不同情况下奶牛布鲁氏菌病检测方法对比

养殖与饲料2023年第04期
布鲁氏菌病（Brucellosis ，以下简称布病）是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，为我国二类动物疫病[1]。

布鲁氏菌属革兰氏阴性菌，呈球杆状或卵圆形，菌体长约0.6μm ×1.5μm 、宽约0.3μm ×0.6μm ，属于变形杆菌属的α2亚纲，1886年发现于马耳他岛军队的死亡士兵体内，最初的传染源为山羊的奶制品[2]。

该病不仅每年造成养殖业严重的经济损失，而且会威胁公共卫生安全。

所以，布病的净化工作已经是当前养殖业发展的重要任务，疫苗免疫是反刍动物布病防控工作中的重要一步。

疫苗免疫虽然能够有效防止布病的传播，但是也容易在布病检测过程中造成误诊[3]，当前许多检测方法并不能完全对天然感染和后天免疫形成的抗体进行识别，本研究对疫苗免疫后不同时间节点采用不同检测方法平行检测，通过对比数据，分析
在使用不同疫苗时如何有效减少布病的误诊。

1材料与方法
1.1试验动物
在选定的规模化奶牛养殖场对3月龄的犊牛
使用RBT 进行初筛，选择20头未进行过免疫的阴性牛作为试验对象。

1.2主要试剂
布病A19株疫苗、布病S2株疫苗均购自金宇保灵生物有限公司，RBT 、iELISA 试剂盒、cELISA 试剂盒、AGID 试剂盒均购自西班牙INGEZIM 有限公司，布病检测卡购自上海快灵科技生物有限公司。

1.3试验设计
将20头布病阴性牛随机分为2组，每组10头，分别使用A19株疫苗和S2株疫苗进行免疫，将
收稿日期：2022-10-24
基金项目：河北省重点研发计划项目，规模化奶牛场布鲁氏菌病快速诊断与综合防控技术集成与示范（20326601D ）；河北省河北省现代农业
产业技术体系奶牛产业创新团队（HBCT2018120406）
作者简介：袁
方，男，1996年生，硕士研究生。

*通信作者：薛占永，男，1964年生，硕士，教授。

不同情况下奶牛布鲁氏菌病
检测方法对比
袁
方1，王晓芳2，邵丽玮2，剧
力京3，
符乐2，胡晓月2，赵志强2，薛占永1*
1.河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北邯郸056000；
2.河北省畜牧兽医研究所，
河北保定071000；3.保定市畜牧工作站，河北保定071000
摘要[目的]筛选出不同情况下奶牛养殖场适用的布鲁氏菌病检测方法。

[方法]分别使用虎红平板凝集试验
（RBT ）、间接酶联免疫吸附试验（iELISA ）、竞争酶联免疫吸附试验（cELISA ）、琼脂扩散试验（AGID ）、布病监测卡5种方法对A19和S2株疫苗免疫的牛群在免疫后0~180d 进行检测。

[结果]AGID-NH 在疫苗免疫后能够有效区分天然感染与疫苗免疫的个体，iELISA 在疫苗免疫后检测抗体水平灵敏度最高，5种血清学方法在未免疫牛群的布鲁氏菌病抗体检测中均未出现假阳性。

[结论]5种血清学方法均可用于未进行免疫的牛场布鲁氏菌病初筛工作，养殖场应根据疫苗使用情况选择免疫后布鲁氏菌病抗体的检测方法。

关键词
布鲁氏菌病；奶牛；抗体；血清学检测
疾病防控
96··
养殖与饲料2023年第04期
组别
免疫时间/d
0A19疫苗
0S2疫苗
3000
6090000
12000
150180000
表5AGID-NH 法检测免疫后抗体阳性率
%
组别
免疫时间/d
0A19疫苗
0S2疫苗
30
1000609080600
120400
1501800200
表1RBT 法检测免疫后抗体阳性率
%
组别
免疫时间/d
0A19疫苗
0S2疫苗
3010090
60
901009080
120800
150********
表2iLISA 法检测免疫后抗体率
%
组别
免疫时间/d
A19疫苗
0S2疫苗
30400
609020900
120700
150********
表3cELISA 法检测免疫后抗体阳性率
%
A19免疫组和S2免疫组分栏饲养。

在免疫后0、30、60、90、120、150、180d 时分别对2组牛颈静脉采集10mL 血液样品，分离血清，检测抗体。

1.4检测方法
RBT 操作与判定方法按照《动物布鲁氏菌病诊
断技术》（GB/T 18646-2018）标准进行；iELISA 、cELISA 、AGID 和布病监测卡均按照试剂盒所提供
说明书进行操作与结果判定，对检测结果进行统计分析。

2结果与分析
2.1RBT 试验检测结果
A19株和S2株疫苗免疫后在0d 时均未检测
出抗体呈阳性的个体，A19株疫苗免疫组在30d 时
检测阳性个体数为10头，至150d 逐渐减至0头，但180d 时还可检测出2头阳性个体。

S2株疫苗在免疫后的180d 中RBT 检测均未检测到抗体阳性个体（表1）。

2.2iELISA 检测结果
A19株和S2株疫苗免疫后在0d 时均未检测
出抗体呈阳性的个体，A19株疫苗免疫组在30、60d
时检测出抗体阳性个体数均为10头，至180d 期间逐渐减至2头。

S2株疫苗在30d 时检测抗体阳性个体头数为9头，60d 时检测抗体阳性个体头数为8头，90d 及之后未检测出抗体阳性个体（表2）。

2.3cELISA 检测结果
A19株和S2株疫苗免疫后在0d 时均未检测
出抗体呈阳性的个体，A19株疫苗免疫组在免疫后
不同时间点抗体检测的阳性率并不稳定，30d 时为
4头，60d 时减至2头，在90d 时抗体阳性头数为9头，120d 和150d 阳性个体均为7头，180d 时升至8头。

S2株疫苗组在免疫后180d 内均未检出抗体阳性个体（表3）。

2.4AGID-LPS 试验检测结果
AGID-LSP 试验在A19株疫苗免疫组免疫后的
30d 检测出阳性个体4头，
60d 检测仅出阳性个体1头，其他时间节点均未检出阳性个体。

S2株疫苗免疫后180d 内均未检出阳性个体（表4）。

2.5AGID-NH 试验检测结果
AGID -NH 试验在疫苗免疫后180d 内2
组牛群中抗体阳性率均为0（表5）。

2.6布病检测卡检测结果
A19株和S2株疫苗免疫后在0d 时均未检测出
抗体呈阳性的个体，A19株疫苗免疫组在免疫后的
30~120d 全组检测抗体均呈阳性，150d 和180d 未检出阳性个体。

S2疫苗组免疫后仅在30d 时检出阳性个体为5头，60d 时检测到阳性个体为3头，其余时间点均未检出阳性个体（表6）。

表4AGID-LPS 法检测免疫后抗体阳性率
%
组别
免疫时间/d
0A19疫苗
0S2疫苗
30400
60901000
12000
150180000
疾病防控
97··
养殖与饲料2023年第04期
组别
免疫时间/d 0
A19疫苗0 S2疫苗030
100
50
6090
100100
300
120
100
150180
00
00
表6布病检测卡检测免疫后抗体阳性率%
3讨论
目前，我国《动物布鲁氏菌诊断技术》中规定SAT为布病确诊的定性方法，但是SAT检测过程复杂，且敏感性和特异性较低，在国际上已经鲜有使用。

根据世界动物卫生组织（World Organization for Animal Health，OIE）参考手册，国际贸易中牛布病的指定诊断方法为CFT，虽然补体结合试验特异性强，误检率低，但是其操作复杂，对检测者要求过高[4]，并不适合在我国奶牛养殖一线使用。

本试验对近年来养殖一线常用的血清学检测方法进行对比，总结出针对不同情况对布病阳性初筛、布病疫苗免疫后效果检测的适用方案。

本次试验对不同疫苗免疫后的不同时间节点进行抗体检测的结果差异较大，但是整体S2株疫苗免疫后检测抗体阳性率要低于A19株疫苗免疫后的结果，这可能是由于S2菌株来源于猪种布鲁氏菌，且毒力较A19株疫苗要弱，免疫后的抗体水平略低，低灵敏度的检测方法无法检出个体阳性。

如果在牛群免疫后需要进行免疫检测，要根据不同的情况选择不同的检测方法才能最大程度减少误检。

使用A19株疫苗的养殖场RBT、iELISA、cELISA 均可作为免疫后抗体水平检测的参考方案。

S2株疫苗免疫后仅在iELISA和布病监测卡的试验方法中检测出抗体阳性个体，但是布病监测卡的灵敏度低于iELISA，所以在养殖场选择S2株疫苗免疫后对免疫效果进行检测推荐使用iELISA方案。

AGID试验在免疫后抗体的检测中灵敏度较低，仅在AGID-LPS试验中30d和60d检出抗体阳性个体，AGID 试验可能更适用于免疫后的布病阳性个体筛选。

有试验证明，琼脂扩散试验能够验证免疫S2疫苗后的动物是否存在野毒感染[6]，这与本次试验结果相符，在本次AGID-NH试验中S2免疫组和A19免疫组均未检测出阳性个体，AGID-NH可以为奶牛养殖场免疫后的牛群布病初筛提供一定的判断依据。

2022年农业农村部发布《畜间布鲁氏菌病防控五年行动方案》，要求布病的防控与净化工作要做好源头防控。

做好布病的源头防控工作不仅要在引进种源时做好布病检测[5]，而且种源引进后还需隔离饲养，定期检测布病为阴性后才可混入其他种群饲养。

本次在所有的血清学检测方案中免疫0d的牛群均未检测出抗体假阳性的个体，我国现行国标规定RBT和iELISA可以作为布病检测的初筛方案，在养殖场条件有限的情况下可以用其他血清学检测方法作为初筛判定，检测出阳性或疑似阳性个体后再报送有关防疫部门对牛群进行普检。

由于不同奶牛养殖场的养殖情况不同，会选择使用不同的疫苗进行免疫，不同检测方法对S2株疫苗和A19株疫苗免疫后的牛群进行布病抗体检测结果有较大的差异。

本次试验通过对A19株疫苗和S2株疫苗免疫后用RBT、iELISA、cELISA、AGID 和布病监测卡5种不同血清学方案进行试验，筛选出针对不同情况使用的血清学检测方法。

在使用S2疫苗免疫的养殖场，iELISA可以作为免疫后抗体水平检测的方案，其余检测方法可以作为免疫后牛群布病初筛的方案。

使用A19疫苗的养殖场cELISA 抗体阳性检测结果并不稳定，AGID-LPS检测的灵敏度低，免疫后牛群抗体水平检测方案可选择RBT、iELISA和布病监测卡，AGID-NH可作为免疫后牛群布病阳性初筛方案。

参考文献
[1]JIAO H，ZHOU Z，LI B，et al.The mechanism of facultative in-
tracellular parasitism of Brucella[J].International journal of molecular sciences，2021，22（7）：3673-3673.
[2]齐竹.马耳他布鲁菌淄博分离株遗传进化分析及iELISA检测方
法的建立[D].泰安：山东农业大学，2022.
[3]申捷，宝音达来，马立峰，等.布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究[J].中国动物检疫，2015，32（1）：68-73.
[4]齐景文，依颖新，周艳红，等.牛羊布鲁氏菌病四种血清学检测方
法对比分析[J].中国动物检疫，2015，32（4）：57-59.
[5]赵霞.牛羊引种布病防控策略[J].养殖与饲料，2018（10）：87-88.
[6]杨珍，尼博，田莉莉，等.半抗原琼脂扩散试验鉴别布鲁氏菌感染
抗体和S2，Rev.1免疫抗体的研究与应用[J].中国人兽共患病学报，2017，33（2）：126-130.
【责任编辑：胡敏】
疾病防控98
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