广州地区乙型肝炎患者HBV基因型和耐药突变基因的相关性研究
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采 用 荧光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测 ３ ４ ４例 广 州地 区慢 性 乙型肝 炎 患 者 血 清 标 本 的 ＨＢ Ｖ ＤＮＡ 载 量 ， 采 用 酶 联 免 疫 吸 附试 验
检 测 ＨＢ Ｖ标 志物， 采用Ｐ Ｃ Ｒ 和 ＤＮ Ａ 反 向 点 杂 交技 术 检 测 ＨＢ Ｖ 基 因 分 型 和拉 米 夫 定 、 替 比夫定、 阿德 福 韦 酯和 恩 替 卡 韦 耐 药 突
因Ｅ ｌ ｉ 。 因此 ， 抗病毒治疗刻不容 缓。近年来研究发 现 ， ＨＢ Ｖ 基
因具 有 多基 因 型 （ Ａ～ Ｈ 型 ） 和高度 突变 性 ， 基 因 突 变 与 ＨＢ Ｖ
的耐 药 性 和 其 导 致 的 慢 性 疾 病 的 发 生 有 密 切 联 系 。 另 外 ，
ＨＢ Ｖ 基 因 型存 在 一 定 的地 理 区 域 分 布 特 征 ， 不 同 地 区 分 布 特 性可能存 在差异 ， 在 东 亚地 区 慢 性 ＨＢ Ｖ 感 染 者 中 以基 因 Ｂ、 ｃ
乙型病毒性肝炎是 由乙型肝 炎病 毒（ ＨＢ Ｖ） 引起 的传染 性
疾 病 。 据世 界 卫 生 组 织 统 计 ， 全 球 ＨＢ Ｖ慢 性感 染者 已达 ３ ． ５ 亿人 ， 而 每 年 因 乙 型肝 炎死 亡 的 人 数 高 达 １ ０ ０万 。我 国是 乙 型
ＨＢ ｅ Ａ ｇ 、 抗一 ＨＢ ｅ 、 抗一 ＨＢ ｃ 和甲 、 丙、 丁、 戊、 庚 等 其 他 类 型 肝 炎 病毒抗体 ， 采用 酶联免疫 吸附试验检测 ， 严 格 按 照 试 剂 说 明 书
检 验 医 学 与 临床 ２ Ｏ １ ６年 １ ２月 第 １ ３卷 第 ２ ３期
・Hale Waihona Puke Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ Ｃ ｌ ｉ ｎ ， Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ６ ， Ｖｏ １ ． １ ３ ， Ｎ ｏ ． ２ ３
・
３ ３６ ７ ・
临床 探讨 ・
广 州地 区 乙型肝 炎 患 者 ＨＢ Ｖ 基 因型 和 耐药 突 变基 因的 相关 性研 究
Ｄ ０Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ － ９ ４ ５ ５ ． ２ ０ １ ６ ． ２ ３ ． ０ ３ ４ 文 献 标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ９ ４ ５ ５ （ ２ Ｏ １ ６ ） ２ ３ — ３ ３ ６ ７ 一 Ｏ ３
统 计 学意 义 （ Ｐ ＞Ｏ ． ０ ５ ） 。 对拉 米 夫 定 、 阿德 福 韦脂 、 恩替卡 韦和 替 比 夫定耐 药例 数分 别是 ９ ５ 、 ４ ９ 、 ２ ０和 ８ ４例 ， 敏 感 例 数 分 别 是
２ ４ ９ 、 ２ ９ ５ 、 ３ ２ ４和 ２ ６ ０例 。 突 变基 因 型 以 ｒ ｔ １ ８ １ Ｔ 最多， 且 多见 于 Ｃ基 因型 （ １ １ Ｏ例 ） 。结 论 广 州地 区 乙型 肝 炎 患者 ＨＢ Ｖ基 因型以
ＤＮ Ａ 提 取采 取 离 心 柱 法 ， 取 ５ Ｌ用 于 Ｐ Ｃ Ｒ扩增反应 。 １ ． ３ ． ４ ＨＢ Ｖ Ｄ ＮＡ 水 平 检 测 ＨＢ Ｖ Ｄ ＮＡ 水 平 采 用 实 时 荧 光
定量 Ｐ Ｃ Ｒ检测 ， 操 作 过 程 严 格 按 照试 剂 盒说 明 书 进 行 。
蔡 振 华 ， 方伟祯 。 ， 肖木 洲 ， 孙 六 娜 ， 蓝 红 云
（ １ ． 广 州 中医药 大学 第一 附属 医院检 验科 ， 广州 ５ １ ０ ４ ０ ５ ； ２ ． 中山 大学孙 逸仙 纪念 医院检 验科 ， 广州 ５ １ ｏ １ ２ ｏ ）
摘 要 ： 目的 分 析 广 州地 区 乙型肝 炎 患 者 乙型 肝 炎 病 毒 （ ＨＢ Ｖ） 基 因型 分 布 特 点 、 耐 药 突 变基 因状 况 及 二 者 的 关 系 。方 法
Ｂ型为主 ； ＨＢ Ｖ Ｃ基 因型 容 易 产 生 耐 药 ， 检 测 ＨＢ Ｖ 基 因 型 和 耐 药 突 变 型 是 评 价 慢 性 乙型 肝 炎 临床 治 疗 疗 效 和 选择 用 药 的 重 要
指标 。
关键词 ： 慢 性 乙型 肝 炎 ； 乙型肝 炎病 毒 基 因型 ； 耐药突变基 因
１ ． ３ ． ３ 乙型 肝 炎 ＤＮＡ 提 取
荧 光定量 Ｐ Ｃ Ｒ Ｄ ＮＡ 提 取 采 用
金 属浴法 ： 取血清 ２ ０ ０ Ｌ， 加入 ４ ５ ０ Ｌ Ｄ ＮＡ 提 取 液 Ｉ和 ４ Ｌ 的内标 溶 液 ， 用 振荡 器 剧 烈 振荡 混 匀 １ ５ Ｓ ， 瞬 时 离 心 数秒 。 １ ０ ０℃ 恒 温 处 理 （ １ ０土 １ ） ａｉ ｒ ｎ ， 然后 以 １ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ａｉ ｒ ｎ离 心 ５ ａｉ ｒ ｎ ， 取上清 ２ Ｏ Ｌ用 于 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增反 应 ； Ｐ Ｃ Ｒ 一 反 向 点 杂 交 法
操作 。
肝 炎病 患 大 国 ， 原卫 生部在 ２ ０ ０ ６年 开 展 了 全 国人 群 乙 型 肝 炎
等有 关疾 病 血清 流行 病 学调 查 ， 结果 显示 ， ＨＢ ｓ Ａ ｇ携 带 率 达 ７ ． １ ８ ， 而 慢 性 ＨＢ Ｖ 感 染 是 引 起 肝 硬 化 和 肝 癌 的 主 要 原
变 基 因 。结 果 ３ ４ ４例 慢 性 乙型 肝 炎 患 者 中 ＨＢ Ｖ 基 因 Ｂ型 １ ７ ９例 ， 占５ ２ ． Ｏ ３ ； ｃ型 １ ３ ６例 ， 占３ ９ ． ５ ３ ； Ｄ型 ４ 例， 占１ ． １ ６ ； Ｂ、
Ｃ混合型 １ ４例 ， 占４ ． Ｏ ７ ； Ｂ、 Ｄ 混 合 型 ２例 ， 占０ ． ５ ８ ； 其 他 型 ９例 ， 占２ ． ６ ２ 。不 同 ＨＢ Ｖ 基 因型 的 ＨＢ Ｖ ＤＮＡ 载量 结 果 差异 无
型为主 ， 但各地报道其 优势 基因型存 在一定 差异 。因此 ， 本 研
检 测 ＨＢ Ｖ标 志物， 采用Ｐ Ｃ Ｒ 和 ＤＮ Ａ 反 向 点 杂 交技 术 检 测 ＨＢ Ｖ 基 因 分 型 和拉 米 夫 定 、 替 比夫定、 阿德 福 韦 酯和 恩 替 卡 韦 耐 药 突
因Ｅ ｌ ｉ 。 因此 ， 抗病毒治疗刻不容 缓。近年来研究发 现 ， ＨＢ Ｖ 基
因具 有 多基 因 型 （ Ａ～ Ｈ 型 ） 和高度 突变 性 ， 基 因 突 变 与 ＨＢ Ｖ
的耐 药 性 和 其 导 致 的 慢 性 疾 病 的 发 生 有 密 切 联 系 。 另 外 ，
ＨＢ Ｖ 基 因 型存 在 一 定 的地 理 区 域 分 布 特 征 ， 不 同 地 区 分 布 特 性可能存 在差异 ， 在 东 亚地 区 慢 性 ＨＢ Ｖ 感 染 者 中 以基 因 Ｂ、 ｃ
乙型病毒性肝炎是 由乙型肝 炎病 毒（ ＨＢ Ｖ） 引起 的传染 性
疾 病 。 据世 界 卫 生 组 织 统 计 ， 全 球 ＨＢ Ｖ慢 性感 染者 已达 ３ ． ５ 亿人 ， 而 每 年 因 乙 型肝 炎死 亡 的 人 数 高 达 １ ０ ０万 。我 国是 乙 型
ＨＢ ｅ Ａ ｇ 、 抗一 ＨＢ ｅ 、 抗一 ＨＢ ｃ 和甲 、 丙、 丁、 戊、 庚 等 其 他 类 型 肝 炎 病毒抗体 ， 采用 酶联免疫 吸附试验检测 ， 严 格 按 照 试 剂 说 明 书
检 验 医 学 与 临床 ２ Ｏ １ ６年 １ ２月 第 １ ３卷 第 ２ ３期
・Hale Waihona Puke Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ Ｃ ｌ ｉ ｎ ， Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ６ ， Ｖｏ １ ． １ ３ ， Ｎ ｏ ． ２ ３
・
３ ３６ ７ ・
临床 探讨 ・
广 州地 区 乙型肝 炎 患 者 ＨＢ Ｖ 基 因型 和 耐药 突 变基 因的 相关 性研 究
Ｄ ０Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ － ９ ４ ５ ５ ． ２ ０ １ ６ ． ２ ３ ． ０ ３ ４ 文 献 标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ９ ４ ５ ５ （ ２ Ｏ １ ６ ） ２ ３ — ３ ３ ６ ７ 一 Ｏ ３
统 计 学意 义 （ Ｐ ＞Ｏ ． ０ ５ ） 。 对拉 米 夫 定 、 阿德 福 韦脂 、 恩替卡 韦和 替 比 夫定耐 药例 数分 别是 ９ ５ 、 ４ ９ 、 ２ ０和 ８ ４例 ， 敏 感 例 数 分 别 是
２ ４ ９ 、 ２ ９ ５ 、 ３ ２ ４和 ２ ６ ０例 。 突 变基 因 型 以 ｒ ｔ １ ８ １ Ｔ 最多， 且 多见 于 Ｃ基 因型 （ １ １ Ｏ例 ） 。结 论 广 州地 区 乙型 肝 炎 患者 ＨＢ Ｖ基 因型以
ＤＮ Ａ 提 取采 取 离 心 柱 法 ， 取 ５ Ｌ用 于 Ｐ Ｃ Ｒ扩增反应 。 １ ． ３ ． ４ ＨＢ Ｖ Ｄ ＮＡ 水 平 检 测 ＨＢ Ｖ Ｄ ＮＡ 水 平 采 用 实 时 荧 光
定量 Ｐ Ｃ Ｒ检测 ， 操 作 过 程 严 格 按 照试 剂 盒说 明 书 进 行 。
蔡 振 华 ， 方伟祯 。 ， 肖木 洲 ， 孙 六 娜 ， 蓝 红 云
（ １ ． 广 州 中医药 大学 第一 附属 医院检 验科 ， 广州 ５ １ ０ ４ ０ ５ ； ２ ． 中山 大学孙 逸仙 纪念 医院检 验科 ， 广州 ５ １ ｏ １ ２ ｏ ）
摘 要 ： 目的 分 析 广 州地 区 乙型肝 炎 患 者 乙型 肝 炎 病 毒 （ ＨＢ Ｖ） 基 因型 分 布 特 点 、 耐 药 突 变基 因状 况 及 二 者 的 关 系 。方 法
Ｂ型为主 ； ＨＢ Ｖ Ｃ基 因型 容 易 产 生 耐 药 ， 检 测 ＨＢ Ｖ 基 因 型 和 耐 药 突 变 型 是 评 价 慢 性 乙型 肝 炎 临床 治 疗 疗 效 和 选择 用 药 的 重 要
指标 。
关键词 ： 慢 性 乙型 肝 炎 ； 乙型肝 炎病 毒 基 因型 ； 耐药突变基 因
１ ． ３ ． ３ 乙型 肝 炎 ＤＮＡ 提 取
荧 光定量 Ｐ Ｃ Ｒ Ｄ ＮＡ 提 取 采 用
金 属浴法 ： 取血清 ２ ０ ０ Ｌ， 加入 ４ ５ ０ Ｌ Ｄ ＮＡ 提 取 液 Ｉ和 ４ Ｌ 的内标 溶 液 ， 用 振荡 器 剧 烈 振荡 混 匀 １ ５ Ｓ ， 瞬 时 离 心 数秒 。 １ ０ ０℃ 恒 温 处 理 （ １ ０土 １ ） ａｉ ｒ ｎ ， 然后 以 １ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ａｉ ｒ ｎ离 心 ５ ａｉ ｒ ｎ ， 取上清 ２ Ｏ Ｌ用 于 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增反 应 ； Ｐ Ｃ Ｒ 一 反 向 点 杂 交 法
操作 。
肝 炎病 患 大 国 ， 原卫 生部在 ２ ０ ０ ６年 开 展 了 全 国人 群 乙 型 肝 炎
等有 关疾 病 血清 流行 病 学调 查 ， 结果 显示 ， ＨＢ ｓ Ａ ｇ携 带 率 达 ７ ． １ ８ ， 而 慢 性 ＨＢ Ｖ 感 染 是 引 起 肝 硬 化 和 肝 癌 的 主 要 原
变 基 因 。结 果 ３ ４ ４例 慢 性 乙型 肝 炎 患 者 中 ＨＢ Ｖ 基 因 Ｂ型 １ ７ ９例 ， 占５ ２ ． Ｏ ３ ； ｃ型 １ ３ ６例 ， 占３ ９ ． ５ ３ ； Ｄ型 ４ 例， 占１ ． １ ６ ； Ｂ、
Ｃ混合型 １ ４例 ， 占４ ． Ｏ ７ ； Ｂ、 Ｄ 混 合 型 ２例 ， 占０ ． ５ ８ ； 其 他 型 ９例 ， 占２ ． ６ ２ 。不 同 ＨＢ Ｖ 基 因型 的 ＨＢ Ｖ ＤＮＡ 载量 结 果 差异 无
型为主 ， 但各地报道其 优势 基因型存 在一定 差异 。因此 ， 本 研