趋化因子MCP_1和MIP_2在大鼠肾脏移植后的动态变化

收稿日期：2009-08-11
作者简介：姚浩(1963-)，男，副主任医师，E-mail:yjj_xz@
趋化因子MCP-1和MIP-2在大鼠肾脏移植后的动态变化
姚浩，俞俊杰(扬州大学临床医学院泌尿外科，江苏扬州225001)
摘要：目的探讨大鼠肾脏移植后血清趋化因子MCP-1和MIP-2浓度变化的意义及环孢素A （CsA ）的影响。

方法对3组大鼠施行肾脏移植术，即未干预组、CsA 组和同系对照组。

采用ELLSA 方法检测受者术前及术后不同时间血清中趋化因子MCP-1和MIP-2的浓度。

结果血清MCP-1的浓度在术后6h 及急性排斥反应晚期两次达到峰值，应用CsA 后第一峰出现延迟，但不影响其峰值浓度(P >0.05)，未出现第二峰。

各实验组术后6h 均出现MIP-2的浓度峰值，仅未干预组术后第9天出现第二峰值且浓度低于前一峰值(P <0.05)。

结论MCP-1和MIP-2的峰值反映移植物的缺血再灌注损伤及严重的急性排斥反应，CsA 对MCP-1和MIP-2浓度无明显影响。

关键词：急性排斥反应；肾脏移植；趋化因子中图分类号：R699.2
文献标识码：A
文章编号：1673-4254(2009)12-2512-02
Dynamic changes of serum MCP -1and MIP -2chemokines after renal transplantation in rats
YAO Hao,YU Jun-jie
Department of Urology,School of Clinical Medicine,Yangzhou University,Yangzhou 225001,China
Abstract:Objective To investigate the changes in serum levels of chemokine MCP-1and MIP-2after renal transplantation in rats and the influence of Cyclosporin A (CsA)on their levels.Method Three groups of rats,namely untreated group,CsA group and isograft group underwent the renal transplantation,and the serum MCP-1and MIP-2levels of the recipients were tested using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results The serum MCP-1level peaked 6hours after the operation and also in critical stages of acute rejection.The first peak of MCP-1was postponed by the application of CsA,which did not affect the peak level (P >0.05).The second peak of MCP-1did not occur in CsA-treated group.MIP-2concentration also peaked at 6h after the operation in all the groups.The second peak of MIP-2,which was lower than the first one (P <0.05),occurred 9days after the transplantation.Conclusion MCP-1and MIP-2in involved not only in the ischemia-reperfusion injury but also in severe acute rejection.CsA has no significant effect on serum levels of MCP-1and MIP-2following renal transplantation in rats.
Key words:acute rejection;renal transplantation;chemokine
趋化因子是具有内源性白细胞趋化性和活性化作用的低分子蛋白，属于细胞因子超家族，主要包括CC （或β）和CXC （或α）两大家族。

CC 家族成员中MCP-1，不仅具有趋化效应，还具有一系列调控单核细胞和淋巴细胞生物学活性的免疫学特性，参与调节机体的免疫应答［1］。

CXC 家族的MIP-2对中性粒细胞有很强的趋化作用，而对单个核细胞无趋化活性。

急性排斥反应过程中，可能有多种趋化因子参与免疫细胞的活化与定向迁移，因此，我们应用大鼠原位肾脏移植模型，检测移植术后不同时间外周血MCP-1and MIP-2家族趋化因子的动态变化，探讨两者在缺血再灌注损伤和急性排斥反应中的意义及环孢素A （CsA ）的影响。

1材料与方法1.1实验动物
选用体质量200~250g 雄性Wistar 大鼠为供体，
体质量200~280g 雄性SD 大鼠为受体，均由扬州大学实验动物中心提供。

1.2试剂
大鼠MCP-1和MIP-2检测试剂盒均为美国Biosource 公司产品，CsA 为瑞士Sandos Pharmaceuticals 公司产品。

1.3肾移植术及实验分组
采用改良大鼠异体肾脏移植模型的建立［2］，切除受者左侧肾脏，将供肾行原位移植。

实验分为3组：(1)未用免疫抑制剂干预组(未干预组)；(2)CsA (15mg ·kg -1·
d -1)干预组(CsA 组)；(3)雄性SD 大鼠间的移植作为同系对照组(isograft 组)。

健康SD 大鼠血清和肾脏作为术前正常对照。

每组分别于术后6h 、12h 、1d 、3d 、5d 、7d 、9d 、11d 及14d 摘取移植肾脏进行病理组织学检测，同时分离血清待测。

每个时间点设大鼠5只(n =5/timepoint)。

CsA 使用前以生理盐水稀释，严格定时、定量腹腔注射。

肾脏移植急性排斥反应分级按Banff 标准分为四级［3］。

1.4MCP-1和MIP-2的测定
南方医科大学学报(J South Med Univ)2009;29(12)
2512··
未干预组CsA 组isograft 组
术前0.250.51357911
14M C R -1(p g /m l )
350300250200150100500时间(天)
图1肾脏移植后血清MCP-1浓度的变化
未干预组CsA 组isograft 组
80706050403020100
M I R -2(p g /m l )
术前0.250.5
1
3
5
7
9
1114时间(天)图2肾脏移植后血清MIP-2浓度的变化
采用酶联免疫吸附(ELISA)法，严格按试剂盒说明进行测定。

1.5统计学处理
血清MCP-1和MIP-2的含量用均数±标准差表示，采用t 检验进行统计学差异性分析，以P <0.05为差异显著。

2结果
2.1肾脏移植后不同时间急性排斥反应的病理分级
未干预组术后3d 表现为Ⅰ~Ⅱa 级排斥反应，术后5d 表现为Ⅱb 级排斥反应，7d 后多表现为Ⅲ级排斥反应。

应用CsA 后，排斥反应发生的时间延迟，程度减弱，观察期内未见到Ⅱb 级以上的排斥反应。

同系对照组未发生急性排斥反应。

2.2移植后血清MCP-1的浓度变化及CsA 的影响(图1)
未干预组术后6h 即出现一MCP-1的浓度峰值(277.0±52.8)pg/mL ，显著高于术前的(10.6±2.62)pg/mL(P <0.05)，病理组织学检测可见大量中性粒细胞为主的炎性细胞浸润；术后第3天MCP-1降至正常水平，并于第7天开始再次升高，11天时达到峰值(106.6±15.7)pg/mL ，明显高于术前水平(P <0.05)，但低于前一峰值(P <0.05)。

组织学可见弥漫性炎性细胞浸润，细胞明显退变坏死，部分开始机化。

应用CsA 之后，MCP-1第一峰值出现延迟，但峰值水平与未干预组相比无显著差异(P >0.05)；观察期内未见第二峰的出现。

同系对照组术后6h 出现与未干预组相似的浓度峰值，逐渐降低后维持术前正常水平。

2.3移植后血清MIP-2的浓度变化及CsA 的影响(图2)
各实验组均于术后6h 出现相似的MIP-2浓度峰值，且显著高于术前水平(P <0.05)，病理组织学检查见移植物内大量中性粒细胞浸润。

仅未干预组术后第9天出现第二次峰值(38.9±9.2)pg/mL ，且浓度低于前峰值（P <0.05），伴细胞坏死和中性粒细胞浸润。

3讨论
急性排斥反应是以广泛的单个核细胞浸润为特征的免疫反应。

趋化因子及其受体在移植物急性排斥
反应及缺血再灌注损伤中能招募炎症细胞向炎症部位迁徙。

在动物实验中发现，阻断趋化因子及其受体间的相互作用能够减少炎症细胞浸润，延长移植物的存活时间［4-5］。

MCP-1是CC 家族的重要成员，MCP-1由单核细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞等产生，具有趋化激活单核细胞的双重功能［6-7］。

移植术后6h 即出现一MCP-1的浓度峰值，与同系移植相似，移植物间质可见大量中性粒细胞浸润，表现为缺血再灌注损伤的病理学特征。

中性粒细胞活化后，产生氧自由基，释放蛋白酶，激活内皮细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞等释放MCP-1，进而活化并趋化单核细胞，与移植物抗原共同触发随后的免疫损伤。

本研究还发现，急性排斥反应晚期移植肾坏死、机化时再次出现MCP-1的峰值，表明血清MCP-1不能用于预测和早期诊断急性排斥反应。

CsA 使缺血再灌注损伤时MCP-1的峰值延迟，其机制尚待进一步研究。

CXC 家族成员MIP-2能够特异性激活和趋化中性粒细胞。

我们的研究发现，移植术后6h 和第9天分别出现MIP-2的两次峰值，病理组织学检查见大量中性粒细胞浸润。

中性粒细胞可能不参与急性排斥反应时的移植物破坏，而是去除坏死后的细胞碎片，不同于移植物受到损害前的大量单个核细胞浸润。

Grau ［8］等研究发现，大鼠肾移植术后1~6天移植肾MIP-2基因无法测出或呈低水平表达。

可能因其研究时段较短，未能检测到术后早期缺血再灌注损伤和急性排斥反应晚期时MIP-2的变化。

我们的研究还显示，CsA 对术后早期中性粒细胞的浸润和MIP-2的升高无影响，预示术后早期阻断CXC 趋化信号可能无法抑制缺血再灌注损伤及其触发的免疫损伤。

MCP-1and MIP-2趋化因子通过不同的机制导致移植物的损害，常规免疫抑制剂CsA 不能完全阻断趋化信号。

移植排斥反应的发生与发展是多环节、多步骤的，在针对众多靶点的联合治疗中，发现具体独特作用的趋化信号尤为重要，阻断趋化信号可能成为倍受瞩目的新的治疗方案。

（下转2516页）
姚浩,等.趋化因子MCP-1和MIP-2在大鼠肾脏移植后的动态变化
第12期2513··
（上接2513页）参考文献：
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图4三维适形放疗联合TACE 与单纯TACE 治疗
肝癌2
年生存率漏斗图
病灶内有不同程度的肿瘤细胞残余
［10］。

因此TACE
术后近期疗效好，但远期效果差，易发生残留癌细胞
增殖和复发。

进入21世纪以来，随着放射治疗技术的快速发展，三维适形放射治疗技术已趋于成熟,通过三维计划系统进行三维重建，能使高剂量放射线的分布在三维方向上与肿瘤形态一致，将放射线最大限度的集中在肿瘤区域内，使其与周围正常组织或器官之间形成明显的剂量梯度，把正常肝组织射线受量控制在可接受的范围之内。

TACE 联合三维适形放射治疗已经成为肝癌非手术治疗的主要手段［11］。

在TACE 基础上结合三维适形放射治疗，可取得比单纯TACE 治疗方式更好的远期疗效。

本次Meta 分析结果显示，TACE 联合三维适形放射治疗治疗肝癌的远期疗效1、2年生存率优于单纯TACE 治疗组，更远期生存率有待于加大样本量进一步随访和研究。

本文采用循征医学的一种重要研究方法Meta-分析对现有的随机临床对照试验进行统计合并，以先前的研究结果为观察单位进行再分析.通过Meta 分析，将TACE 联合三维适形放射治疗
肝癌的研究结果进行定量综合，扩大了临床试验研究的样本量，提高了统计分析效能。

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南方医科大学学报(J South Med Univ)第29卷
2516··。