第七章薄层色谱法详解
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略：在操作方法中部分介绍
第三节 操作方法及注意事项
一、仪器的性能检定 二、背景干扰的消除 三、样品测定操作方法
1、薄层板的制备 2、点样
3、展开 4、显色和定位
5、薄层扫描仪对斑点扫描
第28页，共57页。
1、薄层板的制备 要求：玻璃板需光洁，否则吸附剂易脱落；
大小由需求决定。
第29页，共57页。
1、薄层板的制备
（2）形成分子内H键时，被吸附力减弱；
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
常见官能团极性顺序： 烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<酯类<酮类 <醛类<硫醇<胺类<醇类<酚类<羧酸类
第24页，共57页。
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大展开剂极性大 被分离成分极性小展开剂极性小
Rf越小,反之越大。
c b
B
第18页，共57页。
（二）比移值与相对比移值 （2）相对比移值Rs：为消除系统误差
原点到样品组分斑点中心的距离 Rs 原点到对照品斑点中心的距离
Rf<1, Rs不一定小于1。
第19页，共57页。
二、吸附薄层色谱中吸附剂与展开剂
（一）吸附剂（固定相）的选择 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂
a、倾注法：
硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状 硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
第33页，共57页。
（2）硬板的制备 b、平铺法： 过程：制板→振荡→晾干→活化→备用
优点：一次铺多块薄层板，简单易行。
1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 3. 玻璃夹板 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板
● 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物 碱以及其它碱性化合物的分离。
● 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、 醌以及酯类化合物的分离。
● 酸性氧化铝：适用于有机酸类的分离。
第22页，共57页。
硅胶、氧化铝的含水量与活性级别
活性等级
I
II
III
氧化铝加水量 /% 0
3
6
硅胶加水量 /%
0
5
15
IV
V
等。吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合物不反应
第20页，共57页。
（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广
物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的分离
机械强度好，适用于薄层色谱
吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等
第21页，共57页。
（2）氧化铝：a.极性吸附剂，较硅胶强。 b.物理吸附为主，氢键吸附为辅 c.微碱性，不直接用于酸类成分的分离
第42页，共57页。
3、展开
（1）展开方式：
c、单向二次展萜开烯类
d、双向二次展开
极 性 较 小 的 展 开 剂
含氧衍生物
萜的各类含 氧衍生物
原点：含氧衍生物
极性较大的展开剂
第43页，共57页。
3、展开
（2）注意事项：
a、色谱槽需密闭良好
脂溶性展开剂：甘油淀粉糊
水溶性展开剂：凡士林 b、注意防止边缘效应
毛细管或点样器不能混用，
斑点大小适当，可多次点样。
平头50ul微量点样器
全自动点样仪
第39页，共57页。
3、展开
展开缸（色谱缸）
第40页，共57页。
3、展开 （1）展开方式：
a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。
第41页，共57页。
3、展开
（1）展开方式：
b、上行展开
过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿
10
15
25
38
硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性地除去。 利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理， 以控制吸附剂的活性。
第23页，共57页。
被分离物质极性与吸附能力的关系
硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。 一般规律： （1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附；
对对照品显色，以此为依 据刮下含有样品的吸附剂
展开
将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度
第51页，共57页。
（三）含量测定 3、薄层扫描法
（1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测 组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线 法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照 品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确 进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标 准曲线上查出其浓度，工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距
显色方便 应用广泛：化合物的鉴别和少量化合物的分离
用于检测药品含量 药物合成中用于鉴别反应程度和监控反应历程
用于摸索高效液相的色谱条件
第16页，共57页。
第一节 薄层色谱法的基本原理
一、基本原理
(一)吸附色谱分离原理
利用吸附剂对不同成分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差异
进行分离。
吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快， 一段时后，组分被分离。
第44页，共57页。
4、显色和定位
一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂
加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法
紫外灯观察
喷显色剂观察
第45页，共57页。
5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描
用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上 进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的 变化从而达到定量的目的。
固定相:固体吸附剂 流动相:液体展开剂
第17页，共57页。
（二）比移值与相对比移值
（1）比移值Rf：
原点到斑点中心的距离
溶剂 前沿
Rf 原点到溶剂前沿的距离
Rf
(a
)
a c
R
b f(b) c
a
起始线
A
Rf是薄层色谱法基本定性参数，一定条件时Rf为定值， 在0～1之间，可用范围Rf值在0.2～0.8之间。组分极性越大，
薄层板分类和制法
软板的制备
硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
第30页，共57页。
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂
要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性
优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。
缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。
3.橡皮膏 4.橡皮管
第31页，共57页。
1、薄层板的制备
薄层板分类和制法
软板的制备
硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
第32页，共57页。
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板
常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ） 机械强度差，易脱落，但不易腐蚀 羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度好，不易脱落，但易腐蚀且
第七章薄层色谱法ppt课 件
第1页，共57页。
概述
一、色谱法的起源、发展及定义
第2页，共57页。
一、色谱法的起源、发展及定义
柱色谱→薄层色谱和纸色谱→气相色谱→毛细管柱 液相色谱（经典）
色谱→高效液相色谱→薄层扫描仪→毛细管电泳→色谱-光谱联 用、多维色谱、智能色谱。
第3页，共57页。
气质联用
第11页，共57页。
填充柱色谱法 GC 毛细管柱色谱法
色谱法
高效液相色谱法 柱色谱 经典液相色谱法
LC 平面色谱法
薄层色谱法 纸色谱
CE 毛细管电泳色谱法
吸附柱色谱 分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱
第12页，共57页。
三、色谱过程
第13页，共57页。
四、色谱曲线相关术语
色谱峰
W：峰宽 Wh/2：半峰宽
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，化合物在色
谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
常用溶剂极性大小 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜乙醚＜三氯甲烷（氯仿）＜乙酸乙 酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
第25页，共57页。
吸附剂、展开剂选择规律
活泼 Ⅰ
C’
吸附剂
（固定相）
B
极性 C
杂质对照品制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟
肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶
液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶 液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一 硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3:2） 为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后 检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑 点。
基线
t0：死时间
tR：保留时间 tR，：调整保留时间
第14页，共57页。
第七章
薄层色谱法
第15页，共57页。
薄层色谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫平
面色谱法。通常将固定相(吸附剂)均匀地涂铺在表面洁
净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成薄板，进行样品分离。
特点：快速 灵敏（用量小）
高选择性（如同分异构体） 简便
展开剂 （流动相）
不活泼 B’
Ⅴ
A’ A
非极性
非极性
极性
被分离物质
考虑三方面因素：被分离组分极性，吸附剂活性、洗脱剂极性。
第26页，共57页。
硅胶薄层色谱规律总结
被分离组分 展开剂 吸附剂 Rf 被分离物洗
极性
极性 活性
脱顺序
大
大
弱
小 后洗脱
小
小
强
大 先洗脱
第27页，共57页。
第二节 薄层色谱系统简介
第34页，共57页。
（2）硬板的制备
c、机械涂布法：
优点：简单方便、薄板厚度均匀、分离效果好。
手动涂布器
全自动涂布器
第35页，共57页。
常用的薄层板：
软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧化铝 CMC-Na板、硅胶GF<[254]> 、硅胶GF<[356]>
第36页，共57页。
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？
水可以用吗？
第37页，共57页。
2、点样
（2）点样量： 与薄层板的关系
太多太少的影响
点样基线：距底边2.0cm
样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
第38页，共57页。
2、点样
（3）点样方法：
划线、样品记号点、点样
注：动作要轻，
☻按操作方法不同分类
☻按色谱分离过程的原理不同分类
第8页，共57页。按操作方法不同分类薄色谱纸色谱柱色谱
第9页，共57页。
二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
☻按操作方法不同分类 ☻按色谱分离过程的原理不同分类
第10页，共57页。
按色谱分离过程的原理不同分类
（1）吸附色谱 （2）分配色谱 （3）离子交换色谱 （4）分子排阻色谱（凝胶色谱法)
第48页，共57页。
（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振摇，使地西
泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml 中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样展开后，供试品溶液如显杂 质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
第49页，共57页。
（三）含量测定
1、目视比较法：
对照品制成不同浓度的系列溶液
样品制成定量溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
注：本法适用于近似含量的测定，误差±10%
第50页，共57页。
（三）含量测定
2、斑点洗脱法
对照品制成溶液 点于薄板两侧
样品制成一定浓度溶液 线状点于薄板起始线中间部分
☻按操作方法不同分类
☻按色谱分离过程的原理不同分类
第6页，共57页。
按两相状态不同分类
色谱其中的一相固定不动，称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液
体），称为流动相。
两 相 流动相 状 态 的物态
液相色谱 （LC）
气相色谱 （GC）
第7页，共57页。
二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
第4页，共57页。
一、色谱法的起源、发展及定义 又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极性、离子交
换能力、分子大小等）的不同，当流动相携带样品流经固定相时， 样品各组分在两相中不断的重新分配，最终达到分离与提纯，以 便于对样品进行定性和定量分析的分析方法。
第5页，共57页。
二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
第46页，共57页。
四、结果计算和判断
（一）定性鉴别 判断依据：Rf值、Rs值
1、查找资料：影响Rf值的因素
吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点 样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。
2、对照品比较法：常用。
第47页，共57页。
（二）杂质检查（杂质限量检查）
1、对照品比较法：
第三节 操作方法及注意事项
一、仪器的性能检定 二、背景干扰的消除 三、样品测定操作方法
1、薄层板的制备 2、点样
3、展开 4、显色和定位
5、薄层扫描仪对斑点扫描
第28页，共57页。
1、薄层板的制备 要求：玻璃板需光洁，否则吸附剂易脱落；
大小由需求决定。
第29页，共57页。
1、薄层板的制备
（2）形成分子内H键时，被吸附力减弱；
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
常见官能团极性顺序： 烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<酯类<酮类 <醛类<硫醇<胺类<醇类<酚类<羧酸类
第24页，共57页。
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大展开剂极性大 被分离成分极性小展开剂极性小
Rf越小,反之越大。
c b
B
第18页，共57页。
（二）比移值与相对比移值 （2）相对比移值Rs：为消除系统误差
原点到样品组分斑点中心的距离 Rs 原点到对照品斑点中心的距离
Rf<1, Rs不一定小于1。
第19页，共57页。
二、吸附薄层色谱中吸附剂与展开剂
（一）吸附剂（固定相）的选择 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂
a、倾注法：
硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状 硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
第33页，共57页。
（2）硬板的制备 b、平铺法： 过程：制板→振荡→晾干→活化→备用
优点：一次铺多块薄层板，简单易行。
1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 3. 玻璃夹板 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板
● 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物 碱以及其它碱性化合物的分离。
● 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、 醌以及酯类化合物的分离。
● 酸性氧化铝：适用于有机酸类的分离。
第22页，共57页。
硅胶、氧化铝的含水量与活性级别
活性等级
I
II
III
氧化铝加水量 /% 0
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硅胶加水量 /%
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IV
V
等。吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合物不反应
第20页，共57页。
（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广
物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的分离
机械强度好，适用于薄层色谱
吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等
第21页，共57页。
（2）氧化铝：a.极性吸附剂，较硅胶强。 b.物理吸附为主，氢键吸附为辅 c.微碱性，不直接用于酸类成分的分离
第42页，共57页。
3、展开
（1）展开方式：
c、单向二次展萜开烯类
d、双向二次展开
极 性 较 小 的 展 开 剂
含氧衍生物
萜的各类含 氧衍生物
原点：含氧衍生物
极性较大的展开剂
第43页，共57页。
3、展开
（2）注意事项：
a、色谱槽需密闭良好
脂溶性展开剂：甘油淀粉糊
水溶性展开剂：凡士林 b、注意防止边缘效应
毛细管或点样器不能混用，
斑点大小适当，可多次点样。
平头50ul微量点样器
全自动点样仪
第39页，共57页。
3、展开
展开缸（色谱缸）
第40页，共57页。
3、展开 （1）展开方式：
a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。
第41页，共57页。
3、展开
（1）展开方式：
b、上行展开
过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿
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硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性地除去。 利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理， 以控制吸附剂的活性。
第23页，共57页。
被分离物质极性与吸附能力的关系
硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。 一般规律： （1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附；
对对照品显色，以此为依 据刮下含有样品的吸附剂
展开
将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度
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（三）含量测定 3、薄层扫描法
（1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测 组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线 法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照 品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确 进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标 准曲线上查出其浓度，工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距
显色方便 应用广泛：化合物的鉴别和少量化合物的分离
用于检测药品含量 药物合成中用于鉴别反应程度和监控反应历程
用于摸索高效液相的色谱条件
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第一节 薄层色谱法的基本原理
一、基本原理
(一)吸附色谱分离原理
利用吸附剂对不同成分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差异
进行分离。
吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快， 一段时后，组分被分离。
第44页，共57页。
4、显色和定位
一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂
加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法
紫外灯观察
喷显色剂观察
第45页，共57页。
5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描
用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上 进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的 变化从而达到定量的目的。
固定相:固体吸附剂 流动相:液体展开剂
第17页，共57页。
（二）比移值与相对比移值
（1）比移值Rf：
原点到斑点中心的距离
溶剂 前沿
Rf 原点到溶剂前沿的距离
Rf
(a
)
a c
R
b f(b) c
a
起始线
A
Rf是薄层色谱法基本定性参数，一定条件时Rf为定值， 在0～1之间，可用范围Rf值在0.2～0.8之间。组分极性越大，
薄层板分类和制法
软板的制备
硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
第30页，共57页。
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂
要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性
优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。
缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。
3.橡皮膏 4.橡皮管
第31页，共57页。
1、薄层板的制备
薄层板分类和制法
软板的制备
硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
第32页，共57页。
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板
常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ） 机械强度差，易脱落，但不易腐蚀 羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度好，不易脱落，但易腐蚀且
第七章薄层色谱法ppt课 件
第1页，共57页。
概述
一、色谱法的起源、发展及定义
第2页，共57页。
一、色谱法的起源、发展及定义
柱色谱→薄层色谱和纸色谱→气相色谱→毛细管柱 液相色谱（经典）
色谱→高效液相色谱→薄层扫描仪→毛细管电泳→色谱-光谱联 用、多维色谱、智能色谱。
第3页，共57页。
气质联用
第11页，共57页。
填充柱色谱法 GC 毛细管柱色谱法
色谱法
高效液相色谱法 柱色谱 经典液相色谱法
LC 平面色谱法
薄层色谱法 纸色谱
CE 毛细管电泳色谱法
吸附柱色谱 分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱
第12页，共57页。
三、色谱过程
第13页，共57页。
四、色谱曲线相关术语
色谱峰
W：峰宽 Wh/2：半峰宽
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，化合物在色
谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
常用溶剂极性大小 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜乙醚＜三氯甲烷（氯仿）＜乙酸乙 酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
第25页，共57页。
吸附剂、展开剂选择规律
活泼 Ⅰ
C’
吸附剂
（固定相）
B
极性 C
杂质对照品制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟
肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶
液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶 液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一 硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3:2） 为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后 检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑 点。
基线
t0：死时间
tR：保留时间 tR，：调整保留时间
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第七章
薄层色谱法
第15页，共57页。
薄层色谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫平
面色谱法。通常将固定相(吸附剂)均匀地涂铺在表面洁
净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成薄板，进行样品分离。
特点：快速 灵敏（用量小）
高选择性（如同分异构体） 简便
展开剂 （流动相）
不活泼 B’
Ⅴ
A’ A
非极性
非极性
极性
被分离物质
考虑三方面因素：被分离组分极性，吸附剂活性、洗脱剂极性。
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硅胶薄层色谱规律总结
被分离组分 展开剂 吸附剂 Rf 被分离物洗
极性
极性 活性
脱顺序
大
大
弱
小 后洗脱
小
小
强
大 先洗脱
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第二节 薄层色谱系统简介
第34页，共57页。
（2）硬板的制备
c、机械涂布法：
优点：简单方便、薄板厚度均匀、分离效果好。
手动涂布器
全自动涂布器
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常用的薄层板：
软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧化铝 CMC-Na板、硅胶GF<[254]> 、硅胶GF<[356]>
第36页，共57页。
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？
水可以用吗？
第37页，共57页。
2、点样
（2）点样量： 与薄层板的关系
太多太少的影响
点样基线：距底边2.0cm
样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
第38页，共57页。
2、点样
（3）点样方法：
划线、样品记号点、点样
注：动作要轻，
☻按操作方法不同分类
☻按色谱分离过程的原理不同分类
第8页，共57页。按操作方法不同分类薄色谱纸色谱柱色谱
第9页，共57页。
二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
☻按操作方法不同分类 ☻按色谱分离过程的原理不同分类
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按色谱分离过程的原理不同分类
（1）吸附色谱 （2）分配色谱 （3）离子交换色谱 （4）分子排阻色谱（凝胶色谱法)
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（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振摇，使地西
泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml 中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样展开后，供试品溶液如显杂 质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
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（三）含量测定
1、目视比较法：
对照品制成不同浓度的系列溶液
样品制成定量溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
注：本法适用于近似含量的测定，误差±10%
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（三）含量测定
2、斑点洗脱法
对照品制成溶液 点于薄板两侧
样品制成一定浓度溶液 线状点于薄板起始线中间部分
☻按操作方法不同分类
☻按色谱分离过程的原理不同分类
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按两相状态不同分类
色谱其中的一相固定不动，称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液
体），称为流动相。
两 相 流动相 状 态 的物态
液相色谱 （LC）
气相色谱 （GC）
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二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
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一、色谱法的起源、发展及定义 又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极性、离子交
换能力、分子大小等）的不同，当流动相携带样品流经固定相时， 样品各组分在两相中不断的重新分配，最终达到分离与提纯，以 便于对样品进行定性和定量分析的分析方法。
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二、色谱法的分类
☻按两相状态不同分类
第46页，共57页。
四、结果计算和判断
（一）定性鉴别 判断依据：Rf值、Rs值
1、查找资料：影响Rf值的因素
吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点 样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。
2、对照品比较法：常用。
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（二）杂质检查（杂质限量检查）
1、对照品比较法：