抗菌肽LL37对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎性损伤的保护作用_

空 白孔,每孔培养液为 100μ
l。37 ℃ 孵育 12h 后,
加入 CCK810μ
l,37 ℃ 继续孵育 4h 后在 450nm
处测量吸光 度 值 (
A450nm)。 细 胞 活 力 (% ) =
(给 药 组 A450nm- 空 白 A450nm)/ (细 胞 对 照
组 A450nm- 空白 A450nm) ×100% 。
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(美国)。
1 2 实验方法
121 细 胞 培 养 与 分 组 干 预
10 mg/L LL37 的 培 养 液 培 养 12 h, 实 验 组 在
1 mg/LLPS 刺 激 的 基 础 上, 同 时 加 入 10 mg/L
LL37 培 养 12 h, 干 预 组 在 实 验 组 基 础 上 加 入
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6 的 分 泌 水 平, 用 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 细 胞 核 因 子 κB
(
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κB)p65 蛋白表达水平。结果
与 空 白 组 比 较,LPS 组 细 胞 活 性 下 降, 细 胞 凋 亡 增 多, 细
胞上清液 TNF
α、IL
6 水平升高,细 胞 中 NF
通信作者:金发光,Ema
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【摘要】
目的
探讨抗菌肽 LL37 对 脂 多 糖 (
LPS) 诱 导 的 大 鼠 肺 泡 巨 噬 细 胞 (
NR8383)
炎症损伤的保护作用。方法
实验分为对照组、LPS 组、LL37 组、 实 验 组 和 干 预 组。 对 照 组 给
予正 常 培 养 液 培 养 12h,LPS 组 给 予 含 1 mg/L LPS 的 培 养 液 培 养 12h,LL37 组 给 予 含
活性及凋亡 情 况, 并 检 测 肿 瘤 坏 死 因 子α(
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的表达,进而 评 价 LL37 对 巨 噬 细 胞 的 保 护 效 应,
探讨其抗炎作用的具体分子机制以期从细胞水平理
· 888 ·
国际呼吸杂志 2019 年 6 月第 39 卷第 12 期 I
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June2019,
Vo
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39,
No.
12
·论
抗菌肽 LL37 对脂多糖诱导的大鼠肺泡
巨噬细胞炎性损伤的保护作用
施昀
李王平
韩璐瑶
高永恒
王虎
金发光
空军军医大学第二附属医院呼吸与危重症医学科,西安 710038
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。抗生素 在 杀 伤 细 菌 的 过 程 中 可 使 脂 多 糖
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2
3]
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入血,进一步 加 重 对 机 体 免 疫 系 统 的 破 坏。因 此,
探索 一 种 新 的 抗 菌 策 略 成 为 目 前 亟 待 解 决 的 问
解 LL37 在炎症疾病中的应用价值,为临 床 合 理 应
用提供实验依据。
1 材料与方法
1 1 主要 材 料
NR8383 细 胞 购 自 齐 氏 生 物 科 技
有限 公 司;DMEM 培 养 基 和 胎 牛 血 清 购 自 美 国
HyCl
one公司;LPS 购自美国 S
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gma 公司;CCK8
细胞检测试剂盒购自东仁化学科技有限公司;细胞
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436X 2019 12 002
近年来,由 于 抗 生 素 的 不 恰 当 使 用 或 者 滥 用
,其中致病菌对 β
内酰 胺 类 药 物 所 产 生 的 耐 药 性 已 成 为 世 界 性 问
已经导致了多种耐药菌的产生
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收集 各 组 细 胞 后 以1000r
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取细胞上清液。然后按照按试剂盒要求进行实验步
10 mg/L的 LL37 中和抗体。
1 2 2 CCK8 测 定 巨 噬 细 胞 活 性 取 对 数 生 长 期
NR8383 细胞以每孔 2×105 接 种 于 96 孔 板 中, 培
养箱中孵育 24h。次 日, 弃 上 清, 按 “
1 2 1” 进
行分组及给药处理,每组设置 3 个复孔,同时设置
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