miR-495在骨肉瘤细胞中表达变化、对MG-63细胞增殖的影响及其机制

、 表达质粒，转染、 、 、 后，采用 法检测 细胞增殖能 ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＋ ＨＭＧＡ２
２４ ４８ ７２ ９６ ｈ来自ＣＣＫ８ＭＧ６３
力。应用靶基因在线预测数据库ｍｉＲａｎｄａ 并结合基因的功能分析进行ｍｉＲ４９５ 的靶基因预测。采用双荧光素酶报
告实验验证ｍｉＲ４９５ 与靶基因的结合位点。采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 法验证ｍｉＲ４９５ 对高迁移率族蛋白Ａ２（ ） ＨＭＧＡ２
： ， Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉＲ４９５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ
ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ＭＧ６３ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｗｅｌｌｓ ａｓ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｍｉＲ
分子机制。方法 采用ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ 法检测人骨肉瘤细胞系Ｓａｏｓ２、Ｕ２０Ｓ、ＭＧ６３ 及人成骨细胞ｈＦＯＢ１． １９ 中的
。将 细胞分为阴性对照组、 组、 组，分别转染 、 ｍｉＲ４９５ ＭＧ６３
ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＋ ＨＭＧＡ２
ｍｉｍｉｃｓＮＣ
： ｄｏｉ １０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００２２６６Ｘ． ２０１８． ２３． ００５
： （ ） 中图分类号： 文献标志码： 文章编号
Ｒ７３８． １
Ａ
１００２２６６Ｘ ２０１８ ２３００１８０４
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ４９５ ｉｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＧ６３ ｃｅｌｌｓ
山东医药２０１８ 年第５８ 卷第２３ 期
ｍ细ｉＲ胞４增９５殖在的骨影肉响瘤及细其胞机中制表达变化、对ＭＧ６３
王美凤１，邢国英１，宫锦蕾１，孙英华１，夏海１，王复超１，张兆卿２ （１ 潍坊医学院附属益都中心医院，山东潍坊２６２５００；２ 大连医科大学附属第一医院）
摘要：目的 观察ｍｉＲ４９５ 在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤ＭＧ６３ 细胞增殖的影响，并探讨可能的
ＭＧ６３ 细胞ＯＤ 值高于ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ 组（Ｐ 均＜ ０． ０１）。双荧光素酶报告实验结果提示ｍｉＲ４９５ 可与ＨＭＧＡ２ 的
３′ＵＴＲ 区特异性结合，从而显著抑制荧光素酶活性。ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ 组ＭＧ６３ 细胞中ＨＭＧＡ２ 蛋白的相对表达量
低于 组， 组 细胞中 蛋白的相对表达量高于 组 ｍｉｍｉｃｓＮＣ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＋ ＨＭＧＡ２ ＭＧ６３
， ， ， ４９５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ Ｓａｏｓ２ Ｕ２０Ｓ ａｎｄ ＭＧ６３ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｈＦＯＢ１． １９ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｄｅ ： （ ｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ． Ｔｈｅ ＭＧ６３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ）， （ ）， （ ｍｉｍｉｃｓＮＣ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ｇｒｏｕｐ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＋ ＨＭＧＡ２ ｇｒｏｕｐ ｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔ ） ｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ａｎｄ ＨＭＧＡ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ． Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＧ６３ ｃｅｌｌ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＣＣＫ８ ａｔ ， ， ２４ ４８ ７２ ａｎｄ ９６ ｈ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ． Ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅ ｏｎｌｉｎｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｍｉＲａｎｄａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａ
ｎａｌｙｓｉｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｍｉＲ４９５． Ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｍｉＲ４９５ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ａｓｓａｙ． Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｖｅｒｉｆｙ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉＲ４９５ ｏｎ ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ
ＨＭＧＡ２
ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ
（Ｐ 均＜０． ０１）。结论 骨肉瘤细胞中ｍｉＲ４９５ 的表达水平低于正常成骨细胞；上调ｍｉＲ４９５ 表达后骨肉瘤细胞增
殖受到抑制；ｍｉＲ４９５ 可能通过靶向调控ＨＭＧＡ２ 表达从而抑制骨肉瘤细胞的增殖。
关键词：骨肉瘤；骨肉瘤细胞；微小ＲＮＡ４９５；细胞增殖；高迁移率族蛋白Ａ２
， ， ， ， ， ， ＷＡＮＧ Ｍｅｉｆｅｎｇ１ ＸＩＮＧ Ｇｕｏｙｉｎｇ ＧＯＮＧ Ｊｉｎｌｅｉ ＳＵＮ Ｙｉｎｇｈｕａ ＸＩＡ Ｈａｉ ＷＡＮＧ Ｆｕｃｈａｏ ＺＨＡＮＧ Ｚｈａｏｑｉｎｇ （ ， ， ） １ Ｙｉｄｕ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｗｅｉｆａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｉｆａｎｇ ２６２５００ Ｃｈｉｎａ
表达的靶向调控作用。结果 、 、 Ｓａｏｓ２ ＭＧ６３ Ｕ２０Ｓ 细胞中ｍｉＲ４９５ 的相对表达量低于ｈＦＯＢ１． １９ 细胞（Ｐ 均＜
）。转染 、 、 后 组 细胞 值低于阴性对照组组， 组 ０． ０１
４８ ７２ ９６ ｈ ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＭＧ６３
ＯＤ
ｍｉＲ４９５ ｍｉｍｉｃｓ ＋ ＨＭＧＡ２