贞清方调节SREBP 1C减少糖尿病大鼠肾脏脂质沉积

肾脏行 HE 染色、在光镜下作肾组织形态学观察。
结果 8 周时模型组肾皮质 TG 含量有增高的趋势， 但与正常组比较无显著性差异 (P>0.05)，两治疗组的肾皮质 TG 含量与正常组比较无明显变化。12 周时，与正 常组相比， 模型组大鼠肾皮质 TG 含量显著升高 （P<0.01） , 且 SREBP-1c 和 FAS mRNA 的表达明显上调（P<0.01） 。贞清方组和二甲双胍组肾皮质 TG 含量较模 型组明显减少（P<0.01） 。贞清方组 SREBP-1c mRNA 的表达非常显著低于模型 组（P<0.01） ，二甲双胍组的 SREBP-1c mRNA 表达亦低于模型组（P<0.01） ，但 高于正常组（P<0.05） 。贞清方组和二甲双胍组的 FAS mRNA 表达均显著低于模 型组（P<0.01） 。与模型组比较，两治疗组血糖、TG 和 UAE 明显下降（P<0.01） ， TC 亦下降（P<0.05） 。贞清方组和二甲双胍组的肾脏病理改变较模型组减轻。 结论 贞清方可通过下调糖尿病大鼠肾组织 SREBP-1c 及其下游基因 FAS mRNA 的表达，减少肾脏的脂肪沉积，改善肾功能和形态学改变。 关键词 ：贞清方；糖尿病肾病；固醇调节元件结合蛋白-1c；脂肪酸合成酶
[9]
，控制游离脂肪酸和甘油三酯的生物合成， 在糖尿病肾病 过度表达 SREBP - 1c 的 PEPCK –promotor
[11]
的发病中介导 TБайду номын сангаас 在肾脏沉积[10]。
转基因小鼠，显现系膜增生、基质积聚，蛋白尿增加
。
前人对 SREBP-1c 及其靶基因 FAS 与糖尿病肾病的关系的研究主要是对 STZ 诱导的 1 型糖尿病大鼠和基因鼠的研究[1,11]。人类糖尿病 95%为 2 型糖尿病，其 发病与高糖高脂饮食有关， 目前用高糖高脂诱导再加小剂量链脲佐菌素注射所致 的 2 型糖尿病模型已在国内外得到认可[12,13]，这种模型的肾脏 SREBP-1c 的表达 情况如何还未见报道。本次实验采用高糖高脂加小剂量链脲佐菌素注射所致的 2 型糖尿病模型， 在我们以前证实贞清方对这种 2 型糖尿病大鼠肾脏病变有防治作 用的基础上[ 14 ]，研究贞清方对 SREBP-1c 及其下游基因 FAS 的调节作用，进一步 探讨贞清方防治 DN 的分子机制。
however, there was no difference with control (P>0.05). And the level of renal TG showed no obvious change in two treated groups. At week 12 , the TG was higher in untreated model rats compared with control(P<0.01). In contrasted to control, expression of SREBP-1c and FAS mRNA in model group were up-regulated (P<0.01). Contents of renal TG in ZQR and metformin groups were decreased compared with model group (P<0.01). The expression mRNA in metformin group of SREBP-1c was significantly down-regulated in ZQR group than model group (P<0.01). And expression of SREBP-1c
调节srebp1c的表达可减少脂质对肾脏的损害敲除小鼠的srebp1c基因可防止小鼠由于高脂饮食所致的肾脏tgfpai1和vegf表达的增强以及细胞外基质的聚积18亦可防止小鼠由于stz注射所致的蛋白尿12学者用二甲双胍治疗脂肪肝发现二甲双胍可降低srebp1cmrna及蛋白表可编辑精品达从而改善肝脏脂肪变性19
1
by Regulating Expression of SREBP-1c mRNA
WEN Xiu-ying, XU Ming-wang，HU Qin-jin,（ Liyuan Hospital , Tongji Medical College， Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430077, China）
[1]
；肾小球脂质沉积，单核- 巨噬系统吞噬增加,泡沫细胞形成，发生类似于动
脉粥样硬化的血管损伤，导致肾小球硬化与肾功能受损[3,6]。 固醇调节元件结合蛋白（Sterol Regulatory Element-binding Protein， SREBPs）属于碱性-螺旋-环-螺旋-亮氨酸锌指(bHLH-ZIP)转录因子， 在调节脂 肪合成、脂肪酸自稳态和组织细胞脂肪沉积方面起关键作用[7,8]。SREBPs 家族由 SREBP-1 和 SREBP-2 两 个 成 员 组 成 , SREBP-1 有 两 个 亚 型 ： SREBP-1a 和 SREBP-1c。亚型 SREBP-1c 位于 17pll.2 染色体, SREBP-1c 作用于脂肪酸合成酶 （FAS）等靶基因
was also decreased compared with model group (P<0.01)，but it is higher than control(P<0.05). Both treated groups showed lower level of FAS mRNA than those of model group (P<0.01). The level of FBG, TG and UAE in two treated groups was significantly decreased (P<0.01), and TC was also lower than those of model group (P<0.05). Pathological changes were ameliorated
ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate
Zhenqing Recipe(ZQR) in
regulation of renal lipid metabolism and its molecular mechanisms. Methods Type 2 diabetic rat model was established with feeding high-glucose and high-fat diet, and injecting low dose streptozotocin. The model rats were divided into: untreated model group, ZQR group, metformin group, normal rats served as control, 18 rats in each group. At week 8 and week 12 after treatment, TG contents in renal cortex were measured. And at week 12, the expression of sterol regulatory element binding-protein- 1c (SREBP-1c ) and fatty acid synthase (FAS) mRNA were detected by RT-PCR. Meanwhile, fasting blood glucose (FBG), total triglyceride (TG) and total cholesterol (TC) and urine albumin excretion (UAE) were measured. Kidney histomorphology was observed by the light microscope with HE staining. RESULTS the level of TG in renal cortex had a tendency to increase At week 8 , in model rats, renal
KEY WORDS : zhenqing recipe; diabetic nephropathy ;
sterol regulatory element binding-protein- 1c; fatty acid synthase
糖尿病状态异常的脂质代谢引起肾脏脂质沉积在糖尿病肾病（DN）的发病 及病理进程中起着重要作用[1] 。DN 的血脂异常表现为 TG、TC、LDL-C 升高， HDL-C 下降， VLDL 可增高[2,3]。脂质代谢异常可出现脂质在肾脏沉积、直接损 伤肾脏[4,5]；还引起 TGF－β1 的表达增强、诱导肾小球系膜细胞外基质大量合成
3
1 材料与仪器 1.1 实验动物 纯系 7 周龄雄性 Wistar 大鼠(清洁级)72 只, 体重 150～170g。购自湖北省医 学科学院实验动物中心， 饲养于华中科技大学同济医学院附属梨园医院清洁级动 物房，标准饲料喂养，自由饮水。 1.2 药品与试剂 葡萄糖、甘油三酯和胆固醇试剂盒（北京北化康泰临床试剂有限公司） ，链 脲佐菌素(美国 Sigma 公司), 尿微量白蛋白放射免疫分析测定盒（北京北方生物 技术研究所） 。 Trizol、MMLV 逆转录酶、 RNAase Inhibitor、dNTP 和 Oligo(dT) （日本 TOYOBO 公司） ，TaqDNA 聚合酶、DNA Marker I（北京 TIANGEN 公 司） ，引物序列（美国 Invitrogen 公司） 。 盐酸二甲双胍（中美上海施贵宝制药公司） 。女贞子、山药和地龙等中药饮 片（武汉银杏中药饮片厂） 。 1.3 仪器 AU-400 全自动生化仪（日本 Olympus 公司） ，PCR 仪（德国 Eppendorf 公 司） ， GENEGENIUS 成像仪（美国 GENE 公司） ，5415R 型 4℃离心机（德国 eppendorf 公司） ，UV4802－H 型紫外可见分光光度仪（上海尤尼柯仪器有限公 司） ，显微镜及显微摄像仪（日本 Olympus 公司） 。 2 方 法 2.1 药物制备 贞清方中的女贞子和山药等植物药采用水煮醇沉法，过滤浓缩，以提取干膏 收率和齐墩果酸 （女贞子的主要成分） 作为综合评价指标； 地龙采用水提、 浓缩， 以次黄嘌呤作为控制指标。将提取液混合即得贞清方提取液，配置液为 3g 生药 /ml，40C 保存。 二甲双胍用蒸馏水配制成 30mg·ml-1 的混悬液，40C 保存。 2.2 动物模型的建立、分组及处理 随机将大鼠中的 18 只用于作正常对照组，喂以常规饲料；另 54 只用于建立 2 型糖尿病模型
贞清方调节 SREBP-1c 减少糖尿病大鼠肾脏脂质沉积
文秀英，1 许明旺，2 胡勤瑾，3 罗琼，3 鲁敏，3 （1.华中科技大学同济医学院附属梨园医院中西医结合科，武汉 430077； 2. 华中科技大学同济医学院附属梨园医院老年医药学研究所； 3. 华中科技大学 同济医学院硕士研究生） 摘要：目的 探讨贞清方对糖尿病大鼠肾脏脂质代谢的调节作用及其分子机制。 方法 高糖高脂饲料加低剂量链脲佐菌素注射制备 2 型糖尿病大鼠模型，将成模 大鼠分为：贞清方组、二甲双胍组、模型组，另设正常对照组，每组 18 只大鼠。 分别在治疗 8 周和 12 周时检测大鼠的肾皮质 TG 含量。12 周时，采用 RT-PCR 检测肾皮质固醇调节元件结合蛋白-1c （SREBP-1c）和脂肪酸合成酶（FAS）的 mRNA 表达，同时，检测血糖、血甘油三酯（TG） 、 量白蛋白排泄率(UAE)， 总胆固醇（TC）和尿微
2
in ZQR and metformin groups compared with model group. FAS mRNA
CONCLUSION
ZQR decrease renal fat deposit through down-regulation of SREBP-1c and expression in type 2 diabetic rats. Therefore, it improve renal function and morphology.
基金项目：国家自然基金资助项目（30672730） 作者介绍：文秀英，女，博士，教授,主任医师。
*通讯作者：许明旺，女，副主任药师，Tel:027-62542635
email:hailen2006@
Zhenqing Recipe Reduce Lipid Accumulation in Diabetic Rat Kidney