GPR119调控脂质代谢平衡的研究

GPR119调控脂质代谢平衡的研究
目的探讨GPR119调控脂质代谢平衡。

方法通过过表达或抑制表达GPR119载体分组，构建过表达GPR119载体（增强表达GPR119慢病毒载体），观察过表达GPR119与SR-B1表达变化、过表达GPR119后APOE表达变化。

结果NC组的SR-B1表达数值为（2.65±0.02）低于GPR119（H）组的SR-B1表达数值为（8.65±0.06）（P＜0.05）；NC组的APOE表达数值为（1.26±0.01）低于GPR119（H）组的APOE表达数值为（29.75±1.05）（P＜0.05）。

结论GPR119在调节脂质代谢中发挥重要作用，参与对肝脏胆固醇的逆向转运，对抗动脉粥样硬化起一定作用。

标签：GPR119；脂质代谢平衡；调控
GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质平衡的膜受体。

GPR119属于G 蛋白偶联受体A家族，有7个跨膜区，在胞浆内与三个亚单位（α、β、γ）所组成的G蛋白偶联，主要表达在胰岛和胃肠道细胞[1-2]。

人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，该基因的开放阅读框架仅有一个外显子，不含内含子，编码335个氨基酸。

GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用有了比较深入的研究，并有研究表明GPR119参与脂质代谢。

最近研究表明，GPR119与激动剂结合后，通过cAMP信号转导途径，促进葡萄糖依赖性胰岛素和肠肽激素的分泌[1]，是新一代的治疗2型糖尿病和肥胖症的药物靶点。

基于这一作用，大量文献报道了GPR119激动剂的研究，并有部分GPR119激动剂应用于临床。

本项目拟在文献分析和已有的研究工作基础上，结合国内外研究进展，探讨GPR119对胆固醇吸收、转运、和代谢相关基因和蛋白表达的影响及作用机制，为确立GPR119作为调控脂质平衡和动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点，提供科学依据，如下文所示。

1资料与方法
1.1一般资料
基于细胞水平观察GPR119对脂质吸收、转运和代谢的影响，具体分组如下所示：①空载体转染THP-1+正常培养基48 h；②空载体转染THP-1+Dil-oxLDL （50 μg/ml）48 h；③过表达GPR119载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；④抑制表达GPR119载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2方法
仪器与试剂：CO2培养箱，超净工作台，7500 Fast荧光定量仪，胎牛血清，Lipofectamine 2000，PrimeScriptRRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII 等基因检测试剂。

通过公司购买过表达GPR119载体，构建过表达GPR119载体（增强表达GPR119慢病毒载体）；THP-1细胞用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞，采用构建的GPR119载体、抑制GPR119表达载体分别转染THP-1
巨噬细胞，按公司构建载体转染说明书进行转染；检测转染后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE等基因和蛋白的表达。

1.3观察指标
观察过表达GPR119后SR-B1、APOE表达变化。

1.4统计学处理
所有数据均以SPSS18.0系统分析，计量资料以（x±s）表示，计数资料以%表示，P＜0.05显示差异有统计学意义。

2结果
以PCR试验，定时定量测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中的SR-B1表达，每个试验重复三次，将结果以均数标准差表示。

通过PCR试验，定时定量测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中的APOE表达，每个实验重复进行三次。

NC组、GPR119（H）组的APOE表达、SR-B1表达数值均存在明显差异（P＜0.05），见表1。

3讨论
虽然GPR119近年来在脂质代谢中的作用得到重视，但GPR119是否参与调控巨噬细胞胆固醇的摄取、代谢、转运和流出及相关机制尚不完全清楚。

GPR119是否通过一些新的途径参与调节机体对外源性胆固醇吸收，内源性胆固醇合成，胆固醇逆向转运等从而影响动脉粥样硬化形成还未见报道。

因此，从细胞水平观察GPR119对巨噬细胞胆固醇吸收、胆固醇合成、胆固醇水解和胆固醇流出的影响，以及GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响成为目前研究重点。

清道夫B1（SR-B1）是一个多配体受体，能在HDL与细胞间介导双向脂质转运，可以在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达，对肝脏胆固醇的逆向转运和抗动脉粥样硬化都是必须的。

SR-B1敲除鼠可导致快速的冠状动脉闭塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1对于脂质调节和抗动脉粥样硬化起重要作用[3]。

载脂蛋白E（APOE）是血浆中脂蛋白的重要组成成分，在脂质代谢中起着重要作用。

APOE通过不同機制对动脉粥样硬化起一定抑制作用。

卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）是一种血浆中起催化作用的酶，其作用是将HDL的卵磷脂的C2位不饱和脂肪酸转移给游离胆固醇，生产溶血卵磷脂和胆固醇酯，在脂质代谢中发挥重要作用[4]。

GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质平衡的膜受体，脂质在巨噬细胞源性泡沫细胞聚积是形成动脉粥样硬化的重要事件，保持体内脂质平衡为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。

通过研究GPR119在巨噬细胞脂质代谢平衡中的作用，为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点，是本项目的特色与创新之处。

通过增强或抑制GPR119的表达，探讨GPR119调节体内脂质代谢平衡的新途径，为GPR119在调节体内脂质代谢过程中重要作用提供新的实验证据，为脂质代谢
紊乱相关性疾病尤其是动脉粥样硬化的防治提供新的药物筛选指标。

在研究过程中，需要解决两个方面的问题，一是对能够有效表达GPR119的质粒进行构建，增强慢病毒的包装，二是针对特异性GPR119 siRNA干扰片段的构建及转染[5]。

通过研究可知，过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE表达显著上调[6]。

其中，SR-B1是一个多配体受体，能在HDL与细胞间介导双向脂质转运，可以在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达，对于脂质调节和抗动脉粥样硬化起重要作用；APOE是血浆中脂蛋白的重要组成成分，在脂质代谢中起着重要作用。

APOE通过不同机制对动脉粥样硬化起一定抑制作用。

由此可知，GPR119在调节脂质代谢中发挥重要作用，参与对肝脏胆固醇的逆向转运，对抗动脉粥样硬化起一定作用。

参考文献：
[1]高伟.GPR119受体激动剂GSK1292263对糖尿病的作用及机制探讨[J].现代仪器与医疗，2016，22（1）：64-66.
[2]赵立霞，于洋，王志强，等.基于GPR119靶点的抗糖尿病药物研究进展[J].中国药物化学杂志，2012（5）：393-402.
[3]张书永.新型GPR119和TGR5激动剂的发现及其对糖尿病作用的研究[D].同济大学，2014.
[4]李莹，黄思罗，刘剑锋.脂筏在G蛋白偶联受体信号转导中的调控作用[J].现代生物医学进展，2009，9（18）：3536-3539.
[5]蒋坤，江程，宋丽君，等.G蛋白偶联受体119激动剂的研究进展[J].中国新药杂志，2012（20）：2388-2393.
[6]姜思屹，于萍，李强.G蛋白偶联受体119激动剂在2型糖尿病治疗中的应用[J].中国医药，2015，10（10）：77-82.。