发育生物学试验
发育生物学实验指南简要
实验一小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养一、目的要求1．掌握小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法。
2．了解小鼠骨髓间充质干细胞的鉴定方法。
3．了解小鼠骨髓间充质干细胞定向分化和鉴定方法。
二、材料与设备1．动物：SD大鼠。
2．主要试剂：胎牛血清（FBS），DMEM--LG培养基，PBS，抗体（NSE和GFAP）。
3．主要器材与仪器：手术剪，手术镊，眼科剪，眼科镊，培养瓶，培养皿，称量瓶，刻度离心管，吹打管，注射器，倒置相差显微镜，CO2培养箱三、实验步骤1．小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSC)的分离培养:⑴小鼠BMSC的分离和原代培养：①以颈髓离断法处死小鼠。
在无菌条件下取出小鼠股骨，除去骨表面附着的组织，用PBS 清洗干净。
②用剪刀去除股骨两端，暴露骨髓腔。
无菌条件下用5ml注射器抽取PBS约3-4ml将小鼠股骨内的骨髓冲出，收集骨髓冲洗液，将收获的全部骨髓用注射器反复抽吸，以打散组织成为细胞悬液。
③收集细胞悬液约7ml并将其转入15毫升离心管中，1500r/min离心5min，弃上清液及脂肪层。
④在细胞沉淀中加入5-6ml含10%胎牛血清的DMEM一LG培养基，倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2 培养箱中培养。
2. 带学生在电脑上观看以往的小鼠间充质干细胞免疫荧光图片。
实验二大鼠神经干细胞的分离培养一、目的要求1．掌握大鼠胚胎神经干细胞的分离培养方法。
2．了解大鼠胚胎神经干细胞的鉴定方法。
3．了解大鼠胚胎神经干细胞定向分化和鉴定方法。
二、材料与设备1．动物：孕龄约15天的Wistar或SD孕鼠2．试剂：条件培养基(DMEM/F12+20ng/mlbFGF+20ng/mlEGF+20μl/mlB27)，D-Hank’s液(NaCl 8g, KCL0.4g，Na2HPO4.12H2O 0.1g, KH2PO4 0.06g, NaHCO3 0.35g, 加水1000ml溶解，调PH 值为7.2－7.4，高压灭菌后，4℃储存备用)，0.25％胰蛋白酶（D-Hank’s液配制，过滤灭菌，-20℃储存），抗体(巢蛋白、NSE、GFAP)。
发育生物学教案-2015年
3、挑虫、培养： (1) 将铂金丝做的笔在酒精灯上烧红后，在线虫培养基上轻划几下，即可用于挑
虫； (2) 解剖显微镜下找到合适的成虫，用“笔”将它轻轻挑起，迅速在解剖显微镜下
将之放到新的平板上，共挑取 3-5 只线虫； (3) 将培养皿做好标记，放到 20℃生化培养箱中培养；
6
(4) 产卵 3 小时后，显微镜下可以看见培养皿上有椭圆颗粒状的线虫卵（胚胎）， 此时，可以将成虫挑走。产卵当天计作 day0。
C.elegans 为蠕虫状，长度约 1mm，因其个体结构简单、体细胞数目恒定， 特定细胞位置固定，生活史短、遗传背景清楚、基因组测序已经完成等，在遗传 与发育生物学、行为与神经生物学、衰老与寿命、人类遗传性疾病、病原体与生 物机体的相互作用、药物筛选、动物的应急反应、环境生物学和信号传导等领域 得到广泛应用。如细胞凋亡现象及其机理以及 RNA 干扰技术最早都是在线虫中 被揭示的。
实验用的大肠杆菌是 OP50 以及 HT115（DE3）。HT115（DE3）菌株是 RNAse III（dsRNA 特异性降解酶）缺陷型，并且可以通过 IPTG 诱导 T7 RNA 聚合酶的 大量表达。
实验用的质粒有三种：L4440 空载质粒，Chc-1 干扰质粒（多克隆位点插入 Chc-1 基因的 L4440 质粒），Daf-16 干扰质粒（多克隆位点插入 Daf-16 基因的 L4440 质粒）。
发育生物学实验
方法与步骤 青蛙排卵季节，携带长柄 铁勺，水桶、10%福尔马 林及玻璃小瓶若干，在早 上5点半——6点到达蛙卵采
集地。
如见雌蛙产卵，即用铁勺轻 轻捞取新鲜卵于水桶中（水 和草用原地的）如未见产卵， 可捞取胶膜清新透明，动植 物极黑白分明的新鲜卵团。 并迅速用10%福尔马林固定一 些新鲜卵于小瓶中。
hCG与垂体促性腺激素的 功能相似，有促进卵巢成熟、 排卵、黄体形成与生长，促使 雄性动物排精等作用，其主要 功能是延长黄体的寿命，维持 妊娠黄体，并使雌激素和孕激 素的合成由卵巢顺利地过渡到 胎盘。
由于hCG具有促进性腺活 动的作用，且在妊娠早期开始 分泌，月经过期15天左右，孕 妇尿中已含有足量的hCG，临 床上即利用这些特点来作早期 妊娠诊断。
方法与步骤
①蟾蜍试验 将受试尿注入雌蟾蜍背部 皮下，8—16小时后蟾蜍
排卵为阳性。
②雄蛙试验 将受试尿注入雄蛙腹部或 背部皮下，2-4小时后， 从其穴肛取出尿液，显微 镜下观察有精虫者为阳性。 ③可注射生理盐水为对照。
方法三
绒毛膜促性腺激素对蛙卵 巢、精巢的作用
目的要求
观察绒毛膜促性腺激 素制剂对蛙卵巢、精 巢的作用、精子的形 态、活动、精原细胞 分裂、精子的变态。
按固定顺序，用吸管吸取卵于 载玻片上，于双目解剖镜下(或 显微镜低倍下)观察蛙卵的发育 时期。 如蛙卵上有尘土，可 将蛙卵吸到手心里，用解剖针 压破胶膜，并在手心里来回拨 动几次，使胶膜与卵分离。然 后用吸管将卵吸回载玻片上观 察。
方法二 蟾蜍的早期胚胎发育
基本原理 原理同上 方法与步骤 用绒毛膜促性腺激素的方 法使卵受精。镜下观察卵 裂至囊胚的发育过程。并 加以描述。
方法与步骤
①从池塘捉一些蝌蚪并将 它们带回实验室。
发育生物学及其临床研究进展
发育生物学及其临床研究进展随着科技的进步和医学的发展，人类对于生命的理解和探索已经取得了长足的进步。
作为生物学的一个分支，发育生物学在这方面发挥了重要作用。
本文将从发育生物学的基本概念、发展历程以及临床应用等方面进行探讨，以期加深读者对此领域的认识。
一、发育生物学的基本概念发育生物学是研究生命从单细胞到多细胞的发育过程以及这一过程中所涉及的分子、细胞和组织等方面的学科。
从单细胞到多细胞的发育过程是非常复杂和精细的，需要调控和协调众多的基因和分子的表达，从而形成一个完整的个体。
发育生物学主要研究这些分子、基因和细胞之间的相互作用关系，以及它们在不同时期和不同组织中的表达和调节方式，深入解析组织和器官的形成和功能，探索生物学的奥秘。
二、发育生物学的发展历程发育生物学的历史可以追溯到古希腊时期，亚里士多德是最早对发育过程进行系统描述的学者之一。
随着解剖学和显微镜技术的发展，发育生物学逐渐成为单独的学科，并得到不断深入和发展。
20世纪初，发育生物学开始转向实验化的方向，例如使用化学物质来控制发育过程，并利用遗传学和细胞生物学的知识解析发育的分子机制。
在这一过程中，清华大学的张锡铭教授等中国学者也做出了一系列开创性的工作。
三、发育生物学的临床应用在临床领域，发育生物学对于某些疾病的研究和治疗提供了有益的帮助。
例如，在某些心脏病的治疗中，利用发育生物学的知识和技术，可以重新调节心脏细胞的分化和增殖，从而恢复心脏功能。
此外，发育生物学的研究也有助于进一步揭示一些人类疾病的发病机制和指导药物研发等方面的工作。
总之，发育生物学是一个重要的学科，对于人类理解生命、探索医学、改善生活等方面都有重要的作用。
相信随着科技的不断进步和人类对于自然的深入理解，发育生物学的研究和应用将得到更加广泛和深入的发展。
发育生物学实验课程建设与思考
然而 ，实验课 程体 系 的建设 一直 相对 滞后 ，仅 有 少数 院校 开设 了发育 生 物学 实验课 程 。实 验 内容 也 主要
依据 授课教 师 的研究 方 向设计 ，学 科框 架 和理论 体 系 都不够完 善 ，且 没有 统一 的、可广泛 接 受和采 纳 的实 验教材 。因此 ，对 于发育 生物学 实验这样一 门既年
织器官等不同层次 和不 同发育 阶段探知 动植物 发育 的
现象 以及分子机制 。同时 ，我们注重科学思维与创 新精神 的培养 和训 练 ，将 部分科 研训练 与实验 教学 有 机结合 ，提供 良好 的开 放创新 实验平 台，激发 学生 的 实验兴趣和积极性。
关键词 ：发 育生物学 ，实验教 学，课程建设 ，人才培养
Ｃｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｒｅ ｌｅ ｆ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｅｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ Ｃｏ ｕ ｒ ｓ ｅ
并重 的特点 …。 目前 ，国 内各大 高等 院校 都 已先后 开
设 了发育生物学理论课程 ，并 陆续 出版了相应 的教材 。
方法 和手段等方 面进行 了学习交 流和 探讨 。通过 学 习 探讨 和多轮教 学实践 的总结 ，发育 生 物学 实验课 程 体
系也得 到 进 一 步 优 化 和 完 善 ，并 取 得 较 好 的教 学 效 果 。文章从不 同的角度 和层面介 绍我 院发育 生 物学 实 验教 学体系 的建设与 成效 ，以期 能为 其他 兄弟 院校 提
高校 生 物 学 教 学 研 究 （ 电 子 版 ）２ ０ １ ５年 ６月 。５ （ ２） ：５ ６ —５ ９
Ｉ Ｓ Ｓ Ｎ ２ ０ ９ ５ － １ ５ ７ ４ Ｃ Ｎ １ １ － ９ ３ ０ ７ ／ Ｒ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ａ ｃ ｈ ． ｈ ｅ ｐ ． ｃ ｏ ｍ ． ｃ ｎ
植物发育生物学实验指导
实验一低拷贝质粒的大量提取——碱法【实验原理】质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。
作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。
在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。
从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。
分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。
在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。
所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA（ocDNA）：质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA（lDNA）：质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型。
质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为：松弛线性的DNA；松弛开环的OC构型；超螺旋的SC构型。
由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭，因此，在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。
道中的SC DNA走在最前沿，OC DNA则位于凝胶的最后边；道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的，它在凝胶中的位置介于OC DNA 和SC DNA 之间。
碱法提取质粒是Ｒ．Ｔreisman尚未发表的方法，同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。
该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效，并可与随后的纯化步骤，如聚乙二醇沉淀或氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心等，一并联合使用。
【药品试剂】1、溶液I：50 mmol/L葡萄糖、 25 mmol/L Tris.Cl（pH8.0）、10mmol/L EDTA（pH8.0）。
溶液I可成批配制，在10 lbf/in2（6.895x104Pa或者是115 ℃）高压下蒸气灭菌15min，贮存于4 ℃。
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。
二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管，连上乳胶管即可。
2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置1.5ml离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置37度水浴锅20分钟，用吸管从离心管上部取50微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式：精子活力＝视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG（每只10单位），48小时后再注射人类绒毛膜促性腺HCG（每只10单位），18小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入1毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。
5 体外授精将卵母细胞与精子共培养（微滴培养法）（演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午12时腹腔注射PMSG，48小时后腹腔注射HCG并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
发育生物学实验报告
发育生物学实验报告发育生物学实验报告引言发育生物学是研究生物体从受精卵到成熟个体的发育过程的科学。
通过实验研究，我们可以深入了解生物的发育机制，揭示生命的奥秘。
本实验旨在通过观察和记录昆虫的发育过程，探索其发育规律和影响因素。
材料与方法在实验中，我们选择了果蝇（Drosophila melanogaster）作为研究对象，因其短寿命、繁殖力强以及遗传学研究的便利性。
我们从实验室中获得了果蝇的受精卵，并将其放置在特定的培养基中。
我们将实验分为以下几个步骤：1. 取出果蝇受精卵：使用显微镜和细长的玻璃棒，小心地取出果蝇受精卵，并将其放入培养基中。
2. 培养受精卵：将培养基置于恒温箱中，保持适宜的温度和湿度条件。
观察受精卵的发育情况，并记录下来。
3. 观察幼虫的发育：当受精卵孵化为幼虫后，我们将其转移到新的培养基中。
每天观察幼虫的体长、体重和外部形态的变化，并记录下来。
4. 观察蛹的形成：当幼虫进入蛹化阶段时，我们将其转移到另一个培养基中。
观察蛹的外部形态变化，以及蛹壳的颜色和硬度的变化。
5. 观察成虫的出现：当蛹化完成后，成虫开始出现。
我们将其转移到新的培养基中，并观察其外部形态、行为特征和寿命。
结果与讨论通过实验观察和记录，我们得出了以下结论：1. 发育过程的时间：果蝇的发育过程相对较短，从受精卵到成虫出现，大约需要10-14天的时间。
其中，受精卵孵化为幼虫的时间约为3-4天，蛹化过程大约持续5-7天。
2. 发育过程的特征：果蝇的发育过程经历了受精卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。
每个阶段都伴随着特定的形态和生理变化。
例如，幼虫阶段的果蝇会经历多次蜕皮，体长和体重会不断增加。
3. 发育过程的影响因素：果蝇的发育过程受到多种因素的影响，包括温度、湿度、养料和遗传因素等。
例如，较高的温度可以加快果蝇的发育速度，而缺乏养料则会延缓其发育进程。
4. 遗传变异的观察：通过观察果蝇群体中的遗传变异现象，我们可以深入了解基因对发育过程的影响。
虫白蜡生理生态和发育生物学的实验研究方法
虫白蜡生理生态和发育生物学的实验研究方法虫白蜡（Coccus hesperidum）是一种重要的农业害虫，主要危害柑橘树和其他果树。
虫白蜡的生理生态和发育生物学是了解其习性和生命周期的重要方面。
实验研究方法在揭示虫白蜡的这些特性方面起着关键作用。
本文将介绍虫白蜡生理生态和发育生物学的实验研究方法。
一、虫白蜡生理生态研究方法1. 虫白蜡的生理特性观察可以使用显微镜观察虫白蜡的形态结构和生理特征。
通过观察虫白蜡的口器结构、足部特征、种群密度等信息，可以了解其适应环境的特点。
2. 虫白蜡的生态习性调查通过实地调查虫白蜡的生态习性，如寄主植物选择、迁飞行为、季节波动等，可以揭示其生活史和适应策略。
这可以通过观察虫白蜡在不同植物上的分布情况和种群密度，以及对不同环境条件的反应来实现。
3. 虫白蜡的生理活动监测通过监测虫白蜡的生活活动，如觅食、繁殖、蜕皮、虫蚀等行为，可以获得其生理活动的时序数据。
可以利用现代昆虫行为学的研究方法，如跟踪记录虫白蜡的运动轨迹和食物取食行为。
4. 虫白蜡的生态相互作用研究研究虫白蜡与其它生物之间的生态相互作用，如寄生昆虫、天敌、共生菌等，可以深入了解虫白蜡种群的动态变化和生态位的特征。
可以利用田间观察、实验室实验和分子生态学方法来研究虫白蜡的生态相互作用。
二、虫白蜡发育生物学研究方法1. 虫白蜡的发育观察通过观察虫白蜡的发育过程，如卵的孵化、幼虫期、蛹期和成虫期等，可以揭示其发育阶段的特征和时序。
可以使用显微镜观察虫白蜡不同发育阶段的形态结构。
2. 虫白蜡的发育速度测定利用时间序列数据测定虫白蜡的发育速度，可以得到不同发育阶段的发育时间和发育速度参数。
这可以通过定期检查种群中个体的发育阶段，并记录其相应的时间来实现。
3. 虫白蜡的发育影响因素研究研究虫白蜡的发育过程受到的环境因素的影响，如温度、湿度、食物质量和数量等，可以揭示其发育生物学的适应性和响应性。
可以通过设置不同的实验条件，并对虫白蜡的发育进行观察和记录来实现。
发育生物学专业介绍(二)2024
发育生物学专业介绍（二）引言：发育生物学是研究生物体从受精到形成成体的过程中发生的变化和发展的科学。
在前文中，我们已经介绍了发育生物学的基本概念和研究方法。
本文将进一步介绍发育生物学专业的相关内容，包括其学科范围、研究实践、就业前景等方面的内容。
正文：一、学科范围1.1 发育生物学的定义和意义1.2 发育生物学的研究对象1.3 发育生物学与其他相关学科的关系1.4 发育生物学的发展历程1.5 发育生物学的前沿研究领域二、研究实践2.1 发育生物学实验室的基本设施和设备2.2 发育生物学实验方法和技术2.3 发育生物学研究中的常见模型生物2.4 发育生物学研究中的数据分析方法2.5 发育生物学研究中的伦理和安全问题三、专业课程3.1 发育生物学的核心课程3.2 与发育生物学相关的其他学科的课程3.3 实践和实习课程3.4 发育生物学研究生的论文要求3.5 发育生物学专业的综合考试要求四、就业前景4.1 发育生物学专业的就业方向4.2 发育生物学专业的就业机会和竞争情况4.3 发育生物学专业在科研机构的就业前景4.4 发育生物学专业在生物医药行业的就业前景4.5 发育生物学专业在教育和科普领域的就业前景五、发展趋势5.1 发育生物学的新兴研究领域5.2 发育生物学与其他学科的交叉融合5.3 发育生物学的技术创新和方法革新5.4 发育生物学对生物科技和医学的贡献5.5 发育生物学的发展趋势和未来展望总结：发育生物学是一个充满活力和前景广阔的学科，通过本文的介绍，我们可以看到发育生物学的学科范围、研究实践、专业课程、就业前景以及未来发展趋势。
发育生物学专业不仅为研究生物体的生长和发育提供了深入的理论知识和实践技能，也为相关行业和研究机构提供了专业人才和科研支持。
对于有兴趣从事发育生物学研究的学生来说，选择发育生物学专业将是一个有前途的选择。
发育生物学的实验教学方法
发育生物学的实验教学方法发育生物学是研究生物体从受精卵到成熟个体的发育过程的学科。
实验教学在发育生物学中起着至关重要的作用，通过实验可以直观地观察和理解生物体发育的过程和机制。
本文将介绍一些发育生物学的实验教学方法，以帮助学生更好地学习和理解这一学科。
一、观察胚胎发育过程观察胚胎发育过程是发育生物学实验教学的重要环节。
学生可以通过显微镜观察受精卵的分裂、胚胎的形态变化等。
可以使用小鼠、果蝇、斑马鱼等模式生物进行实验，这些生物的发育过程相对较短，方便学生观察和实验操作。
通过观察胚胎发育过程，学生可以深入了解细胞分裂、器官形成等发育过程的细节。
二、基因敲除实验基因敲除是一种重要的实验方法，通过敲除特定基因，可以观察到这个基因在发育过程中的作用。
学生可以选择一个感兴趣的基因，通过基因敲除技术将其敲除，然后观察敲除个体的发育过程和表型变化。
这种实验可以帮助学生深入了解基因在发育过程中的作用，并探索基因与发育的关系。
三、细胞培养实验细胞培养是发育生物学实验中常用的方法之一。
学生可以通过细胞培养实验观察细胞的分裂、分化和形态变化等。
可以选择动物细胞或植物细胞进行培养实验，通过观察细胞的生长和变化，学生可以更加直观地理解细胞的发育过程和机制。
四、基因表达实验基因表达是发育生物学中一个重要的研究方向。
学生可以选择一个感兴趣的基因，通过基因表达实验观察该基因在发育过程中的表达情况。
可以使用荧光标记等方法来标记基因的表达，然后观察标记物在胚胎或组织中的分布情况。
通过这种实验，学生可以了解基因在发育过程中的动态表达模式。
五、模型构建实验模型构建是发育生物学实验中常用的方法之一。
学生可以选择一个发育过程进行模拟，通过构建模型来观察和理解发育过程中的关键因素和机制。
例如，可以构建一个模拟胚胎发育的系统，通过调控不同因素的作用来观察胚胎发育的变化。
通过模型构建实验，学生可以更加深入地理解发育过程中的复杂性和动态性。
综上所述，发育生物学的实验教学方法多种多样，通过观察胚胎发育过程、基因敲除、细胞培养、基因表达和模型构建等实验，可以帮助学生更好地理解和探索发育生物学的奥秘。
发育生物学实验
发育生物学实验指导2008-2009学年第二学期2009年4月2日实验一1原理卵巢表面为单层立方或扁平的表面上皮，上皮下方为薄层致密结缔组织构成的白膜。
卵巢实质分为皮质和髓质。
皮质含不同发育阶段的卵泡、黄体和白体，卵泡间结缔组织由低分化的梭形的基质细胞、网状纤维及散在的平滑肌纤维构成。
髓质有血管和淋巴管。
近卵巢门处有少量门细胞，其结构和功能类似睾丸间质细胞，可分泌雄激素，在FSH和LH刺激下，每个周期有一批卵泡发育，其中之一发育成熟并排卵。
卵泡的发育分为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡四个阶段。
①原始卵泡体积小，由一个初级卵母细胞和一层扁平的卵泡细胞构成。
初级卵母细胞为圆形，直径约40μm，核大而圆，染色浅，核仁明显，胞质嗜酸性。
初级卵母细胞是在胚胎时期由卵原细胞分裂分化形成，并停滞在第一次减数分裂前期，直至排卵前才完成分裂。
②初级卵泡为原始卵泡在FSH的作用下发育形成。
初级卵母细胞增大，在靠近质膜的胞质中出现电子致密的溶酶体，称皮质颗粒。
卵泡细胞增生，由扁平变为立方形或柱状，由单层变为多层；最内一层卵泡细胞为柱状，呈放射状排列，称放射冠。
在初级卵母细胞与放射冠的卵泡细胞之间出现一层均质状、嗜酸性的透明带。
构成透明带的蛋白中，ZP3为精子受体。
③次级卵泡其内出现卵泡腔，腔内充满卵泡液；初级卵母细胞、透明带、放射冠及部分卵泡细胞突入卵泡腔内形成卵丘；卵泡腔周围的数层卵泡细胞形成卵泡壁，称颗粒层，卵泡细胞改称颗粒细胞。
初级卵泡和次级卵泡合称生长卵泡，其周围形成卵泡膜。
卵泡膜内层有多边形或梭形的膜细胞，具有分泌类固醇激素细胞的特征；外层有胶原纤维和平滑肌纤维，膜细胞合成雄激素，雄激素进入颗粒细胞，转化为雌激素，故雌激素由两种细胞联合产生。
④成熟卵泡在LH刺激下，次级卵泡发育为成熟卵泡。
初级卵母细胞直径可达150μm。
由于卵泡液急剧增多卵泡体积显著增大，直径可超过2cm，并向卵巢表面突出。
在排卵前36～48小时，初级卵母细胞完成第一次减数分裂，形成次级卵母细胞和第一极体。
发育生物学实验讲义
发育生物学实验讲义主编：余雪松贾伟章李浩明2007年7月（仅供内部使用，请勿外传）前言发育生物学被公认为是当今生命科学的前沿分支学科，是研究生物体发育过程及其调控机制的一门学科。
发育生物学不同于传统的胚胎学，它是生物化学、分子生物学、细胞生物学、遗传学等学科与胚胎学相互渗透的基础上发展形成的一门新兴的学科，是胚胎学的继承和发扬。
发育生物学同时又是一门实验的科学，正是由于发育生物学实验技术的进步才推动了发育生物学的发展。
关于发育生物学实验，国内目前尚无系统的实验教材。
考虑到我院生物科学专业本科的课程设置特点以及我院的实验条件，在编写这本实验教材时设置了相关的实验，参考有关资料进行编写。
考虑到学生用活胚胎作实验缺乏经验和实验内容尽可能多的涵盖重要的发育原理和研究方法，实验内容为生物发育模式的形态观察，以切片观察为主，同时以活的胚胎来观察发育过程并进行实验为补充。
对于部分因课时和实验条件的限制可能暂时无法开展的实验，利用教学录像等多种手段让学生了解发育生物学实验技术的发展和应用。
通过一些实验手段对生物的发育机制进行探讨。
本课程通过对几种模式动物（海胆、文昌鱼、斑马鱼、鲫鱼、蛙、鸡等）生殖和发育过程的实验观察，促进学生对发育的时空连续性变化的理解和对生命系统的敏锐认识和重视；同时掌握发育生物学重要的原理和研究实验的基本技能。
培养学生成为具有独立实验操作技能和一定分析解决问题能力的创新人才。
由于时间仓促，水平有限，在内容和方法上可能还存在不少缺点错误，欢迎批判指正，以便在今后进行实验内容的调整和改进。
余雪松贾伟章李浩明广东药学院生命科学与生物制药学院2007年7月目录实验一........................................... 海胆早期胚胎发育4 实验二......................................... 文昌鱼早期胚胎发育7 实验三 ......................................... 文昌鱼组织结构观察10 实验四 ......................................... 斑马鱼早期胚胎发育13 实验五 ........................................... 鲫鱼早期胚胎发育16 实验六 ........................................... 鲫鱼组织结构观察20 实验七 ............................................. 蛙早期胚胎发育24 实验八 ................................. 蛙的人工催产及体外跌卵实验29 实验九 ............................... 鸡卵的人工孵育和胚胎发育观察32实验一：海胆早期胚胎发育一、实验生物海胆，别名刺锅子、海刺猬，体形呈圆球状，就像一个个带刺的紫色仙人球，因而得了个雅号—“海中刺客”。
发育生物学实验
发育生物学实验合作合同甲方（委托方）：_____________________________________地址：_____________________________________________联系电话：__________________________________________法定代表人：_______________________________________乙方（承办方）：_____________________________________地址：_____________________________________________联系电话：__________________________________________法定代表人：_______________________________________为确保发育生物学实验项目的顺利开展，甲乙双方在平等自愿的基础上，根据相关法律法规及科研规范，就发育生物学实验项目的合作事宜达成如下协议：一、项目概述1.1 项目名称：发育生物学实验1.2 项目目标：通过实验研究特定生物的发育过程，探索发育机制和调控因子。
1.3 项目内容：_______________________________________（如细胞分化、基因表达调控、胚胎发育等具体实验内容）1.4 实验地点：_______________________________________1.5 项目周期：自______年___月___日起至______年___月___日止。
二、甲方的权利与义务2.1 甲方应提供项目所需的实验材料、设备或数据，并确保其完整性与真实性。
2.2 甲方有权根据项目进展对乙方的实验方案、实验操作提出建议，并有权对实验的实施进行监督。
2.3 甲方应按约定及时支付实验费用，并协助乙方解决实验过程中遇到的特殊问题。
2.4 甲方有权在项目完成后获得实验结果、数据及相关报告，且甲方对实验数据拥有使用权。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
发育生物学实验
Experiments of Development Biology
【课程编号】 【课程类别】限选课程
【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学
【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日
一、教学目标
通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配
实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性
主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性
主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性
主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
实验四、小鼠胚胎的收集和培养技术层次 基础性
主要内容：学习和掌握小鼠胚胎的生产、培育和收集方法，掌握不同发育时期胚胎的基本特征，掌握器官形成的基本规律。
学会小鼠配对，交配检查等基本方法；明确国际实验动物管理的基本规则等。
教学要求：了解鼠胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解小鼠配对，交配检查，胚胎日龄的计算方法；明确国际实验动物管理的基本规则等。
实验五、小鼠胚胎原位杂交技术分析基因的表达与功能层次综合性
层次 综合性
主要内容：在鼠形体（胚轴）发育不同阶段，利用原位杂交或免疫组织化学方法，检测母源性基因（BCD）、缺口基因（TILL）、成对控制基因（FTZ）、体节极性基因（HH，WG）或蛋白的表达。
掌握利用原位杂交或免疫组织化学方法研究鼠胚发育的基本组织学方法。
附：利用抗体技术鉴定鸡胚基因的表达与功能
教学要求：了解鼠胚发育的不同阶段及其形态特征。
明确小鼠形体（胚轴）发育不同阶段，相关基因的级联控制特点。
掌握利用原位杂交或免疫组织化学研究鼠胚发育的基本组织学方法。
附：利用抗体技术鉴定鸡胚基因的表达与功能
实验六、Real-Time PCR 技术分析动物/植物不同发育阶段的组织特异性基因表达层次 综合性
主要内容：依据所能获得的实验材料（动物/植物），有目的的检测与发育相关的特异性基因表达。
明确发育与基因表达的时空概念和器官组织基因特异性表达的生理学意义。
学会如何利用Real-Time PCR 技术分析研究不同发育阶段以及组织特异性基因表达。
教学要求：学生必须熟练掌握动植物解剖的基本技术，快速获取所需要的组织/器官。
明确动植物组织的低温保存方法。
RNA 的提取，RT-PCR反转录cDNA的基本技术。
重点、难点：
实验七、环境因素对动/植物发育的影响与检测层次综合性
主要内容：环境因素对动植物的生长发育至关重要，通过模式动植物与环境因素的相互作用，探讨环境因素对生长发育过程的直接或间接影响。
从而明确遗传和环境对发育的重要性。
可以利用现有的条件，自行设计环境胁迫或物理化学处理或药物处理，观察和检测有关发育生物学数据。
教学要求：学生必须熟练掌握动植物生理生化、代谢调控的基本知识。
可以利用所学过的生物学技术和方法，设计检测有关的生化指标，生理学指标，分子生物学指标等等。
重点、难点：
实验八、植物花器官及雌雄配子体的发育层次综合性
主要内容：花粉离体培养、成熟花粉离体萌发和花粉管生长、胚胎发育及形态特征观察。
教学要求：（必备项）了解研究植物花器官及雌雄配子体的发育的实验技术与方法，理解和掌握植物组织材料的石蜡切片和冰冻切片以及花粉的离体培养技术、胚胎发育及形态特征观察方法。
重点、难点：花粉离体培养、石蜡切片和冰冻切片
其它教学环节：
实验九、植物基因转化及转基因植物的分析与鉴定 层次 综合性与设计性
主要内容：植物无菌苗的培养、芽和根的诱导及植株再生、农杆菌培养、根瘤农杆菌转化烟草、转基因植株中GUS（GFP）活性检测、转基因植株的表型及细胞水平鉴定。
教学要求：（必备项）了解外源基因导入植物细胞的实验方法，并理解每种方法的基本原理，掌握植物无菌苗的培养以及芽和根的诱导及植株再生实验技术、农杆菌介导的转基因方法以及转基因产物的筛选和鉴定基本过程。
重点、难点：植物无菌苗的培养、根瘤农杆菌转化烟草、转基因植株中GUS（GFP）活性检测。
其它教学环节：
三、教材与学习资源（必备项）
基因工程原理（第二版） 吴乃虎编著，分子克隆实验指南 （第三版）黄培堂 等译
最新分子生物学实验技术
梁国栋主编科学出版社
分子生物学实验指导
魏群主编高等教育出版社
魏群 等译高等教育出版社
最新分子生物学实验技术
梁国栋主编科学出版社
分子生物学实验指导
魏群主编高等教育出版社
四、先修课要求（必备项）及教学策略与方法建议（可选项）
先修课的要求：生物化学、分子生物学及生物化学实验、基因工程、蛋白质工程、细胞工程、细胞生物学及实验
教学策略与方法建议：多媒体教学，每次实验前对上次实验进行简要总结。
实验中穿插安排小组讨论与集体讨论。
以科研研究思路设计和安排综合系列实验，培养学生独立操作、分析问题和解决问题的能力，以提高学生从事科学研究的综合素质。
课程班规模要求: 每个实验班限定30人以内。
五、考核方式（必备项） 本课程成绩由平时成绩（80%）和期末考试成绩（20%）两部分组成。
平时成绩包括：实验态度和习惯20%、实验技能40%、实验报告40%。
期末考试包括实验设计报告70%和实验总结及体会30%，重点考察学生对发育生物学实验基本理论和实验技能的理解、掌握及其灵活应用的能力。