波长为387 nm。

该方法的精密度、重现性和稳定性的RSD 分别为0.10%、1.41%和2.15%，加标回收率为97.22%，黄芪甲苷在1.0～8.0
μg/mL浓度范围内线性良好(r=0.999 7)。

与比色法相同，荧光法适合于测定一类物质的含量，对于黄芪甲苷单组分含量的测定较为困难，需要通过繁琐的预处理步骤以消除其他成分的影响。

同时黄芪中三萜皂苷类物质的结构较为相似，分离难度较大。

2.3 薄层扫描法
薄层扫描法被2000年版《中国药典》收载为黄芪中黄芪甲苷含量的测定方法。

薄层扫描法的薄层板一般采用硅胶G，展开剂为氯仿-甲醇-水，显色剂为10%硫酸
乙醇溶液。

2006年刘丰丰等人[10]用薄层扫描法测定了黄芪颗粒中黄芪甲苷含量。

采用硅胶G薄层板，点状点样，展开剂为氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置
过夜的下层液，展开晾干后，用10%硫酸乙醇溶液在105℃条件下加热至斑点显
色清晰。

用反射法双波长锯齿扫描，检测波长和参比波长分别为530 nm和700 nm。

该方法同板精密度和异板精密度的RSD分别为2.03%和2.31%，重复性的RSD为2.33%，加样回收率为98.72%，黄芪甲苷在进样量为1.012～8.096 μg
范围内线性良好(r=0.997)。

2007年肖辛垣等人[11]报道了用薄层扫描法测定健儿涂膜剂中黄芪甲苷含量。

采用硅胶G薄层板，展开剂为氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(20∶40∶22∶10)10℃以下放置12h的下层溶液，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，
双波长反射法锯齿扫描，检测波长和参比波长分别为530 nm和700 nm。

该方法同板精密度和异板精密度的RSD分别为1.66%和2.80%，重复性的RSD为
2.35%，稳定性的RSD为1.01%，加样回收率为96.56%，黄芪甲苷在进样量为0.5～2.5 μg范围内线性良好(r=0.999 7)。

2015年Jing Zhang等人[12]用高效
薄层色谱同时测定了黄芪中的黄芪甲苷和芒柄花黄素。

将黄芪干燥的根粉碎，置于索氏提取器中用石油醚脱脂，脱脂后将残渣用甲醇回流提取，脱除甲醇，用水溶解残渣，用水饱和的正丁醇提取，氨试液洗涤，将正丁醇相蒸发至干，用甲醇溶解得到供试品溶液。

采用硅胶H薄层板，石油醚-水饱和正丁醇-冰乙酸(3.5∶2∶4)为
展开剂，显色剂为10%硫酸乙醇溶液，在254 nm处扫描。

进行了方法学验证，
具体情况见表1。

通过薄层色谱能够将黄芪甲苷与其他成分进行分离，可以用于黄芪甲苷含量的测定，但是薄层扫描法测定过程需要进行样品预处理、展开、显色和扫描等步骤，处理过程较为繁琐，样品测定效率相对较低。

表1 HPTLC法测定黄芪中黄芪甲苷和芒柄花黄素方法学研究参数黄芪甲苷芒柄花
黄素Rf0.43±0.020.75±0.02线性范围1.01～10.10 μg/μL1.01～10.10 μg/μL相关系数(r2)0.9920.996精密度(RSD,%)0.360.19重复性(RSD,%)1.260.95稳定性(RSD,%)0.18(室温,24 h)0.16(室温,24 h)平均回收率(%)97.998.6
2.4 高效液相色谱法
高效液相色谱法具有分离度和灵敏度高及适用范围广等优点广泛应用于黄芪甲苷的含量测定。

在黄芪甲苷的含量测定中所用的检测器有：紫外检测器(UVD)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱检测器(MSD)、电喷雾检测器(CAD)和脉冲安培检测器
(PAD)。

下面分别进行论述。

2.4.1 HPLC-UV法
黄芪甲苷的甲醇溶液最大紫外吸收波长为200.8 nm。

可通过紫外检测器进行测定，紫外检测器是高效液相色谱中较为常用的检测器。

2014年，姜丽丽等人[13]用HPLC-UV法测定了黄芪干燥根中黄芪甲苷的含量。

色谱柱为Kromail C18柱，流动相为乙腈-水(32∶68)，流速为1.0 mL/min，检测波长为203 nm。

该方法精密度、稳定性和重复性的RSD分别为0.48%、2.87%和2.93%，回收率为98.22%，黄芪甲苷在0.05～0.50 mg/L浓度范围内线性良好(r=0.999 7)。

由于黄芪甲苷的最大紫外吸收波长在200 nm左右，在此波长处许多杂质和溶剂
有吸收，对黄芪甲苷的含量测定造成干扰。

为了提高黄芪甲苷测定的灵敏度和专一性，将黄芪甲苷进行衍生化，向黄芪甲苷分子结构中引入共轭系统，使紫外吸收发生红移。

2000年Meicun Yao等人[14]开发了反相高效液相色谱测定黄芪甲苷含量的方法。

采用了柱前衍生化方法，用苯甲酰氯与黄芪甲苷定量反应生成黄芪甲苷苯甲酰酯，色谱柱为Spherisorb ODS C18柱，流动相为90%甲醇-4%四氢呋喃-6%水-0.2%三乙胺，流速为0.8 mL/min，检测波长为230 nm。

用维生素D3做为内标物，对衍生化反应条件进行了优化，同时进行了方法学研究，黄芪甲苷在0.004～0.080 mg/mL浓度范围内线性关系良好，回收率为94.7%，检测限为
0.002 mg/mL。

2006年朱蕾[6]也对黄芪甲苷的衍生化反应进行了研究，采用正
交试验设计对反应时间、反应温度、吡啶用量和苯甲酰氯用量条件进行了优化，确定了最佳的衍生化反应条件。

2012年侯素云等人[15]比较了HPLC-ELSD内标法(人参皂苷Rb2做为内标物)和柱前衍生化法(用苯甲酰氯进行衍生化)测定黄芪甲苷含量的优劣，实验结果表明，柱前衍生化法测定结果的精密度、重复性、稳定性和准确度均优于HPLC-ELSD内标法。

但是柱前衍生化法对样品的预处理时间较长，样品含量测定的周期较长。

2.4.2 HPLC-ELSD法
蒸发光散射检测原理是流动相溶剂喷雾气化，进入加热管后溶剂挥发，留下被分析检测的物质颗粒，被分析的物质颗粒经镭射光产生散射，散射光由光电倍增管收集得到响应，光散射检测器的响应大小由被分析物质颗粒的数量和大小决定，不受流动相溶剂的干扰，不要求被测组分有特定的化学结构。

特别适合于黄芪甲苷这种紫外末端吸收，没有特定吸收波长的情况，故被2015年版《中国药典》[1]收载为黄芪中黄芪甲苷含量测定的方法。

2001年[16]Wenkui Li等人用HPLC-ELSD法测定了黄芪中黄芪甲苷含量，色谱柱为Zorbax Eclipse XDB C18柱，用乙腈和水进行梯度洗脱，流速为1.6
mL/min，柱温为20℃，蒸发温度为43℃，气体压力为3.4 bar。

黄芪甲苷的检测限为40 ng，平均回收率为95.8%。

该方法为测定黄芪甲苷含量的主要方法。

表2中列出了2015—2017年用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量的相关研究。

与紫外检测器相比，蒸发光散射检测器不需要进行衍生化反应，适用于没有紫外吸收的物质。

缩短了样品的测定周期。

2.4.3 HPLC-MS法
质谱分析具有灵敏度高、选择性强、准确性好等特点。

高效液相色谱与质谱联用可以分析复杂成分样品和微量物质，为复杂样品中黄芪甲苷的含量测定提供了方法。

2017年李光河[29]用液相色谱-质谱法测定了丹溪玉屏风颗粒中黄芪甲苷含量，色谱柱为Agilent SB-C18柱，流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(70∶30)，流速为0.4 mL/min，柱温为30℃。

质谱条件为：电喷雾正离子模式检测，黄芪甲苷选择离子对为627.4-807.2，雾化器压力为35 psi，干燥气流速为8.0 L/min，干燥气温度为450℃，毛细管电压为4 000 V，四级杆温度为100℃。

研究结果表明，该方法精密度、重复性和稳定性(8 h)的RSD分别为2.7%、2.0%和2.8%，加样回收率为99.42%，黄芪甲苷在5.1～76.5 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系
(r=0.999 4)。

2.4.4 HPLC-CAD法
蒸发光散射检测器和电喷雾检测器都属于气溶胶型检测器，电喷雾检测器是在2004年推出的一种较为新型的通用检测器，其响应值不依赖于被测物质的光学性质和离子化效率，能检测非挥发或半挥发性物质。

与蒸发光散射检测器相比，电喷雾检测器的检出限更低，灵敏度更高。

2012年刘兴国等人[30]比较了质量型检测
器ELSD和CAD用于测定黄芪甲苷的优劣。

ELSD和CAD都能够准确可靠地进行黄芪甲苷含量的测定，但是CAD的检出限和定量限要比ELSD低得多。

CAD在灵敏度和重现性方面均要好于ELSD。

2014年李效宽等人[31]利用在线固相萃取法
结合电喷雾式检测器测定了黄芪甲苷的含量。

用Acclaim PA2净化柱对样品纯化。

样品分析柱为Acclaim C18，乙腈-水(35:65)为流动相，流速为1.0 mL/min，柱
温为35℃。

电喷雾检测器的雾化温度为30℃，氮气压力为241.3 kPa。

黄芪甲苷的定量限为0.66 mg/L，检出限为0.33 mg/L。

黄芪甲苷在4.0～80 mg/L浓度
范围内线性关系良好(r=0.999 8)。

2016年梁慧敏等人[32]用高效液相色谱-电喷
雾检测器法测定了贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷含量。

色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱，乙腈-水(32∶68)为流动相，流速为1.0 mL/min。

电喷雾检测器雾
化温度为35℃，载气氮气压力为63.6 psi。

该方法精密度、重复性和稳定性的RSD分别为1.1%、1.5%和1.1%。

加样回收率为99.14%，黄芪甲苷在进样量为0.286～2.86 μg范围内线性良好(r=0.999 8)。

表2 HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量文献汇总(2015—2017年)序号样品名称色谱条件专属性线性范围精密度(RSD)重复性(RSD)稳定性(RSD)加样回收率/RSD(%)年份参考文献1归芪升白颗粒Shim-pack ODS色谱柱,柱温:30℃,流动相:乙腈-水(32:68),流速:1 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温度:60℃,载气压力:2bar。

良好
0.066～0.66 μg/μL(r=0.999 1)1.121.731.94(24 h)99.41/2.802017[17]2芪芳气
血颗粒Ultimate XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:30℃,流动相:乙腈-水(34:66),流速:0.9 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温度:65℃,空气压力:20 psi。

良好2.38～11.85 μg(r=0.999 5)0.571.310.83(24 h)97.77/0.922017[18]3抗栓通络
丸Lichrom C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:30℃,流动相:乙腈-水(32∶68),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:氮气流速:2.0 mL/min,气化温度:90℃,蒸发温
度:115℃。

良好0.778～3.89 μg(r=0.999 9)1.711.961.32(24
h)99.02/1.432017[19]4蚁参护肝口服液C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱
温:30℃,流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:气化温度:40℃。

良好15.82～79.10 μg/mL(r=0.999 2)2.002.101.50(48 h)98.70/1.202017[20]5乙肝益气解郁颗粒C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(72∶28),流速:1.0 mL/min。

良好1.0～12.5μg(r=0.999 2)0.322.582.92(24
h)98.502017[21]6柏子养心片Hibar C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱
温:30℃,流动相:乙腈-水(32∶68),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温
度:90℃,气体流速:1.8 L/min。

良好0.107 55～8.604 μg(r=0.999
7)0.560.621.41(48 h)98.81/2.702017[22]7黄芪Agilent TC-C18柱(250
mm×4.6 mm,5 μm),柱温:35℃,流动相:乙腈-水(37∶63),流速:0.8 mL/min。

ELSD 检测器:温度:105℃,气体流速:2.7 L/min。

良好0.51～10.21 μg(r=0.999
9)0.981.101.60(24 h)97.502016[23]8养阴生津片Inertsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:35℃,流动相:乙腈-水(32∶68),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:
漂移管温度:60℃,载气流速:2.0 mL/min。

良好0.496 8～9.936 0 μg(r=0.999
8)0.180.830.71(12 h)99.64/0.222016[24]9芪黄通秘软胶囊Thermo-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:35℃,流动相:甲醇-水(75∶25),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温度:105℃,载气流速:2.0 mL/min。

良好1.832～5.496
μg(r=0.999)0.880.931.28(12 h)99.70/1.122015[25]10脑脉康颗粒Agilent C18
柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:30℃,流动相:乙腈-水(36∶64),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温度:60℃,气体压力:30 psi。

良好0.035 4～0.354 2
g/L(r2=0.999 9)1.445.285.28(24 h)102.60/2.962015[26]11甜梦胶囊Zorbax Eclipse-C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:30℃,流动相:乙腈-水(32∶68),流速:1.0 mL/min。

ELSD检测器:漂移管温度:75℃,雾化器温度:48℃,气体压力:25 psi。

良好0.230 4～4.608 g/L(r=0.999 7)0.510.871.00(12 h)98.15/1.462015[27]12芪参安胃口服液Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(32∶68)。

ELSD检测器:漂移管温度:105℃,载气流速:2.7 L/min。

良好5.024 0～74.520 0 μg(r=0.999 6)1.660.791.66(16 h)97.07/1.272015[28]
2.4.5 HPLC-PAD法
脉冲安培检测器出现在20世纪80年代初，是美国Dionex公司为满足糖的测定
而研制[33]。

在较高pH溶液中，糖可在金电极上被氧化，因此可用电化学法进行检测。

由于金电极吸附待测成分的氧化产物以及金电极表面形成氧化层，使得金电极会很快失效。

为了解决这一问题，由三个不同的脉冲电位代替加于工作电极上的恒定电位。

用较工作电位高的正电位除去金电极上被测成分的氧化产物。

同时再加一个大的负电位，使金电极部分被氧化成的氧化金还原到还原状态。

黄芪甲苷中含有糖的部分，因此可用脉冲安培检测器进行黄芪甲苷的检测。

2012年Ha-Jeong Kwon等人[34]用HPLC-PAD法测定了黄芪中的黄芪皂苷含量。

脉冲安培检测系
统包括金工作电极和Ag/AgCl参比电极。

电位波形为：E1=-0.2 V(0.00-0.004 s)，E2=0 V(0.05-0.21 s)，E3=+0.22 V(0.22-0.46 s)，E4=0 V(0.47-0.56 s)，E5=-
2V(0.57-0.58 s)，E6=+0.6V(0.59 s)。

以洋地黄毒苷做为内标物，以黄芪甲苷与
内标物峰面积比和黄芪甲苷浓度进行线性回归，线性范围为0.000 6～0.4
μg,r2=1.000 0。

黄芪甲苷的检测限和定量限分别为0.2 ng和0.6 ng。

黄芪甲苷
加入量为0.10 mg，回收率为(91.33±3.69)%，黄芪甲苷加入量为1.00 mg，回
收率为(96.19±1.68)%。

2.5 超高效液相色谱法
与高效液相色谱相比，超高效液相色谱法的检测速度较快，灵敏度和分离度较高。

2015年Li Wang等人[35]使用超高效液相色谱-四极轨道阱质谱测定了保健酒中黄芪甲苷含量。

色谱柱为Hypersil GOLD C18，用0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脱，流速为0.2 mL/min，柱温为35℃。

Q Exactive MS系统由四极质谱和轨道阱质谱组成。

电喷雾正离子模式检测，检测
m/z807.45→m/z627.39离子跃迁，离子源电压为3200 V，温度为350℃。

黄芪甲苷的定量限和检测限分别为0.5和0.25 ng/mL，回收率为92.5%～96.7%，线性范围为1.8～36 ng/mL，回归系数为0.999 9。

超高效液相色谱-四极轨道阱质谱具有分析速度快、高的灵敏度和选择性的优点。

2016年华云鹏等人[36]用UPLC-MS法测定了安喘舒丸中的黄芪甲苷含量。

色谱柱为Agilent ZOBAX SB C18色谱柱，甲醇-0.1%甲酸水溶液(25∶75)为流动相，流速为0.2 mL/min，柱温为35℃。

电喷雾正离子模式检测，毛细管电压为4 000 V，干燥气温度为400℃，检测对象为m/z808.2→m/z628.5。

黄芪甲苷的定量限为5 ng/mL，精密度、稳定性和重复性的RSD分别为2.7%、2.4%和3.4%，加样回收率为
97.20%。

2.6 其他方法
2012年Li Gu等人[37]报道了使用茜素红做为电流指示器，基于硼酸功能化的多壁碳纳米管的新型电化学传感器用于黄芪甲苷含量的测定。

2017年战皓等人[38]采用近红外漫反射光谱法对黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷的含量进行了测定。

3 结语
黄芪甲苷做为黄芪类药物和保健食品的标志性成分，其含量的测定方法主要有比色
法、荧光法、薄层扫描法和液相色谱法等。

比色法和荧光法的操作简单、成本低廉，可用于黄芪总皂苷含量的测定。

薄层扫描法设备简单，操作方便，但预处理复杂，在早期的黄芪甲苷含量测定应用较多。

高效液相色谱法中使用的检测器有：紫外检测器(UVD)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱检测器(MSD)、电喷雾检测器(CAD)、脉冲安培检测器(PAD)。

使用紫外检测器直接测定干扰较为严重，将样品进行衍生化处理后可用紫外检测器进行检测，但样品的前处理复杂，测定样品所需时间较长。

蒸发光散射检测器具有灵敏度高、受干扰因素少等特点，目前黄芪甲苷含量的测定多用该检测器。

电喷雾检测器在灵敏度和重现性方面均要好于ELSD，是今后推广应用的方向。

质谱检测器和脉冲安培检测器更适合于黄芪甲苷的微量分析。

超高效液相色谱与质谱联用技术也用于黄芪甲苷的含量测定，该方法与高效液相色谱相比，具有检测速度较快，灵敏度和分离度高等特点，是今后黄芪甲苷含量测定的发展方向。

参考文献：
【相关文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2015：302.
[2] Chu Chu,Lian-Wen Qi,E-Hu Liu,et al.Radix Astragali(Astragalus):Latest advancements and trends in chemistry,analysis,pharmacology and pharmacokinetics[J].Current Organic Chemistry,2010,14,1792-1807.
[3] Lei Li,Xiaojiao Hou,Rongfang Xu,et al.Research review on the pharmacological effects
of Astragaloside IV[J].Fundamental and Clinical Pharmacology,2017,31(1):17-36.
[4] 丁如贤,李霞,李一珺,等.药材、饮片中黄芪甲苷含量测定方法的改进[J].世界中医
药,2013,8(6):669-671.
[5] 刘浩文,刘嘉仪,杨妙荣,等.黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究[J]. 中药新药与临床药理,2011,22(6):659-662.
[6] 朱蕾.柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中黄芪甲苷含量[D].北京：中国疾病预防与控制中
心,2006.
[7] 李永吉,管庆霞,关延彬,等.HPLC与比色法测定复方黄芪注射液中总皂苷与黄芪甲苷含量[J].黑龙江医药,2004,17(1):1-3.
[8] 卢伟,孙晓敏,孙佳佳,等.2种黄芪甲苷含量测定方法比较 [J]. 中医临床研究,2016,8(2):43-45.
[9] 杨连梅,刘养清,赵慧辉,等.黄芪药材中黄芪甲苷含量的荧光分光光度法测定[J].时珍国医国
药,2010,21(9):2272-2273.
[10] 刘丰丰,王海宁,李明,等.薄层扫描法测定黄芪颗粒中黄芪甲苷含量 [J]. 中国药
业,2006,15(14):17-18.
[11] 肖辛垣,李文斌,李楚云,等.薄层扫描法测定健儿涂膜剂中黄芪甲苷含量 [J].医药导
报,2007,26(8):954-955.
[12] Jing Zhang,Mei Meng,Ying Jiang,et al.A new approach to develop a standardized met hod for simultaneous analysis of Astragaloside Ⅳ and formononetin in Radix Astragali by High-Performance Thin Layer Chromatography[J].Journal of Planar Chromatography,2015,28(4):268-273.
[13] 姜丽丽,张传领,苏丽娟,等.HPLC-UV法测定黄芪干燥根中黄芪甲苷的含量[J].安徽农业科
学,2014,42(22):7381-7383.
[14] Meicun Yao,Ying Qi,Kaishun Bi,et al.A precolumn derivatization High-Performance Liquid Chromatographic method with improved sensitivity and specificity for the determination of Astragaloside Ⅳ in Radix Astragali[J].Journal of Chromatographic Science,2000,38:325-328.
[15] 侯素云,王宗权,贾继明.黄芪甲苷提取物中黄芪甲苷含量测定方法比较研究[J].河北医科大学学报,2012,33(5):544-547.
[16] Wenkui Li,John F Fitzloff. Determination of AstragalosideⅣ in Radix
Astragali(Astragalus membranaceus var. monghulicus) using High-Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light-Scattering Detection[J].Journal of Chromatographic Science,2001,39:459-462.
[17] 王佳,冯建安,李希,等.HPLC-ELSD法测定归芪升白颗粒中黄芪甲苷含量[J].亚太传统医
药,2017,13(5):41-43.
[18] 赵晓丽.高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量分析[J].实用中医药杂志,2017,33(7):858-860.
[19] 王红,杨慈海,宋军,等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定抗栓通络丸中黄芪甲苷含量[J].中国药业,2016,25(4):75-77.
[20] 翟晓茹,李永东,张红兵,等.蚁参护肝口服液中黄芪甲苷含量测定的方法研究[J].北方药
学,2017,14(7):1-2.
[21] 林帅军,崔燕兵,邢志霞,等.HPLC-ELSD法测定乙肝益气解郁颗粒中黄芪甲苷含量[J].中医药导报,2017,23(5):47-49.
[22] 彭玲娜,李劲平,蒋秋桃,等.HPLC-ELSD测定柏子养心片中黄芪甲苷含量 [J].海峡药
学,2017,29(7):63-66.
[23] 卢伟,孙晓敏,孙佳佳,等.2种黄芪甲苷含量测定方法的比较[J].中医临床研究,2016,8(2):43-45.
[24] 张火旺,蔡勇科,吴志国,等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定养阴生津片中黄芪甲苷含量[J].中国药业,2016,25(20):53-55.
[25] 段春改,陈钟,李菲,等.HPLC-ELSD法测定芪黄通秘软胶囊中黄芪甲苷含量[J].亚太传统医
药,2015,11(1):23-25.
[26] 万萌萌,康新莉,谭睿,等.高效液相色谱法测定脑脉康颗粒中黄芪甲苷含量[J].中国药
业,2015,24(20):75-76.
[27] 葛德洲,邓祖磊.高效液相色谱-蒸发光散射法测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量[J].中国药
业,2015,24(5):31-32.
[28] 王海燕,柳庆坤,刘广文. 芪参安胃口服液中黄芪甲苷含量测定的研究[J].中国医院用药评价与分析,2015,15(3):292-295.
[29] 李光河.液相色谱-质谱法测定丹溪玉屏风颗粒中黄芪甲苷含量[J].中国药业,2017,26(7):21-23.
[30] 刘兴国,李丽红,李仁勇,等. 新型电喷雾式检测器CAD与蒸发光散射检测器ELSD用于分析黄芪甲苷的对比研究[C]∥第11届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集.杭州：中国药学会, 2012：495-501.
[31] 李效宽,张艳海,冯天辉,等.在线固相萃取法结合电雾式检测器测定黄芪及其复方中黄芪甲苷含量[J].分析化学,2014,42(12):1791-1796.
[32] 梁慧敏,欧妮.高效液相色谱-电喷雾检测器法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷含量[J].中国药
业,2016,25(5):55-57.
[33] 于泓,牟世芬.离子色谱中的安培检测方法及其应用[J].化学通报,2007,7:483-488.
[34] Ha-Jeong Kwon,Yong-Duk Park.Determination of astragalin and astragaloside content in Radix Astragali using high-performance liquid chromatography coupled with pulsed amperometric detection[J].Journal of Chromatography A,2012,1232:212-217. [35] Li Wang,Zhan Zhang,Xinyu Yu, et al. An efficient, sensitive and accurate method for the detection of astragaloside Ⅳ in Chinese functional spirit by ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-orbitrap mass spectrometry[J].Analytical
Methods,2015(7):10199-10206.
[36] 华云鹏,雍太萍,宗宁峰,等.UPLC-MS/MS法同时测定安喘舒丸中腺苷和黄芪甲苷含量[J].中国现代中药,2016,18(8):1055-1057.
[37] Li Gu,Ying Liang,Tianshu Zhou,et al.A novel electrochemical sensor based on boronic acid-functionalized multiwalled carbon nanotubes for astragaloside IV determination using ARS as the current indicator[J].Analytical Methods,2012(4):492-495.
[38] 战皓,吴宏伟,张东,等.近红外光谱法测定不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡糖糖苷和黄芪甲苷含量[J].光谱学与光谱分析,2017,37(5):1391-1396.。