十二核酸的生物合成
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2020/11/13
环状 DNA复制时 所形成的Q结构
两种复制模式 （a）单向复制模式 （b）大肠杆菌染色体DNA双向复制模式
2020/11/13
单向复制
i
双向复制
观察到的放射 自显影图象
2020/11/13
18%
质粒ColE1的单向复制示意图
单向复制
2020/11/13
最早研究DNA复制起点和方向的是J.Cairns（1963年）。
修复（errooune repair）
polⅠ不是DNA复制酶，理由： A、该酶合成DNA速度太慢，只是细胞 内DNA复制速度的1%； B、持续合成能力较低，而细胞内DNA 复制不会频繁中止； C、许多基因突变都会影响DNA复制， 但都与polⅠ无关。
2020/11/13
3、双链DNA复制的分子机制
（4）母本DNA双链的分离 解螺旋酶（helicase）
使DNA双螺旋的两条链分开。 条件：ATP提供能量，有单链DNA存在。
后随链：解旋酶结合于它的模板上，移动方 向是5′ 3′ 前导链：另一种解旋酶叫rep蛋白，移动方 向是3′ 5′。
2020/11/13
单链结合蛋白（single-strand binding
DNA
DNA
聚合酶Ⅰ 聚合酶Ⅱ 聚合酶III
分子量
109，000 120，000 400，000
每个细胞的分子统计数
400
100
10-20
5´-3 ´聚合酶作用
+ห้องสมุดไป่ตู้
+
+
3´-5 ´核酸外切酶作用
+
+
+
5´-3 ´核酸外切酶作用
+
-
-
转化率 功能
1 切除引物
修复
0 .05 修复
50 复制
1999年发现聚合酶 和 ，它们涉及DNA的错误倾向
合成方向：5′ 3′
2020/11/13
添加到链上的每个核苷三磷酸是按照模板链的 顺序由碱基互补配对原则选择的。
反应的通式可写为： （NMP）n—3′—OH＋dNTP
（NMP）n＋1—3′—OH＋PPi
2020/11/13
1、DNA聚合酶Ⅰ polⅠ
(1) 具5′ 3′聚合酶活性 将脱氧核糖核苷三磷酸dNTP逐个添加到具有3′—OH
拓扑异构酶Ⅰ可除去负超螺旋，拓扑异构 酶Ⅱ可引入负超螺旋，消除复制前产生的正超 螺旋，协同作用控制DNA拓扑结构，有利于DNA 解开双螺旋。
2020/11/13
参与大肠杆菌染色体DNA复制的主要Pr
DNA旋转酶→引入（或松解） DNA解链酶→使双螺旋DNA解链 单链结合蛋白→稳定单链区 引物合成酶→合成RNA引物 DNA聚合酶III全酶→合成DNA DNA聚合酶I→除去引物并填满缺口 DNA连接酶→连接DNA片段末端
θ型
2020/11/13
DNA Replication
2020/11/13
原核生物：只有一个复制原点。 第二次复制可在第一次复制完成之前 开始复制。
真核生物；可在DNA链上的多个不 同位点同时起始复制。
所以真核生物的DNA复制速度比 原核生物快些。
2020/11/13
真核生物DNA的多起点复制
5' 模板链
接
T CT T G G AA C
酶
5'
P P P P P P P P P 3'
连
OH
缺口
接
连接酶
ATP或NAD＋
切
口
Mg2+
AMP+PPi或NMN+AMP
3'
A GAACCT T G T CT T G G AA C
5' 模板链
5'
2020/11/13
P P P P P P P P P 3'
（1）冈崎片段和半不连续复制 不连续复制：3’ →5’走向的DNA实际上是由 许多5’→ 3’ 方向合成的DNA片段连接起来的。 （已知DNA聚合酶的合成方向都是5’→ 3’ ）
2020/11/13
在一个复制叉内两条链的复制方向、合 成方式、复制速度是不同的。
前导链（leading strand)： 以一条链（3’ → 5’）为模板时，子代
5´
3´
SSB
解旋酶
解链酶 引物酶和引发 体
DNA聚合酶 III
DNA聚合酶 I
RNA引物
2020/11/13
3´ 5´ RNA引物
3´
5´
2020/11/13
（3）DNA连接酶
催 化 子 代 双 链 DNA 中 的 切 口 处 的 相 邻 3 ’OH和5’-磷酰基之间形成磷酸二酯键。但不 能将两条游离的DNA单链连接起来。
复制可能是单向的，也可能是双向的， 两个方向的复制速度不一定相同。大多数 是双向的。
眼状结构：线状DNA分子上的正在复制 的部分形成；
θ结构：环状DNA分子上的正在复制 的部分形成。
2020/11/13
未复制DNA
起始点
单向复制
起始点
双向复制
起始点
复制叉
复制叉的推进
起始点
复制叉
复制叉
DNA的双向和单向复制
protein，SSB）
结合在单链DNA分子上，功 能是稳定已被解开的DNA单链， 阻止复性和保护单链不被核酸酶降 解。
2020/11/13
拓 扑 异 构 酶 （ DNA 松 弛 酶 ）
（topoisomerase）
涉及超螺旋的松弛，复制后又涉及 到它们的再次形成。
正超螺旋（左）：双螺旋DNA处于拧紧状 态时形成的超螺旋，使DNA解开双螺旋困难
引物的结 合和识别
核心酶
校对
DNA聚合酶Ⅲ异二聚体
促使核心 酶二聚化
延长因子
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ 全酶的结构和功能
DNA聚合酶Ⅲ 两个 亚基夹住DNA
（1）α亚基：具5′ 3′端聚合酶活性（需模板和引 物）；
（2）ε亚基具3′ 5′端核酸外切酶的活性。校对作 用，以提高保真性；
（ 3 ） α、ε、θ 亚 基 相 连 形 成 核 心 酶 polⅢ，θ 亚 基 起组建作用；
链的合成方向是5’ →3’，合成是连续的， 合成速度较快。
2020/11/13
后随链(lagging strand):以另一条亲代链（5’→ 3’） 为模板时，子代链的合成方向不能按照3’ → 5’方 向进行，因为迄今没有发现这样的DNA聚合酶， 因此只能合成方向为5’ → 3’方向的许多DNA小片 段（约1000--------2000dp，7-----10S），为1968年 日本人冈崎等人发现，叫冈崎片段，然后在DNA 连接酶催化下，连接起来形成一条子代链。
2020/11/13
（三）DNA的复制过程（原核生物）
DNA的合成是以四种脱氧核苷三磷酸即dATP、 dGTP、dCTP、dTTP为前体，在DNA聚合酶的 催化下，向DNA的3′—OH端添加脱氧核苷酸， 在DNA的3′—OH与添加的脱氧核苷酸的5′—磷 酰基间形成3，5—磷酸二酯键，反应中脱去一 个焦磷酸基团。
第十二章 核酸的生物合成
2020/11/13
主要内容
• 一 DNA的生物合成 • 二 RNA的生物合成
2020/11/13
2020/11/13
2020/11/13
一、 DNA的生物合成
（一）半保留复制
DNA在复制时，两条 链解开分别作为模板，在 DNA聚合酶的催化下按碱 基互补的原则合成两条与 模板链互补的新链，以组 成新的DNA分子。这样新 形成的两个DNA分子与亲 代DNA分子的碱基顺序完 全一样。由于子代DNA分 子中一条链来自亲代，另 一条链是新合成的，这种 复制方式称为半保留复制。
负超螺旋（右）：双螺旋DNA处于拧松状态 时形成的超螺旋。
2020/11/13
拓扑异构酶对DNA的超螺旋进行精确调节， 从而在DNA重组修复和DNA其它转变中起作用。 分为两类：
1、拓扑异构酶Ⅰ：可瞬时打开双螺旋的一条链， 然后再连接。不需能量，同转录相关。
2、拓扑异构酶Ⅱ；使DNA双链同时断裂，然后 再连接。需能量ATP，同复制相关。
末端的多核苷酸链上形成3， 5—磷酸二酯键。 特点：A：底物为d NTP；
B：DNA模板 (3′ 5′)； C：引物：RNA引物 （带3′—羟基） ； D：方向 5′ 3′； F：产物DNA的性质与模板相同 。
2020/11/13
DNA聚合酶催化的链延长反应
3´
3´
5´
5´
3´
5´
3´
5´
模板链
3´
1、DNA聚合酶有校正功能，每引入一个核 苷酸都要复查一次，无误后方继续下去，它 不能从无到有合成新的链，因为在未核实前 一个核苷酸处于正确配对状态时是不会进行 聚合反应的；
2、RNA引物是从新开始合成的，错配的 可能性大，在完成引物功能后即将它删除， 而代之以高保真的DNA链。
2020/11/13
5´
5´
3´
RNA引物
子链
(2) 具有3′ 5′端核酸外切酶的活性
有校对功能，能在3′—OH端将 DNA链水解。以保证DNA复制的真实 性。
2020/11/13
DNA聚合酶的3´- 5´外切酶水解位 点
3´
5´
错配碱基
5´ 3´- 5´核酸外切 3´ 酶水解位点
(3) 具有5′ 3′端核酸外切酶的活性 由5′端水解DNA链，主要是切去一小段DNA，
责DNA的修复，在一定程度上参与DNA复 制。活性低。功能不十分清楚，是一种修复 酶。
2020/11/13
3、DNA聚合酶Ⅲ polⅢ 是使DNA链延长的主要聚合酶，目
前已知全酶是由7种多肽形成的复合物， 含有10种共22个亚基组分 （α2ε2θ2ζ2г2δ2δ2′2χ2ψ2β2）和Zn原子。
2020/11/13
同时该酶要求含有3’-OH和5’-磷酰基 的DNA片段能以氢键与互补链结合。
DNA—3′—OH＋P—5′—DNA＋ATP（NAD+） DNA—3′—O—P—5′—DNA＋AMP＋
PPi（NMN） 2020/11/13
E,coli连接酶 催化下的连接机制
2020/11/13
3'
连
A GAACCT T G
2020/11/13
（二）DNA复制的起点和方向
复制 叉 （ replication forks） ： 复制中的 DNA分子，未复制的部分是亲代双螺旋，而复 制好的部分是分开的，由两个子代双螺旋组成， 复制正在进行的部分叫做复制叉。
细胞内存在着能识别起始点的特种Pr。
2020/11/13
方向：复制叉从起始点出发，沿DNA移 动，移动方向与前导链的延长方向相同。
2020/11/13
（5）DNA聚合酶的“校对”作用
DNA聚合酶具有三种不同的酶活性。3’ →5’外切酶活性是校对新生DNA链和改正 聚合酶活性所造成的“错配”的一种手段。
现在所发现的真核生物DNA聚合酶一般 没有校正功能。
2020/11/13
错配碱基 聚合酶
切除错配 核苷酸
正 确核 苷酸
包括RNA引物和损伤DNA部分。
polⅠ主要功能： 用于修复DNA双螺旋区中的单链区，这些单
链区是在DNA复制时或DNA受损伤后留下的。 活性高。
2020/11/13
DNA聚合酶5´- 3´外切酶活力
5´ 单链缺口
5´- 3´核酸外切 酶水解位点
2、DNA聚合酶Ⅱ polⅡ 具有3′ 5′端核酸外切酶的活性，主要负
2020/11/13
方向：以DNA为模板，5’ → 3’ 长度：几个至10个核苷酸，5′端含3个磷酸残 基，3′端为游离羟基。 DNA聚合酶III ：聚合脱氧核糖核苷酸 引物消除和缺口填补：DNA聚合酶I DNA连接酶：将冈崎片段连成长链
2020/11/13
为 什 么 需 要 RNA 引 物 、 而 且 最 后 要 切 除？
DNA的半 保留复制 实验依据
[15N] DNA
[14N- 15N] DNA
1958年Meselson & stahl用同位素示踪 标记加密度梯度离 心技术实验,证明了 DNA是采取半保留 的方式进行复制.
[14N- 15N] DNA
[14N] DNA
Meselson-stahl实验
（a）密度梯度离心的DNA带 （b）对应于左侧DNA带的解释
合成是不连续的，合成速度较慢。当一段新 的冈崎片段合成后，polⅠ行使5’ → 3’核酸外切酶 活性切除引物，再合成一段DNA作为替换，缺口 由DAN连接酶封口。
2020/11/13
(2)冈崎片段的RNA引物
引物的合成由引物合成酶催化完成，这些酶 在模板单链DNA上识别特殊序列，合成RNA 引物。它本身没有活性，需要与“引发前体” 结合在一起，形成“引发体”后才有活性。引 发体在复制叉上移动，识别合成的起始点，引 发RNA引物的合成，该过程需ATP提供能量。
（4）核心酶+ζ亚基后成为二聚体，称为polⅢ′；
（5）polⅢ′与γ、δ亚基结合，形成polⅢ′，γ、 δ亚基可增强酶与模板的结合；
（6）polⅢ′′与β亚基结合形成全酶，β亚基犹如夹 子，夹住DNA向前滑动，不脱离，提高持续合成能力。
2020/11/13
大肠杆菌三种DNA聚合酶比较
比较项目
DNA
环状 DNA复制时 所形成的Q结构
两种复制模式 （a）单向复制模式 （b）大肠杆菌染色体DNA双向复制模式
2020/11/13
单向复制
i
双向复制
观察到的放射 自显影图象
2020/11/13
18%
质粒ColE1的单向复制示意图
单向复制
2020/11/13
最早研究DNA复制起点和方向的是J.Cairns（1963年）。
修复（errooune repair）
polⅠ不是DNA复制酶，理由： A、该酶合成DNA速度太慢，只是细胞 内DNA复制速度的1%； B、持续合成能力较低，而细胞内DNA 复制不会频繁中止； C、许多基因突变都会影响DNA复制， 但都与polⅠ无关。
2020/11/13
3、双链DNA复制的分子机制
（4）母本DNA双链的分离 解螺旋酶（helicase）
使DNA双螺旋的两条链分开。 条件：ATP提供能量，有单链DNA存在。
后随链：解旋酶结合于它的模板上，移动方 向是5′ 3′ 前导链：另一种解旋酶叫rep蛋白，移动方 向是3′ 5′。
2020/11/13
单链结合蛋白（single-strand binding
DNA
DNA
聚合酶Ⅰ 聚合酶Ⅱ 聚合酶III
分子量
109，000 120，000 400，000
每个细胞的分子统计数
400
100
10-20
5´-3 ´聚合酶作用
+ห้องสมุดไป่ตู้
+
+
3´-5 ´核酸外切酶作用
+
+
+
5´-3 ´核酸外切酶作用
+
-
-
转化率 功能
1 切除引物
修复
0 .05 修复
50 复制
1999年发现聚合酶 和 ，它们涉及DNA的错误倾向
合成方向：5′ 3′
2020/11/13
添加到链上的每个核苷三磷酸是按照模板链的 顺序由碱基互补配对原则选择的。
反应的通式可写为： （NMP）n—3′—OH＋dNTP
（NMP）n＋1—3′—OH＋PPi
2020/11/13
1、DNA聚合酶Ⅰ polⅠ
(1) 具5′ 3′聚合酶活性 将脱氧核糖核苷三磷酸dNTP逐个添加到具有3′—OH
拓扑异构酶Ⅰ可除去负超螺旋，拓扑异构 酶Ⅱ可引入负超螺旋，消除复制前产生的正超 螺旋，协同作用控制DNA拓扑结构，有利于DNA 解开双螺旋。
2020/11/13
参与大肠杆菌染色体DNA复制的主要Pr
DNA旋转酶→引入（或松解） DNA解链酶→使双螺旋DNA解链 单链结合蛋白→稳定单链区 引物合成酶→合成RNA引物 DNA聚合酶III全酶→合成DNA DNA聚合酶I→除去引物并填满缺口 DNA连接酶→连接DNA片段末端
θ型
2020/11/13
DNA Replication
2020/11/13
原核生物：只有一个复制原点。 第二次复制可在第一次复制完成之前 开始复制。
真核生物；可在DNA链上的多个不 同位点同时起始复制。
所以真核生物的DNA复制速度比 原核生物快些。
2020/11/13
真核生物DNA的多起点复制
5' 模板链
接
T CT T G G AA C
酶
5'
P P P P P P P P P 3'
连
OH
缺口
接
连接酶
ATP或NAD＋
切
口
Mg2+
AMP+PPi或NMN+AMP
3'
A GAACCT T G T CT T G G AA C
5' 模板链
5'
2020/11/13
P P P P P P P P P 3'
（1）冈崎片段和半不连续复制 不连续复制：3’ →5’走向的DNA实际上是由 许多5’→ 3’ 方向合成的DNA片段连接起来的。 （已知DNA聚合酶的合成方向都是5’→ 3’ ）
2020/11/13
在一个复制叉内两条链的复制方向、合 成方式、复制速度是不同的。
前导链（leading strand)： 以一条链（3’ → 5’）为模板时，子代
5´
3´
SSB
解旋酶
解链酶 引物酶和引发 体
DNA聚合酶 III
DNA聚合酶 I
RNA引物
2020/11/13
3´ 5´ RNA引物
3´
5´
2020/11/13
（3）DNA连接酶
催 化 子 代 双 链 DNA 中 的 切 口 处 的 相 邻 3 ’OH和5’-磷酰基之间形成磷酸二酯键。但不 能将两条游离的DNA单链连接起来。
复制可能是单向的，也可能是双向的， 两个方向的复制速度不一定相同。大多数 是双向的。
眼状结构：线状DNA分子上的正在复制 的部分形成；
θ结构：环状DNA分子上的正在复制 的部分形成。
2020/11/13
未复制DNA
起始点
单向复制
起始点
双向复制
起始点
复制叉
复制叉的推进
起始点
复制叉
复制叉
DNA的双向和单向复制
protein，SSB）
结合在单链DNA分子上，功 能是稳定已被解开的DNA单链， 阻止复性和保护单链不被核酸酶降 解。
2020/11/13
拓 扑 异 构 酶 （ DNA 松 弛 酶 ）
（topoisomerase）
涉及超螺旋的松弛，复制后又涉及 到它们的再次形成。
正超螺旋（左）：双螺旋DNA处于拧紧状 态时形成的超螺旋，使DNA解开双螺旋困难
引物的结 合和识别
核心酶
校对
DNA聚合酶Ⅲ异二聚体
促使核心 酶二聚化
延长因子
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ 全酶的结构和功能
DNA聚合酶Ⅲ 两个 亚基夹住DNA
（1）α亚基：具5′ 3′端聚合酶活性（需模板和引 物）；
（2）ε亚基具3′ 5′端核酸外切酶的活性。校对作 用，以提高保真性；
（ 3 ） α、ε、θ 亚 基 相 连 形 成 核 心 酶 polⅢ，θ 亚 基 起组建作用；
链的合成方向是5’ →3’，合成是连续的， 合成速度较快。
2020/11/13
后随链(lagging strand):以另一条亲代链（5’→ 3’） 为模板时，子代链的合成方向不能按照3’ → 5’方 向进行，因为迄今没有发现这样的DNA聚合酶， 因此只能合成方向为5’ → 3’方向的许多DNA小片 段（约1000--------2000dp，7-----10S），为1968年 日本人冈崎等人发现，叫冈崎片段，然后在DNA 连接酶催化下，连接起来形成一条子代链。
2020/11/13
（三）DNA的复制过程（原核生物）
DNA的合成是以四种脱氧核苷三磷酸即dATP、 dGTP、dCTP、dTTP为前体，在DNA聚合酶的 催化下，向DNA的3′—OH端添加脱氧核苷酸， 在DNA的3′—OH与添加的脱氧核苷酸的5′—磷 酰基间形成3，5—磷酸二酯键，反应中脱去一 个焦磷酸基团。
第十二章 核酸的生物合成
2020/11/13
主要内容
• 一 DNA的生物合成 • 二 RNA的生物合成
2020/11/13
2020/11/13
2020/11/13
一、 DNA的生物合成
（一）半保留复制
DNA在复制时，两条 链解开分别作为模板，在 DNA聚合酶的催化下按碱 基互补的原则合成两条与 模板链互补的新链，以组 成新的DNA分子。这样新 形成的两个DNA分子与亲 代DNA分子的碱基顺序完 全一样。由于子代DNA分 子中一条链来自亲代，另 一条链是新合成的，这种 复制方式称为半保留复制。
负超螺旋（右）：双螺旋DNA处于拧松状态 时形成的超螺旋。
2020/11/13
拓扑异构酶对DNA的超螺旋进行精确调节， 从而在DNA重组修复和DNA其它转变中起作用。 分为两类：
1、拓扑异构酶Ⅰ：可瞬时打开双螺旋的一条链， 然后再连接。不需能量，同转录相关。
2、拓扑异构酶Ⅱ；使DNA双链同时断裂，然后 再连接。需能量ATP，同复制相关。
末端的多核苷酸链上形成3， 5—磷酸二酯键。 特点：A：底物为d NTP；
B：DNA模板 (3′ 5′)； C：引物：RNA引物 （带3′—羟基） ； D：方向 5′ 3′； F：产物DNA的性质与模板相同 。
2020/11/13
DNA聚合酶催化的链延长反应
3´
3´
5´
5´
3´
5´
3´
5´
模板链
3´
1、DNA聚合酶有校正功能，每引入一个核 苷酸都要复查一次，无误后方继续下去，它 不能从无到有合成新的链，因为在未核实前 一个核苷酸处于正确配对状态时是不会进行 聚合反应的；
2、RNA引物是从新开始合成的，错配的 可能性大，在完成引物功能后即将它删除， 而代之以高保真的DNA链。
2020/11/13
5´
5´
3´
RNA引物
子链
(2) 具有3′ 5′端核酸外切酶的活性
有校对功能，能在3′—OH端将 DNA链水解。以保证DNA复制的真实 性。
2020/11/13
DNA聚合酶的3´- 5´外切酶水解位 点
3´
5´
错配碱基
5´ 3´- 5´核酸外切 3´ 酶水解位点
(3) 具有5′ 3′端核酸外切酶的活性 由5′端水解DNA链，主要是切去一小段DNA，
责DNA的修复，在一定程度上参与DNA复 制。活性低。功能不十分清楚，是一种修复 酶。
2020/11/13
3、DNA聚合酶Ⅲ polⅢ 是使DNA链延长的主要聚合酶，目
前已知全酶是由7种多肽形成的复合物， 含有10种共22个亚基组分 （α2ε2θ2ζ2г2δ2δ2′2χ2ψ2β2）和Zn原子。
2020/11/13
同时该酶要求含有3’-OH和5’-磷酰基 的DNA片段能以氢键与互补链结合。
DNA—3′—OH＋P—5′—DNA＋ATP（NAD+） DNA—3′—O—P—5′—DNA＋AMP＋
PPi（NMN） 2020/11/13
E,coli连接酶 催化下的连接机制
2020/11/13
3'
连
A GAACCT T G
2020/11/13
（二）DNA复制的起点和方向
复制 叉 （ replication forks） ： 复制中的 DNA分子，未复制的部分是亲代双螺旋，而复 制好的部分是分开的，由两个子代双螺旋组成， 复制正在进行的部分叫做复制叉。
细胞内存在着能识别起始点的特种Pr。
2020/11/13
方向：复制叉从起始点出发，沿DNA移 动，移动方向与前导链的延长方向相同。
2020/11/13
（5）DNA聚合酶的“校对”作用
DNA聚合酶具有三种不同的酶活性。3’ →5’外切酶活性是校对新生DNA链和改正 聚合酶活性所造成的“错配”的一种手段。
现在所发现的真核生物DNA聚合酶一般 没有校正功能。
2020/11/13
错配碱基 聚合酶
切除错配 核苷酸
正 确核 苷酸
包括RNA引物和损伤DNA部分。
polⅠ主要功能： 用于修复DNA双螺旋区中的单链区，这些单
链区是在DNA复制时或DNA受损伤后留下的。 活性高。
2020/11/13
DNA聚合酶5´- 3´外切酶活力
5´ 单链缺口
5´- 3´核酸外切 酶水解位点
2、DNA聚合酶Ⅱ polⅡ 具有3′ 5′端核酸外切酶的活性，主要负
2020/11/13
方向：以DNA为模板，5’ → 3’ 长度：几个至10个核苷酸，5′端含3个磷酸残 基，3′端为游离羟基。 DNA聚合酶III ：聚合脱氧核糖核苷酸 引物消除和缺口填补：DNA聚合酶I DNA连接酶：将冈崎片段连成长链
2020/11/13
为 什 么 需 要 RNA 引 物 、 而 且 最 后 要 切 除？
DNA的半 保留复制 实验依据
[15N] DNA
[14N- 15N] DNA
1958年Meselson & stahl用同位素示踪 标记加密度梯度离 心技术实验,证明了 DNA是采取半保留 的方式进行复制.
[14N- 15N] DNA
[14N] DNA
Meselson-stahl实验
（a）密度梯度离心的DNA带 （b）对应于左侧DNA带的解释
合成是不连续的，合成速度较慢。当一段新 的冈崎片段合成后，polⅠ行使5’ → 3’核酸外切酶 活性切除引物，再合成一段DNA作为替换，缺口 由DAN连接酶封口。
2020/11/13
(2)冈崎片段的RNA引物
引物的合成由引物合成酶催化完成，这些酶 在模板单链DNA上识别特殊序列，合成RNA 引物。它本身没有活性，需要与“引发前体” 结合在一起，形成“引发体”后才有活性。引 发体在复制叉上移动，识别合成的起始点，引 发RNA引物的合成，该过程需ATP提供能量。
（4）核心酶+ζ亚基后成为二聚体，称为polⅢ′；
（5）polⅢ′与γ、δ亚基结合，形成polⅢ′，γ、 δ亚基可增强酶与模板的结合；
（6）polⅢ′′与β亚基结合形成全酶，β亚基犹如夹 子，夹住DNA向前滑动，不脱离，提高持续合成能力。
2020/11/13
大肠杆菌三种DNA聚合酶比较
比较项目
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