快速溶剂萃取-气相色谱-串联质谱法测定血中12种催眠类药物

快速溶剂萃取-气相色谱-串联质谱法测定血中12种催眠类药
物
罗永此;应剑波;谢伟宏;李晓飞;唐磊
【摘要】提出了气相色谱-串联质谱法测定血液中12种催眠类药物含量的方法.样品以乙酸乙酯-环己烷-丙酮(2+2+1)混合液为萃取剂,使用氧化铝吸附剂达到在线净化的效果,经快速溶剂萃取仪提取后,提取液用氮气吹干,用甲醇0.5 mL溶解,通过VF-5MS色谱柱分离,采用电子轰击离子源多反应监测模式进行测定.12种催眠类药物的质量浓度与其峰面积均在50.0～1 000μg·L-1之间呈线性关系,测定下限(10S/N)在0.02～4.7μg·L-1之间.加标回收率在65.4％～98.2％之间,测定值的相对标准偏差在0.9％～14.8％之间.
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2015(051)007
【总页数】4页(P1014-1017)
【关键词】气相色谱-串联质谱法;催眠类药物;快速溶剂萃取
【作者】罗永此;应剑波;谢伟宏;李晓飞;唐磊
【作者单位】杭州市公安局刑事科学技术研究所,杭州310004;杭州市公安局刑事科学技术研究所,杭州310004;杭州市公安局刑事科学技术研究所,杭州310004;杭州市公安局刑事科学技术研究所,杭州310004;杭州市公安局刑事科学技术研究所,杭州310004
【正文语种】中文
【中图分类】O657.63
催眠类药物是临床应用较为广泛的药物,常见于成瘾滥用、麻醉犯罪以及过量服用,故血液中该类药物的检测在司法鉴定、医疗急救等领域中具有重要的意义。

血液中该类药物的提取方法一般采用液液萃取法[1-2]、固相萃取法[3-4]和固相微萃取法[5]等,但这些方法操作程序较为复杂、自动化程度不高、提取时间较长,具有一定的局限性。

快速溶剂萃取技术(ASE)是在高温、高压条件下,短时间内完成萃取过程,使用常规的溶剂对固体或半固体样品进行萃取,操作简便,节省人力,近年来已逐渐应用于法庭科学毒物分析领域[6-9]。

本工作采用快速溶剂萃取-气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)测定血中唑吡坦等12种催眠类药物的含量。

1．1 仪器与试剂
Dionex ASE 350型快速溶剂萃取仪,配34 mL萃取池;Bruker GC450-MS 300三重四极杆气相色谱-质谱联用仪。

12种药物标准储备溶液:1.000 g·L-1,溶剂为甲醇。

pH 10的缓冲溶液:称取0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液43.7 mL与0.4 mol·L-1硼酸溶液12.5 mL混合,再与0.4 mol·L-1氯化钾溶液12.5 mL混合均匀。

唑吡坦、氟硝西泮、去甲西泮、7-氨基氯硝安定、扑尔敏等纯度不小于99.6%;劳拉西泮、咪哒唑仑、卡马西平、氯氮平、三氟拉嗪、异丙嗪和太尔登等纯度不低于99.7%。

试验所用有机溶剂均为色谱纯。

1．2 仪器工作条件
1) Dionex ASE350快速溶剂萃取条件加热炉温度110 ℃;静态萃取时间6 min;静态萃取次数为2次;萃取溶剂为乙酸乙酯-环己烷-丙酮(2+2+1)溶液。

2) 色谱条件 VF-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);程序升温:初始温度
100 ℃,保持1 min;以20 ℃·min-1速率升至280 ℃,保持15 min。

气化室温度280 ℃;载气为氦气(纯度为99.999%);流量为1.0 mL·min-1;分流进样,分流比为10比1;进样量为1 μL。

3) 质谱条件电子轰击离子源(EI),离子源温度230 ℃;电离能量70 eV;传输线温度280 ℃,电子倍增器电压1 300 V;碰撞气为氩气(纯度为99.999%),压力为0.24 Pa;扫描方式为多反应监测(MRM)模式。

12种催眠类药物的质谱参数见表1,其中*为定量离子。

1．3 试验方法
移取血液3.00 mL,加入pH 10的缓冲溶液0.5 mL,混匀,然后与适量的颗粒状硅藻土混匀,再倒入底部装有5 g活化过的中性三氧化二铝的萃取池中,按快速溶剂萃取仪设定的程序和条件运行。

萃取完毕后,将萃取液倒入试管中,高速离心后取出有机相,在低于40 ℃条件下将有机相氮吹浓缩至干,加入甲醇0.5 mL溶解,在仪器工作条件下进行测定。

2．1 色谱行为
12种催眠类药物的总离子流图见图1。

2．2 萃取条件的选择
2．2．1 萃取溶剂
试验选取乙酸乙酯-环己烷和二氯甲烷-丙酮二元混合溶剂两组,乙酸乙酯-环己烷-丙酮和二氯甲烷-环己烷-丙酮进行对比,并优化溶剂比例,结果表明:乙酸乙酯-环己烷-丙酮(2+2+1)和二氯甲烷-环己烷-丙酮(1+1+1)两组三元混合溶剂作为萃取溶剂,回收率较高,但是考虑到二氯甲烷毒性较乙酸乙酯的大,试验选择乙酸乙酯-环己烷-丙酮(2+2+1)混合剂作为萃取溶剂。

2．2．2 萃取温度
试验考察了100 ℃,110 ℃,120 ℃,130 ℃不同萃取温度下的萃取效果,结果表明:随着温度的增加,药物的萃取率增大,然而,温度越高,萃取的杂质相应也增加。

温度在110 ℃的条件下,各药物均可取得较好的效果,试验选择萃取温度为110 ℃。

2．2．3 萃取时间
试验考察了静态平衡时间分别为4,5,6,10 min的情况下,循环次数分别为1,2次时的试验情况,结果表明:萃取时间越长,循环次数增加,萃取率提高,但杂质也明显增多;萃取时间达到一定时间,萃取率提高不明显,杂质却明显增多。

结果发现:静态萃取6 min,循环2次,可取得较满意的萃取率,且杂质较少。

试验选择萃取时间为6 min。

2．2．4 吸附剂
氧化铝吸附剂具有吸附色素、蜡质、脂肪的作用[10],试验在萃取池底部中事先加入活化好的氧化铝吸附剂,对比未添加的萃取液色谱图,表现为杂质峰明显减少,但吸附剂的添加量加大,会对药物有一定的吸附作用,回收率下降。

试验考察了添加
3,4,5,6 g氧化铝吸附剂的净化效果,综合各药物的回收率,添加5 g氧化铝吸附剂时吸附效果最好,试验选择氧化铝吸附剂的加入量为5 g。

2．3 标准曲线及检出限
取3 mL空白血样,分别添加12种催眠类药物,使血样中各药物的质量浓度分别为50,100,200,400,1 000 μg·L-1,采用建立的快速溶剂萃取法进行操作,按表1中各药物的定量离子进行积分,以药物的质量浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标进行线性回归,12种催眠类药物的质量浓度在
50.0～1 000 μg·L-1范围内呈线性,其线性回归方程、相关系数及方法的测定下限(10S/N)见表2。

2．4 精密度和回收试验
取3 mL空白血样3份,分别添加唑吡坦、氟硝西泮、去甲西泮、劳拉西泮、咪哒唑仑、7-氨基氯硝安定、扑尔敏、卡马西平、氯氮平、三氟拉嗪、异丙嗪和太尔
登,使血中各药物的质量浓度为50,400,1 000 μg·L-1。

按试验方法进行提取,平行
测定3次,计算平均回收率和日内精密度。

同法每日测定1次,连续测定3 d,计算日间精密度。

精密度和回收试验结果见表3。

本工作采用快速溶剂萃取技术提取生物检材血中唑吡坦等12种催眠类药物,并建立了12种药物的二级质谱库,采用气相色谱-串联质谱法进行测定。

快速溶剂萃取技
术具有回收率高、自动化程度高、在线净化等优势,三重四极杆串联质谱具有高灵
敏度和高选择性,定性定量结果的可靠性相比一般的低分辨气相色谱-质谱联用仪大大提高。

所建立的方法在实际案件中也得到较好的应用[11],适合制定标准方法,在
法庭科学毒物分析领域进行推广。

【相关文献】
[1] 王国建,任桂芳,李敏刚,等.尿中咪达唑仑提取方法及检验[C].第三届全国毒物分析学术交流会论文集, 2000:228-230．
[2] 姜兆林,谭家镒,姚丽娟,等.尿和血浆中苯并二氮杂卓类药物及其代谢物的气相色谱氮磷检测分析
法[J].分析科学学报, 2005,21(6):639-642．
[3] 周娣,张文芳,周健.全自动固相萃取仪与GC/MS的结合应用——生物检材中的药毒物检测分析[J].质谱学报, 2002,23(4):225-228．
[4] 王松才,邢若葵,戴维列,等.自动固相萃取法(SPE)提取血或尿中的常见安眠药成分[J].广东公安科技, 2002(3):17-20．
[5] 刘克林,沈伟峰,张春水,等.腐败生物检材中毒物毒品检测几种新技术的应用介绍[J].刑事技术, 2002(2):30-35．
[6] 应剑波,罗永此.快速溶剂萃取气相色谱法测定血尿中苯并二氮杂类药物[J].中国法医学杂志, 2010,25(3):181-182．
[7] 胡平,任永红.ASE萃取仪提取氟乙酰胺,毒鼠强的方法研究[J].化学分析计量, 2004,13(5):54-56．
[8] 杜鸿雁,董颖,张蕾萍,等.快速溶剂萃取法提取血中的有机磷类农药[J].刑事技术, 2012(3):20-21．
[9] 唐磊,应剑波.快速溶剂萃取-气相色谱-串联质谱法测定血中巴比妥类药物[J].理化检验-化学分册, 2012,48(7):845-847．
[10] 陆惠民.毒物分析[M].北京:警官教育出版社, 1995:196．
[11] 罗永此,应剑波.快速溶剂萃取GC-MS/MS检验唑吡坦1例[G].现代法医学理论与实践.沈阳:辽
宁科学技术出版社, 2013:644-645．。