3株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析

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Animal Husbandry ＆ Veterinary Medicine 2014 Vol. 46 No. 12
囊数和每日每只鸡排卵囊总量，统计每只鸡平均排卵 囊总量，以卵囊相对减少率 （ 保护率） 作为试验指 标。判断方法： 按 McDonald 等［5］报道的方法对保护 率进行评价，以保护率≥75% 判为有效。
畜牧与兽医 2014 年 第 46 卷 第 12 期
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3 株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析
吴彩艳，孙铭飞，戚南山，廖申权，李娟，吕敏娜，谢明权
（ 广东省农业科学院动物卫生研究所 / 广东省兽医公共卫生公共实验室 / 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广东 广州 510640）
摘要： 本研究对 3 株鸡巨型艾美耳球虫 （ Eimeria maxima） 福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析，其中广东株属于早熟株。将 7 日龄雏鸡
将 7 日龄雏鸡分成 3 组，每组 20 只，分别经口 免疫 E. maxima 福 建 株、上 海 株 和 广 东 株 孢 子 化 卵 囊，免疫剂量为 100 个 / 羽，同时设立不免疫不攻虫 对照组。12 d 后从免疫组挑选大小一致、体重相近 的鸡分成 9 组，每组 5 只，分别经口攻击上海株、广 东株和福建株孢子化卵囊，剂量为 100 个 / 羽，从攻 虫后第 4 天起，每日收集各组粪便，进行 OPG 记数， 至攻虫后第 11 天结束试验。将 12 日龄未免疫鸡分成 3 组，每组 5 只，分别经口感染上海株、广东株和福 建株孢子化卵囊，剂量为 100 个 / 羽，作为免疫攻虫 组对照 （ 表 1） 。用麦氏虫卵计数法计数 每 克 粪 便 卵
免疫攻虫组与不免疫攻虫组相比较，卵囊产量下 降明显，说明雏鸡免疫后对球虫的再感染具有一定的 抵抗力 （ 图 2） 。
图 1 E. maxima 不同地理株排卵囊曲线
2. 3 E. maxima 交叉免疫保护 从表 1 可以看出，雏鸡免疫 E. maxima 孢子化卵
囊后对同源及异源虫株的再感染具有不同程度的抵抗 力，免疫上海株后分别攻击上海株、广东株和福建 株，对 同 源 攻 击 的 保 护 效 果 最 好， 保 护 率 达 98. 71% ； 对 广 东 株 有 部 分 交 叉 保 护， 保 护 率 为 60. 61% ； 对 福 建 株 的 交 叉 保 护 效 果 最 差 仅 为 42. 99% 。免疫福建株后再分别以福建株、上海 株、 广东株感染，其保护率分别为 98. 53% ，40. 78% 和 59. 43% 。广东株免疫组对广东株、上海株和福建株 攻击的保护率分别为 98. 53% 、69. 57% 和 72. 37% ， 其保护率明显高于上海株和福建株免疫组。从免疫效 果来看，雏鸡免疫后对同源虫株的攻击保护率均大于 75% ，保护效果明显，而对异源虫株的攻击保护率均 小于 75% ，交叉保护效果不明显。总体上，广东株 的交叉免疫保护率最高，但均小于 75% ，提示各分 离株间 免 疫 原 性 存 在 差 异，以 广 东 株 的 免 疫 原 性 最好。
致谢： 内蒙古农业大学杨晓野教授和中国农业科学院兰 州兽医研究所蔡建平研究员对本试验给予的悉心指导和帮助！
参考文献：
［1］ Lillehoj H S，Kim C H，Keeler，et al． Immunogenomic approaches to study host immunity to enteric pathogens ［J］． Poult Sci，2007， 86： 1491 － 1500．
［2］ Min W，Dalloul Ｒ A，Lillehoj H S． Applicationof biotechnological tools for coccidian vaccine development ［J］． J Vet Sci，2004， （ 5） ： 279 － 288．
图 2 雏鸡免疫攻虫后排卵囊总量比较
畜牧与兽医 2014 年 第 46 卷 第 12 期
组别
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
表 1 E. maxima 不同分离株的免疫保护率结果
7 日龄免疫
免疫虫株
上海株 上海株 上海株 福建株 福建株 福建株 广东株 广东株 广东株
－ － － －
依据 Ｒose 等［6］的方法计算卵囊相对减少率 （ 保 护率） ：
保护率（ % ） = 不免疫攻击组卵囊总量 － 免疫攻击组卵囊总量
不免疫攻击组卵囊总. maxima 排卵囊曲线的绘制 试验鸡于 7 日龄经口感染广东株孢子化卵囊，自
感染后第 5 天开始有卵囊排出，随即卵囊数量迅速上 升，在第 6 天粪便中的卵囊数达到峰值，然后卵囊排 出减少，直至第 9 天时不能再检到卵囊； 雏鸡感染上 海株孢子化卵囊，从感染后第 6 天开始有卵囊排出， 随后卵囊数持续升高，在感染第 7 天粪便中的卵囊数 达到峰值，然后卵囊排出减少，直至第 10 天无卵囊 排出，福建株的排卵囊趋势与上海株相似 （ 图 1） 。 2. 2 E. maxima 排卵囊总量的比较
将无球虫感染的 30 只 7 日龄雏鸡平均分成 3 组， 分别经口感染 E. maxima 福建株、上海株和广东株孢 子化卵囊，剂量为 100 个 / 羽。自感染后第 4 天开始， 以 24 h 为一时间段，收集全部粪便，计数卵囊，直 至粪便中不能检到卵囊为止，以每日克粪便卵囊数绘 制排卵囊曲线。 1. 6 E. maxima 交叉免疫保护试验
剂量 / （ 个·羽）
100 100 100 100 100 100 100 100 100
－ － － －
鸡数 （ 只）
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
19 日龄攻虫
攻虫虫株
上海株 广东株 福建株 福建株 广东株 上海株 广东株 上海株 福建株 上海株 广东株 福建株
－
剂量 / （ 个·羽）
100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
－
结果
排卵囊总量 （ × 105 个）
52 1615 2338
56 1535 2240
30 1057 960 4101 3474 3782
0
保护率 （ %）
98. 71 60. 61 42. 99 98. 53 59. 43 40. 78 98. 89 69. 57 72. 37 0 0 0
分别免疫 3 株 E. maxima 孢子化卵囊，12 d 后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊，设不免疫攻虫对照组和不免疫不攻虫对照组，17
d 开始收集粪便直至无卵囊排出为止，每日计数卵囊，计算卵囊相对减少率。结果： 雏鸡免疫后以同源虫株攻击，保护率均在 98% 以上，而雏鸡
免疫后以异源虫株攻击，其交叉保护率在 40. 78% ～ 72. 37% 之间。提示： E. maxima 对同源虫株的保护率明显高于对异源虫株的保护率，说明各
本试验中以广东株的交叉保护效果最好，可能是 由于广东株具有早熟株的特性，潜在期较其他虫株明 显缩短，排卵囊高峰出现在第 6 天，较其他虫株提前 1 d，将雏鸡分别感染相同剂量的不同分离株孢子化 卵囊，以广东株的卵囊产量最低，相应的致病性也最 弱，但其保护力与其他虫株相当或稍高，显示其具有 较好的免疫原性。鉴于广东株的优点，可以将该虫株 作为研制减毒活卵囊疫苗的候选虫株。
分离株间抗原性存在差异。
关键词： 鸡； 巨型艾美耳球虫； 免疫原性
中图分类号： S852. 7
文献标志码： B
文章编号： 0529 － 5130（ 2014） 12 － 0067 － 03
鸡球虫病 （ Coccidiosis） 是养禽生产中最常见的 一种寄生虫病，由顶复门艾美耳属球虫寄生于鸡的肠 道上皮细胞所引起。主要危害 3 月龄以内的雏鸡，死 亡率可 达 80% 。耐 过 的 雏 鸡 生 长 缓 慢，发 育 不 良， 成鸡多为带虫者，增重缓慢，产蛋率下降，对养鸡业 的危害十分严重［1 － 3］。一直以来药物作为防控鸡球虫 病的主要手段，存在抗药性严重和药物残留等诸多问 题，因此急需寻找一种有效的方法来防控鸡球虫病。 而疫苗免疫预防恰能弥补上述缺点，对鸡球虫病的防 控也起到了积极地作用，但是目前市售的活卵囊疫苗 多为强毒株制成，临床上存在散毒及致病的风险，因 此迫切需要寻找致病力弱、免疫原性良好的虫株用于 免疫预防。研究发现患过球虫病的鸡对球虫的再感染 具有免疫力，同种球虫间的免疫反应是特异的，一般 认为 无 虫 种 间 的 交 叉 免 疫 保 护， 但 是 试 验 证 实 E. maxima与 E. tenella 及 E. acervulina 之间存在部分交 叉保护，7 种艾美耳球虫中以 E. maxima 免疫原性最 强，且株间 存 在 免 疫 原 性 差 异［4］。 目 前 关 于 国 内 早 熟株与地区分离株的免疫原性分析未见报道，本试验 对 E. maxima 地区分离株和早熟株进行交叉免疫保护 试验，分析其免疫原性，为鸡球虫活卵囊疫苗的研制 提供候选虫株。
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3 讨论
艾美耳球虫感染雏鸡可产生种属特异性免疫，而 E. maxima 还具有虫株特异性免疫［7］。雏鸡感染小剂 量的 E. maxima 孢子化卵囊对同株球虫的攻击即可产 生几乎完 全 的 保 护 力［8］， 对 田 间 分 离 株 之 间 进 行 交 叉免疫保护试验，显示不同来源的分离株之间存在免 疫原性多样性［7，9］。陶建平等［10］通过同源株免疫力和 异源株交叉免疫力试验对 11 株 E. maxima 免疫原性 进行分析，结果表明 E. maxima 免疫原性差异株在我 国普遍存在，提示在研制国产高效球虫病疫苗时，应 选择适宜的地域株作为疫苗株。Lee 等［11］对从韩国 不同地区分离的 4 株 E. maxima 进行交叉免疫原性研 究，其中 310 － 2、310 － 4 和 291 － 3 株具有较高的交 叉免疫水平，而分离株 336 － 4 不能有效的保护其他 分离株的感染，这一发现说明各分离株间存在抗原多 样性，分离株 336 － 4 与其他虫株存在抗原差异。本 研究结果显示 E. maxima 各分离株间存在不同程度的 交叉保护力，推断是由于各分离株的免疫原性不同， 这与普遍公认的理论相一致。
1． 不免疫攻击上海株； 2． 不免疫攻击福建株； 3． 不免疫攻击广东株； 4． 免疫上海株攻击上海 株； 5． 免疫上海株攻击广东株； 6． 免疫上海株攻击福建株； 7． 免疫福建株攻击福建株； 8． 免疫福 建株攻击广东株； 9． 免疫福建株攻击上海株； 10． 免疫广东株攻击广东株； 11． 免疫广东株攻击福建 株； 12． 免疫广东株攻击上海株
东省农科院畜牧研究所。 1. 2 饲料
102 全价肉仔鸡饲料，广东省农科院畜牧研究所 饲料厂特制，不含任何抗球虫药。 1. 3 虫株
E. maxima 福建株、上海株和广东株由广东省农 科院动物卫生研究所寄生生物研究室保存。 1. 4 E. maxima 的增殖和纯化
将 1 日龄雏鸡饲养于无球虫环境中至 2 周龄时， 采集粪便样品检查确认无球虫感染后，分成 3 组，每 组 10 只，分别感染 E. maxima 福建株、广东株和上 海株孢子化卵囊，剂量为 5 × 104 个 / 羽。按常规方法 收集卵囊，孢子化后计数备用。 1. 5 E. maxima 排卵囊曲线的测定
1 材料与方法
1. 1 试验动物 1 日龄岭南黄肉鸡笼养于无球虫环境中，购自广
收稿日期： 2014 － 03 － 14 基金项目： 国家自然科学基金项目 （ 31201902） ； 国家自然科学 基金项目 （ 31302086） ； 国家自然科学基金项目 （ 31402186） ； 珠江科 技 新 星 项 目 （ 2012J2200059 ） ； 广 东 省 农 业 科 学 院 院 长 基 金 项 目 （ 201413） ； 广东省农业攻关项目 （ 2012A020100001） 作者简介： 吴彩艳 （ 1978 － ） ，女，蒙古族，硕士，研究方向为 鸡球虫入侵机制的研究，E-mail： wucaiyan906@ 163. com