全国高考真题分类汇编基因工程
专题13 基因工程-2024年高考生物一模试题分类汇编(广东专用)(原卷版)
专题13 基因工程（基础题+提升题+创新题三位一体）1.（2024届·广东深圳·一模）基因工程的发展离不开理论的突破和技术的创新。
下列科学研究体现了基因工程正式问世的是（）A．艾弗里等人通过肺炎链球菌的体外转化实验证明DNA可以转移B．沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出自我复制假说C．科学家利用质粒构建重组DNA载体并导入受体细胞中成功表达D．科学家发现了多种限制性内切核酸酶、DNA连接酶和逆转录酶2.（2024届·广东汕头·一模）下列选项中相关“反应”与“反应条件”不一致的是（）A．A B．3.（2024届·广东江门·一模）在构建基因表达载体时，传统方法常受限于限制酶识别序列。
科研人员研发了新的DNA重组方法: In-Fusion技术。
该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列），然后用In-Fusion酶处理，使同源序列形成黏性末端，最终形成的重组质粒会在受体细胞内形成完整的重组序列。
主要操作过程如图示。
下列叙述错误的是（）A．推测In-Fusion酶的作用是识别同源序列、形成黏性末端、连接磷酸二酯键B．载体A端和B端的序列不同，可防止目的基因与质粒反向连接及自身环化C．形成重组质粒时，如果温度远高于50℃，黏性末端的碱基不容易互补配对D．该技术无需识别特定切割位点，需识别目的基因与线性质粒任意同源序列4.（2024届·广东汕头·一模）镉（Cd）是重金属污染物，具有极强毒性。
烟草作为重要的经济作物，在生长过程中容易富集Cd，Cd通过烟气进入人体，长期积累可能会引发疾病。
N1NRAMP3是定位于液泡膜参与Cd转运的蛋白，研究人员以普通烟草为材料，通过转基因技术研究NINRAMP基因的功能，为研究烟草在Cd胁迫中的适应机制提供理论基础。
回答下列问题：(1)从数据库获得NtNRAMP基因的序列，设计引物F和R后利用技术扩增得到NtNRAMP基因的cDNA 片段，测序鉴定。
全国高考生物试题分类汇编 基因工程及应用(含解析)(1)
（备考2015）全国2014高考生物试题分类汇编基因工程及应用（含解析）1.（2013重庆，5，6分）某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉, 其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽” 。
下列有关叙述, 错误的是( )A. 消毒的原则是既杀死材料表面的微生物, 又减少消毒剂对细胞的伤害B. 在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂, 可获得染色体加倍的细胞C. 出芽是细胞再分化的结果, 受基因选择性表达的调控D. 生根时, 培养基通常应含α-萘乙酸等生长素类调节剂2.（2013北京，5，6分）关于高中生物学实验的基本原理, 叙述不正确的是( )A. 噬菌体须在活菌中增殖培养是因其缺乏独立的代谢系统B. 提取组织DNA是利用不同化合物在溶剂中溶解度的差异C. 成熟植物细胞在高渗溶液中发生质壁分离是因为细胞壁具有选择透(过) 性D. PCR呈指数扩增DNA片段是因为上一轮反应的产物可作为下一轮反应的模板3.(2013年大纲，2，6分) 关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述, 错误的是( )A. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同B. 动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶C. 烟草叶片离体培养能产生新个体, 小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质, 茎尖培养可用于植物脱除病毒4.（2013湖北七市（州）高三联考）【生物——选修1：生物技术实践】（15分）我省某地近些年来，为防止水土流失，在退耕还林的过程中，大力推行以种植柑橘为主的生态农业，显著提高了当地农民的收入，但也出现了水果销量有限与产量不断增加的矛盾，为了解决这一矛盾。
当地企业拟开展以果肉生产果汁和橘皮提炼精油的生产为主的深加工，实现增产与增收的统一。
请据所学知识，解答有关问题：⑴当地企业拟采用水蒸气蒸馏法提取橘皮精油，有人提出了反对意见。
其理由是：采用水蒸汽蒸馏法提取橘皮精油存在________问题。
2023年高考生物真题分项汇编(全国通用)：基因工程 (原卷版)
专题27基因工程1.(2022·辽宁高考)12.抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。
为给监管转基因生物安全提供依据，采用PC方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。
下列叙述正确的是（）A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市2.(2022·江苏高考)6.采用基因工程技术调控植物激素代谢，可实现作物改良。
下列相关叙述不合理的是（）A.用特异启动子诱导表达iaaM（生长素合成基因）可获得无子果实B.大量表达ip（细胞分裂素合成关键基因）可抑制芽的分化C.提高ga2ox（氧化赤霉素的酶基因）的表达水平可获得矮化品种D.在果实中表达acs（乙烯合成关键酶基因）的反义基因可延迟果实成熟3.(2022·山东高考)13.关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是（）A.过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解B.离心研磨液是为了加速DNA的沉淀C.在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白质4.（2021江苏）13.下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略，下列相关叙述错误的是（）A.分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有T-DNA序列B.该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因须转到不同染色体上C.若要获得除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重组D.获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异5.（2022·1月浙江选考）29.回答下列（一）、（二）小题：（二）我国在新冠疫情按方面取得了显著的成统，但全球疫情形势仍然非常严峻、尤其是病毒出现了新变异株——德尔塔、奥密克戎，更是威胁着全人类的生命健康。
（4）新冠病毒核酸定性检测原理是：以新冠病毒的单链RNA为模板，利用__________酶合成DNA，经PCR扩增，然后在扩增产物中加入特异的__________，如果检测到特异的杂交分子则核酸检测为阳性。
《选三专题一 基因工程》近几年高考题汇编
《专题一基因工程》近几年高考题汇编一、选择题1．（2009安徽理综·4）2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展水母绿色荧光蛋白”的三位科学家。
将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。
绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是A．追踪目的基因在细胞内的复制过程 B．追踪目的基因插入到染色体上的位置C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构2．（2009浙江理综·3）下列关于基因工程的叙述，错误的是A．目的基因和受体细胞均可来自动、或微生物B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达3．（2009广东理科基础·45）钱永健先生因在研究绿色荧光蛋白方面的杰出成就而获2008年诺贝尔奖。
在某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光。
由此可知A．该生物的基因型是杂合的 B．该生物与水母有很近的亲缘关系C．绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达D．改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光4．（2008浙江理综· 4）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指。
如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d 四种不同长度的DNA片段。
现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是A．3 B．4 C．9 D．125．（2007北京理综·2）利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需的产品。
高考生物试题的分类汇总专题基因工程
基因工程1. （2023浙江T6,6分）天然旳玫瑰没有蓝色花，这是由于缺乏控制蓝色色素合成旳基因B，而开蓝色花旳矮牵牛中存在序列已知旳基因B。
现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作对旳旳是（）A.提取矮牵牛蓝色花旳mRNA，经逆转录获得互补旳DNA，再扩增基因BB.运用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛旳基因文库中获取基因BC.运用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞答案：A解析：提取矮牵牛蓝色花旳mRNA，逆转录得到DNA，然后扩增，可获得大量旳基因B，A对旳；从基因文库中获取目旳基因，只要根据目旳基因旳有关信息和基因文库中旳信息进行筛选对比即可，不需要用限制酶进行切割，B错误；目旳基因与质粒旳连接需要用DNA连接酶，而不是DNA聚合酶，C错误；目旳基因需要和运载体连接后形成重组质粒再导入，并且应当用农杆菌进行感染，而不是大肠杆菌，D错误。
2.（2023江苏T13，2分）下列有关转基因生物安全性旳论述，错误旳是（）A. 种植转基因作物应与老式农业种植区隔离B. 转基因作物被动物食用后，目旳基因会转入动物体细胞中C. 种植转基因植物有也许因基因扩散而影响野生植物旳遗传多样性D. 转基因植物旳目旳基因也许转入根际微生物答案：B解析：种植转基因作物应防止对别旳植物产生基因污染，因此与老式农业种植区隔离，A对旳；动物取食转基因作物后，要通过消化吸取才进入身体，目旳基因不也许直接进入动物细胞，B错；转基因植物也许与野生植物发生杂交而出现基因交流，影响野生植物旳多样性，C对旳；目旳基因被微生物摄入细胞内后，也许进入这些微生物中，D对旳。
非选择题1. （2023全国新课标T40，分）根据基因工程旳有关知识，回答问题：（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生旳片段，其末端类型有和。
（２）投料运载体用EcoRⅠ切割后产生旳片段如下：为使运载体与目旳基因相连，具有目旳基因旳DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有旳特点是。
选修三,基因工程--高考题含答案
2014年专题1 基因工程（天津卷）4.为达到相应目的，必须．．通过分子检测的是A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D.21三体综合征的诊断【答案】B 【解析】可通过将受体菌接种在含链霉素的培养基中筛选携带链霉素抗性基因的受体菌，A 错误；抗人白细胞介素的杂交瘤细胞应通过抗原-抗体杂交技术筛选产生，B正确；在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉的抗虫效果，C错误；可利用显微镜检测21三体综合征，D错误。
（广东卷）25利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14所示，下列叙述正确的是（）A、过程①需使用逆转录酶B、过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因C、过程③使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备D、过程④可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞【答案】AD 【解析】过程①是以RNA为模板合成DNA的过程，即逆转录过程，需要逆转录酶的催化，故A正确；过程②表示利用PCR扩增目的基因，在PCR过程中，不需要解旋酶，是通过控制温度来达到解旋的目的，故B错；利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，故C错；检测目的基因是否成功导入受体细胞的染色体DNA中，可以采用DNA分子杂交技术，故D正确（课标Ⅱ卷）40．[生物——选修3：现代生物科技专题](15分)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。
若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：（1）理论上，基因组文库含有生物的基因；而cDNA文库中含有生物的基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。
要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的是否得到提高。
2014--2016全国各省市高考基因工程真题
基因工程一、选择题1．应用基因工程方法，可将酵母菌制造成“工程菌”，用于生产乙肝疫苗，在制造该“工程菌”时，应向酵母菌导入下列中的( )A．乙肝病毒的表面抗原B．抗乙肝病毒抗体的基因C．抗乙肝病毒的抗体D．乙肝病毒表面抗原的基因答案：D 解析：运用基因工程方法生产疫苗，导入的一定是基因。
抗乙肝病毒抗体的基因是人体内已存在的基因，制作疫苗选用的是乙肝病毒表面抗原的基因，这样就可以在酵母菌体内表达出大量的乙肝病毒表面抗原，从而可以制作成疫苗。
2．科学家将比目鱼的抗冻蛋白基因转移到西红柿细胞内培育出“抗冻西红柿”，在“目的基因的检测与鉴定”环节，不需要进行的是( )A．利用标记基因，将含有比目鱼抗冻蛋白基因的西红柿细胞筛选出来B．利用分子探针，检测“抗冻西红柿”的DNA上是否插入了抗冻蛋白基因C．利用相应的抗体，检测“抗冻西红柿”细胞中是否形成抗冻蛋白质D．进行抗寒栽培实验，检测“抗冻西红柿”是否能在寒冷环境中生存答案：A 解析：目的基因的检测与鉴定可使用基因探针检测受体细胞中是否含有目的基因，也可使用抗原—抗体杂交法检测目的基因是否翻译出蛋白质，还可在个体水平进行检测，看其是否表现出相应性状。
利用标记基因，将含有比目鱼抗冻蛋白基因的西红柿细胞筛选出来不属于目的基因的检测与鉴定环节。
3．如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“工程菌”的示意图，已知细菌B 细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，下列说法正确的是( )A．将重组质粒导入细菌B细胞常用的方法是显微注射法B．将完成导入过程后的细菌涂布在含氨苄青霉素的培养基上，能生长的只有导入了重组质粒的细菌C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的只有导入了质粒A 的细菌D．目的基因成功表达的标志是在受体细胞中能检测到目的基因的存在答案：C 解析：将基因表达载体导入细菌B细胞常用的方法是转化法，A错误；质粒A 中含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，而重组质粒中含抗氨苄青霉素基因，则在含有氨苄青霉素的培养基上能生长的是导入质粒A或重组质粒的细菌，B错误；质粒A含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，所以完成导入过程后的细菌能在含有四环素的培养基上生长，而重组质粒中的抗四环素基因已经被破坏，所以导入重组质粒的细菌不能在含有四环素的培养基上生长，C正确；根据题干信息分析，目的基因(人的生长激素基因)成功表达的标志是受体细胞能产生人的生长激素，D错误。
高考生物真题按知识点分类汇编91-生物技术与工程-基因工程-目的基因的检测与鉴定(含解析)
五年2018-2022高考生物真题按知识点分类汇编91-生物技术与工程-基因工程-目的基因的检测与鉴定（含解析）一、综合题1．（2022·山东·高考真题）某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。
为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。
P△是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或P△的功能。
(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增P基因。
用于扩增P基因的引物需满足的条件是_______、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______（填“3'端”或“5'端”）。
(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。
将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。
据图甲分析，出现该问题的原因是______。
修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是______。
(3)融合蛋白表达成功后，将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。
各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结果如图丙所示。
已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③组结果的差异推测，药物A的作用是______；由②④组或③⑤组的差异推测，P△中缺失的特定序列的作用是______。
(4)根据以上结果推测，药物A治疗该病的机理是______。
【高考真题分类汇编】基因工程
【高考真题分类汇编】基因工程1．(2019·全国卷Ⅰ)基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。
回答下列问题。
(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。
基因文库包括________和________。
(2)生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是________。
在体外利用PCR 技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是____________________。
上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的________。
(3)目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。
答案(1)基因组文库cDNA文库(2)解旋酶加热至90～95 Ⅰ氢键(3)Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活解析(1)基因工程中的基因文库包括基因组文库和部分基因文库(cDNA文库)。
(2)生物体细胞内的DNA复制开始时，通过解旋酶解开DNA双链。
在体外利用PCR技术扩增目的基因时，通过高温(90～95 Ⅰ)使反应体系中的模板DNA解链为单链。
上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的氢键。
(3)大肠杆菌DNA聚合酶不耐高温，在高温下会失活，而PCR反应体系中加入的聚合酶需耐高温，故在PCR反应中要用能耐高温的Taq酶。
2．[2018·全国卷Ⅱ] 某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。
某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1－GFP融合基因(简称为甲)，并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
全国高考生物试题分章汇编：基因工程(精析版)[ 高考]
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（天津卷）4.为达到相应目的，必须．．通过分子检测的是A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D.21三体综合征的诊断【答案】B【解析】可通过将受体菌接种在含链霉素的培养基中筛选携带链霉素抗性基因的受体菌，A错误；抗人白细胞介素的杂交瘤细胞应通过抗原-抗体杂交技术筛选产生，B正确；在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉的抗虫效果，C错误；可利用显微镜检测21三体综合征，D错误。
（广东卷）25利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14所示，下列叙述正确的是（）A、过程①需使用逆转录酶B、过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因C、过程③使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备D、过程④可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞【答案】AD【解析】过程①是以RNA为模板合成DNA的过程，即逆转录过程，需要逆转录酶的催化，故A正确；过程②表示利用PCR扩增目的基因，在PCR过程中，不需要解旋酶，是通过控制温度来达到解旋的目的，故B错；利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，故C错；检测目的基因是否成功导入受体细胞的染色体DNA中，可以采用DNA分子杂交技术，故D正确（新课标Ⅱ卷）40．[生物——选修3：现代生物科技专题](15分)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。
若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：（1）理论上，基因组文库含有生物的基因；而cDNA文库中含有生物的基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。
要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的是否得到提高。
高中生物高考题分类题基因工程
知识点一基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。
注意：对本概念应从以下几个方面理解：知识点二基因工程的基本工具1•限制性核酸内切酶一一“分子手术刀”(1) 限制性内切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。
(2) 限制性内切酶的作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。
(3) 限制性内切酶的切割方式及结果：①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。
②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。
2. DNA连接酶一一’分子缝合针”(1) 来源：大肠杆菌、T4噬菌体(2) DNA连接酶的种类：E.coliDNA 连接酶和T4DNA连接酶。
(3) 作用及作用部位：E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，T4DNA 连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。
注意：比较有关的DNA酶(1) DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成磷酸、脱氧核糖和含氮碱基(2) DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。
注意：使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温(如94C卜重金属盐的作用下，也可使DNA解旋。
(3)DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。
⑷DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。
注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。
3•基因进入受体细胞的载体一一’分子运输车”(1)分子运载车的种类：①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。
②病毒：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。
2020年高考生物试题分类汇编 基因工程 新课标 精品
解析：考查的知识点为动物细胞培养和基因工程.
(1)为了使组织分散开为单个细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶。
(2)启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端。
(3)PCR反应体系的主要成分应扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶、两种引物。
(4)细胞离体培养时通常表现出：贴壁生长和接触抑制，多孔的中空薄壁小玻璃珠能增大贴壁生长的附着面积，增加培养的细胞数量.
（2020年浙江卷）6、ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是
A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒
B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点
C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada
D.每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。
①第1组：▲；②第2组：▲。
(3) PCR反应体系中含有热稳பைடு நூலகம்DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为▲。
(4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb
(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
答案：（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）（2）启动子终止子（3）TaqDNA聚合酶对干扰素基因特异性的DNA引物对（4）增大细胞贴壁生长的附着面积
（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，
三年高考真题精编——基因工程
专题22基因工程1.（2015·天津卷.6）2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”。
三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。
据图分析，下列叙述错误的是（）A、该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代B、捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给三亲婴儿C、三亲婴儿的染色体全部来自母亲提供的细胞核D、三亲婴儿的培育还需要早期环胎培养和胚胎移植等技术【答案】C【考点定位】本题考查核移植技术、动物细胞培养、体外受精和早期胚胎培养、胚胎移植及细胞质遗传和核基因遗传等知识。
2.( 2015·重庆卷.6)下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是（）A．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得B．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原（起）点C．借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D．启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用【答案】C【考点定位】本题主要是考查利用基因工程改造生物体性状的操作要点。
3.(2014·江苏卷.23)下列关于基因工程技术的叙述,错误的是( )A. 切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6 个核苷酸序列B. PCR 反应中温度的周期性改变是为了 DNA 聚合酶催化不同的反应C. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D. 抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达【答案】ABC【考点定位】基因工程技术的相关知识。
4.(2014·重庆卷.4)题4图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。
以下相关叙述，正确的是( )A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异【答案】D【考点定位】基因工程。
高考生物真题按知识点分类汇编 基因工程的应用
基因工程的应用2012广东6．科学家用人工合成的染色体片段，成功替代了酵母菌的第6号和第9号染色体的部分片段，得到的重组酵母菌能存活，未见明显异常，关于该重组酵母菌的叙述，错误的是A．还可能发生变异 B．表现型仍受环境的影响C．增加了酵母菌的遗传多样性 D．改变了酵母菌的进化方向【答案】Ｄ【解析】用人工合成的染色体片段替代酵母菌的染色体部分片段，属于染色体结构变异，重组酵母菌仍可能发生基因突变等变异，A正确；重组酵母菌的性状受其遗传物质的控制和外界环境条件的影响，B 正确；重组酵母菌的遗传信息和自然状态下的酵母菌有所不同，增加了酵母菌的遗传多样性，C正确；重组酵母菌只是为进化提供了原材料，不能改变酵母菌的进化方向，生物的进化方向由自然选择（环境条件）决定。
【试题点评】本题情景比较新颖，以人工拼接的方法产生酵母菌染色体结构变异为背景，考查生物的变异、生物表现型的决定因素和影响因素、生物进化的实质等内容及学生对所学知识的迁移能力，难度中等。
2012广东28．（16分）子叶黄色（Y，野生型）和绿色（y，突变型）是孟德尔研究的豌豆相对性状之一。
野生型豌豆成熟后，子叶由绿色变为黄色。
（1）在黑暗条件下，野生型和突变型豌豆的叶片总叶绿素含量的变化见图10。
其中，反映突变型豌豆叶片总叶绿素含量变化的曲线是____________。
（2）Y基因和y基因的翻译产物分别是SGR Y蛋白和SGR y蛋白，其部分氨基酸序列见图11。
据图11推测，Y基因突变为y基因的原因是发生了碱基对的_______和_______。
进一步研究发现，SGR Y蛋白和SGR y 蛋白都能进入叶绿体。
可推测，位点_______的突变导致了该蛋白的功能异常，从而使该蛋白调控叶绿素降解的能力减弱，最终使突变型豌豆子叶和叶片维持“常绿”。
（3）水稻Y基因发生突变，也出现了类似的“常绿”突变植株y2，其叶片衰老后仍为绿色。
为验证水稻Y基因的功能，设计了以下实验，请完善。
高考生物真题分类汇编：第38讲 基因工程
高考生物真题分类汇编
真题回访
1.(2021·全国乙卷)用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶,其中4 种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。回答下列问题：
（1） 常用的DN_______酶切割后的DNA 片段可以用 连接酶连接。上图中_____________________________________酶切割后的DNA片段可以用 连接酶连接。
自我复制
一个至多个限制酶切割位点
用含有该种抗生素的培养基培养导入了质粒载体的宿主细胞,能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞
[解析] 复制原点是指质粒在受体细胞中复制时的起点,使质粒能在受体细胞中自我复制。质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点,便于外源DNA插入。用含有某种抗生素的培养基培养导入了质粒载体的宿主细胞,有该种抗生素抗性基因的能够存活,没有该种抗生素抗性基因的宿主细胞不能存活,可筛选出含质粒载体的宿主细胞。
酶（或热稳定DNA聚合酶）
延伸
两种引物分别与两条单链 DNA模板结合
[解析] PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、延伸三步,其中复性的结果是两种引物分别与两条单链DNA模板结合,延伸过程需要酶,由于该过程需要在 的温度下完成,因此需要耐高温的DNA聚合酶,即 酶（或热稳定DNA聚合酶）。
[解析] 连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,图中 和 酶切割后的DNA片段是黏性末端。 连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端,又可以连接双链DNA片段的平末端,图中的4种酶切割后的 DNA片段都可以用 连接酶连接。
和
、 、 和
（2） DNA 连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是_____________。
全国高考生物真题分章(人教目录)汇编：从杂交育种到基因工程(精析)
（新课标Ⅰ卷）32.（9分）现有两个纯合的某作物品种：抗病高杆（易倒伏）和感病矮杆（抗倒伏）品种。
已知抗病对感病为显性，高杆对矮杆为显性，但对于控制这两对相对性状的基因所知甚少。
回答下列问题：（1）在育种实践中，若利用这两个品种进行杂交育种，一般来说，育种目的是获得具有优良性状的新品种。
（2）杂交育种前，为了确定F2代的种植规模，需要正确的预测杂交结果。
若按照孟德尔遗传定律来预测杂交结果，需要满足3个条件：条件之一是抗病与感病这对相对性状受一对等位基因控制，且符合分离定律；其余两个条件是。
（3）为了确定控制上述这两对性状的基因是否满足上述3个条件，可用测交实验来进行检验。
请简要写出该测交实验的过程。
【答案】（1）抗病矮杆（2）高杆与矮杆这对相对性状受一对等位基因控制，且符合分离定律；控制这两对相对性状基因位于非同源染色体上（3）将纯合抗病高秆与感病矮秆植株杂交，产生F1，让F1与感病矮秆杂交。
【解析】（1）杂交育种的目的是获得多种优良性状于一身的纯合新品种，从题意知，抗病与矮杆（抗倒伏）为优良性状。
（2）孟德尔遗传定律研究的是真核生物细胞核基因的遗传特点，故控制相对性状的等位基因应位于细胞核。
两对基因分别位于两对同源染色体上，才遵循基因的自由组合定律。
（3）测交是指用杂合子和隐性纯合子杂交，而题干无杂合子，故应先杂交得到杂合子，然后再进行测交实验。
（江苏卷）13.下图是高产糖化酶菌株的育种过程，有关叙述错．误．的是A.通过上图筛选过程获得的高产菌株未必能作为生产菌株B.X射线处理既可以引起基因突变也可能导致染色体变异C.上图筛选高产菌株的过程是定向选择过程D.每轮诱变相关基因的突变率都会明显提高【答案】D【解析】图示育种过程为诱变育种。
由于基因突变是不定向的，该过程获得的高产菌株不一定符合生产的要求，故A项正确；X射线处理既可以引起基因突变也可能导致染色体变异，B正确；上图筛选高产菌株的过程是定向选择符合人特定要求菌株的过程，C 正确；相同的射线每轮诱变相关基因的突变率不会明显提高，故D项错误。
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（天津4）.为达到相应目的，必须
．．通过分子检测的是
A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选
B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选
C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定
D.21三体综合征的诊断
【答案】B
（天津8）（12分）嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素
酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
（1）PCR扩增bglB基因时，选用基因组DNA作
模板。
（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。
bglB基因不含图中限制酶
识别序列。
为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB
基因两端需分别引入和不同限制酶的识
别序列。
（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在（单选）。
A.50℃
B.60℃
C.70℃
D.80℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。
经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。
（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（多选）。
A.仅针对bglB基因进行诱变
B.bglB基因产生了定向突变
C.bglB基因可快速累积突变
D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
【答案】（1）嗜热土壤芽孢杆菌
（2）NdeⅠBam HⅠ
（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶
（4）失活 B
（5）A、C
（重庆4）.题4图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。
以下相关叙述，正确的是A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
【答案】D
（新课标II）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。
若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：
（1）理论上，基因组文库含有生物的__________基因；而cDNA文库中含有生物的____________基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中____________出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物_________的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。
要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的_________，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的__________是否得到提高。
（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3:1事，则可推测该耐旱基因整合到了___________（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。
40. （1）全部部分
（2）筛选
（3）乙表达产物耐旱性
（4）同源染色体的一条上
（2014海南卷）31[生物—选修3：现代生物科技专题]（15分）
下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。
请据图回答：
⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有、、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为。
⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是。