核桃叶提取液对衰老模型小鼠记忆力的影响

核桃叶提取液对衰老模型小鼠记忆力的影响【摘要】［目的］观察核桃叶提取液对小鼠记忆功能的影响. ［方法］将84只小鼠随机分为空白对照组、模型组、维生素E组和核桃叶提取液大、中、小剂量组，每组各为14只.给予小鼠皮下注射D-半乳糖建立衰老模型，核桃叶提取物各剂量组灌胃给予相应剂量的核桃叶提取液，30 d后利用Morris水迷宫仪观察小鼠记忆能力. ［结果］与模型组比较，核桃叶提取液各剂量组小鼠搜索站台的潜伏期均明显缩短，而穿越站台的次数则明显增加. ［结论］核桃叶对D-半乳糖所致衰老模型小鼠的记忆功能具有一定的改善作用.
【关键词】抗衰老药（中药）；植物，药用；小鼠
ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the effects of the Walnut leaf for memory in mouse. METHODS The senescence model of mice was established by subcutaneous injection with the D-galactose. Total 84 mice were randomly divided into control group, model group, Vitamin E group and large, medium and small dose of the Walnut leaf extract groups. The mice were given by intragastric administration with different dose of the Walnut leaf extract for thirty days, and then the ability of memory was examined by the Morris water maze. RESULTS The latent period of searching platform was shortened and exploratory behavior was enhanced in every medication group as compared with the model group. CONCLUSION The Walnut leafextract has some effects of improving
the memory in senescence model of mice induced by D-glactose.
Key words:antiaging drugs(TCD);plants, medicinal;mice
核桃叶别名为胡桃叶，为胡桃科植物胡桃（Juglans regia L）的叶.研究表明,核桃叶具有较好的体外抗菌作用，还具有抑制肿瘤细胞生长的作用［1，2］.本实验采用D-半乳糖制作小鼠衰老模型，利用Morris水迷宫仪观察了核桃叶提取液对小鼠记忆功能的影响，旨在为核桃叶的临床应用提供依据.
1 材料与方法
1.1 材料实验动物取健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重为(20±2)g，由延边大学医学部实验动物科提供.核桃叶水提取液：采集长白山地区核桃叶，晒干，粉碎，加水浸泡24 h，水煎提取4次，合并提取液，浓缩得质量浓度为10 g/L的核桃叶生药；D-半乳糖为国药集团化学试剂有限公司产品；维生素E为浙江医药股份有限公司产品.Morris水迷宫视频分析系统及Dig Behv动物行为分析系统为上海吉量软件科技有限公司产品.
1.2 方法
1.2.1 动物分组及处理取84只健康昆明种小鼠，雌雄各半,适应环境1周后按体重随机分为6个组，即空白对照组、模型组、维生素E组和核桃叶提取液大、中、小剂量组，每组各为14只.每日给予除空白对照组外的其他各组小鼠皮下注射D-半乳糖0.12 g/kg，给予空白对照组小鼠皮下注射50 mL/kg生理盐水.同时,每日分别灌胃给予核桃叶水提取液大、中、小剂量组小鼠核桃叶水提取液12,6,3 g/kg，
灌胃给予维生素E组小鼠维生素E 100 mg/kg，模型组和空白对照组每日灌胃给予100 mL/kg蒸馏水，连续30 d.于第31日起利用Morris 水迷宫视频分析系统和Dig Behv动物行为分析系统软件测试记忆能力.
1.2.2 动物的训练与测试本实验所用的通用Morris水迷宫是直径为120 cm，高为50 cm的圆形水池,其内壁为黑色，池内水深为22 cm，水温保持在(22±2)℃，房间内光照恒定，无光线反射在水面.池壁上以4个等距离点，即东（E）、南（S）、西（W）、北（N）将水池分为4个象限，分别称为SW,NW,SE,NE象限.在NE象限正中，距池壁30 cm处放置1个直径为6 cm,高为21.5 cm的圆形黑色站台，站台低于水面0.5 cm，迷宫上方安装着连接显示系统的摄像机.训练时间为4 d，每日分上、下午时间段，其中上午为8:00～10:00,下午为13:00～15:00,每个时间段内每组小鼠均连续训练2次，其间隔不短于10 min.训练时将小鼠在南（S）点面向池壁放入水中，开始计时,若小鼠在60 s内搜索到站台并停留10 s，则以其后的时间为潜伏期;若小鼠在60 s 内未搜索到站台，则将其引至站台并停留10 s，潜伏期记录为60 s ［3］.于实验第6日检测各组小鼠长时程记忆功能,内容包括定位游泳和空间搜索.游泳实验时选择SW象限的中心作为入水点，将小鼠面向池壁放入水中，检测小鼠寻找站台的潜伏期.间隔10 min后撤除站台，进行空间搜索实验.将站台撤除后，同样选择SW象限的中心作为入水点，将小鼠面向池壁轻轻放入水中，观察并记录60 s内小鼠穿越原站台位置的次数.
1.2.3 统计学处理小鼠运动轨迹及测试结果的显示处理均采用上海吉量软件科技有限公司研制的动物行为分析软件.所有数据从Morris水迷宫分析系统数据库中调出，以均数±标准偏差（±SD)表示，组间比较采用t检验，统计学处理采用SPSS 10.0软件进行.
2 结果
2.1 各组小鼠定向游泳时潜伏期的比较各组小鼠不同训练时段的潜伏期见表1.模型组与对照组相比较，第1～4日的潜伏期及平均潜伏期间无显著性差异（P＞0.05）;核桃叶提取液大、中、小剂量组小鼠第1日的潜伏期较模型组明显缩短,相比较均有显著性差异（P＜0.05），第2,3,4日的潜伏期及平均潜伏期间无显著性差异（P＞0.05）.
2.2 各组小鼠记忆力的比较于实验第6日检测小鼠形成的空间记忆，结果见表2.由表2可见，与空白对照组相比，模型组小鼠搜索站台的潜伏期和穿越站台的次数不同程度地延长和增多，其中搜索站台潜伏期的变化间有显著性差异（P＜0.05），提示模型制作成功.与模型组比较，维生素E组小鼠穿越站台的次数明显增多,组间比较有显著性差异（P＜0.01），但搜索站台的潜伏期间无显著性差异（P＞0.05）；各剂量核桃叶提取液组小鼠穿越站台的次数均明显增加，搜索站台的潜伏期均明显缩短,与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05,P＜0.01）.表1 各组小鼠定向游泳实验中潜伏期的比较表2 各组小鼠空间搜索能力的比较
3 讨论
学习记忆是脑的重要功能，药物可直接作用于各种记忆过程，同
时机体的各种精神活动如情绪、动机、内分泌、活动水平及应激状态等也可间接影响记忆过程.D-半乳糖对学习记忆能力的影响在于代谢产物半乳糖醇在体内不能被进一步代谢而堆积在细胞内，影响渗透压导致细胞肿胀、代谢紊乱及体内活性氧水平升高，导致细胞膜脂质受损，出现脑神经元退行性变化，包括神经元数目减少、脑组织中SOD 活性下降、MDA及脂褐素浓度升高、B型单胺氧化酶（MAO-B）活性增高等变化，表现为学习记忆能力下降，这种变化与自然老龄小鼠相似［4］.学习记忆过程较复杂，而它的神经基础是神经元之间的连接，并依靠突触结构、形态和功能的可塑性及合成学习记忆信息传递的载体，如乙酰胆碱、儿茶酚胺、γ-氨基丁酸、神经肽等神经递质有关［5］.这些学习记忆过程中必需的神经递质又与各种营养素紧密相关，所以摄食调结在一定程度上可改善或促进记忆力.核桃叶内含有没食子酸、缩没食子酸、油酸、柠檬烯、胡桃叶醌、胡桃甙、5-羟色胺及黄酮等多种化学成分［6，7］，具有抗氧化作用［8］.目前，国内外多采用建立条件反射的方法检测动物的行为和脑的高级功能，其中水迷宫法的应用较为广泛.本研究结果表明，各剂量核桃叶提取液组小鼠在早期搜索站台潜伏期均明显缩短，增加小鼠穿越站台的次数，提示核桃叶水提取液可明显改善衰老模型小鼠空间位置觉和方向觉（空间定位），改善记忆功能.
【参考文献】
［1］姚振生,叶荷平,陈杰,等.野核桃叶提取物的体外抗菌作用［J］.江西中医学院学报,2001,13(3):122.
［2］宋华,包永明,张红梅,等.核桃楸叶提取液对肿瘤细胞的抑制作用［J］.大连轻工学院学报,2001,20(2):109.
［3］张莉,于玮,韩太真,等.不同训练方式建立大鼠空间记忆后海马结构NMDA受体表达的变化［J］.生理学报,2006,58(5):442.
［4］骆静,郑陶冶,莫扎拜,等.火麻仁提取液对D-半乳糖致衰老模型小鼠学习记忆及代谢产物的影响［J］.北京师范大学学报（自然科学版）,2003，39（3）：386.
［5］徐项桂,桑虎,陆俊.螺旋藻对小白鼠生长发育过程中学习记忆能力的影响［J］.中华临床医学卫生杂志,2005,3(11):1.
［6］江苏新医学院.中药大词典［M］.上海：上海科学技术出版社,2003.1 546.
［7］翟梅枝,张凤云,高绍棠,等.核桃液总黄酮提取方法研究［J］.陕西林业科技,2000,27(1):5.
［8］尉芹,马希汉,韩学文,等.核桃叶抗氧化作用的研究［J］.食品科学，2001,22（7）：81.。