ms培养基制备流程

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ms培养基制备流程

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MS 培养基是目前使用最普遍的培养基,它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。以下是 MS 培养基的制备流程:

1. 准备母液:

大量元素母液:将硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁和氯化钙等大

量元素分别溶解在蒸馏水中,定容至一定体积,制成 10 倍或 100 倍的母液。

微量元素母液:将碘化钾、硼酸、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜和

氯化钴等微量元素分别溶解在蒸馏水中,定容至一定体积,制成 100 倍或1000 倍的母液。

铁盐母液:将硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠分别溶解在蒸馏水中,加热

搅拌至完全溶解,定容至一定体积,制成 100 倍的母液。

有机成分母液:将甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇和盐酸硫胺素等有

机成分分别溶解在蒸馏水中,定容至一定体积,制成 100 倍或 1000 倍的母液。

2. 配制培养基:

计算用量:根据需要配制的培养基体积和母液的浓度,计算出所需各种

母液的体积。

量取母液:使用移液管或移液器准确量取所需的各种母液,放入一个干

净的容器中。

加入蔗糖和琼脂:根据培养基的配方,加入适量的蔗糖和琼脂。蔗糖的

用量一般为 30g/L,琼脂的用量一般为 7g/L。

定容:向容器中加入蒸馏水,定容至所需的体积。

调节 pH 值:使用 pH 计或精密 pH 试纸调节培养基的 pH 值至 5.8-6.0。

分装:将培养基分装到培养瓶或培养皿中,注意不要装得太满,以免在

灭菌时溢出。

3. 灭菌:

高压蒸汽灭菌:将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中,在 121℃下

灭菌 15-20 分钟。

过滤灭菌:对于一些对热敏感的成分,如激素等,可以使用过滤灭菌的

方法。将培养基通过 0.22μm 的滤膜过滤除菌,然后分装到无菌的培养瓶或培养皿中。

4. 保存:

灭菌后的培养基应尽快使用,避免长时间存放。

如果需要保存一段时间,可以将培养基放在 4℃的冰箱中,但保存时间

不宜过长。

在使用前,应检查培养基是否有污染或变质的迹象。

注意事项:

1. 在配制母液和培养基时,应使用蒸馏水或去离子水,以避免水中的杂质

对培养基的影响。

2. 母液应保存在冰箱中,避免阳光直射和高温。

3. 在量取母液时,应使用准确的量具,以确保母液的浓度和用量准确无误。

4. 在调节 pH 值时,应使用精密的 pH 计或 pH 试纸,以确保 pH 值的准

确性。

5. 在分装培养基时,应注意不要将培养基沾到培养瓶或培养皿的壁上,以

免影响培养效果。

6. 在灭菌过程中,应注意安全,避免烫伤和爆炸等事故的发生。

7. 在保存培养基时,应注意保持培养基的无菌状态,避免污染。

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