黄芪对博来霉素肺纤维化大鼠肺组织SOD、MDA含量表达的影响

2019年第40卷第8期云南中医中药杂志67・实验研究・
黄夷对博来霉素肺纤维化大鼠肺组织SOD、MDA含量表达的影响*
杨军
（陕西中医药大学，陕西西安712046）
摘要：目的探讨中药黄英对肺纤维化大鼠肺组织超氧化物歧化（SOD）、丙二醛（MDA）含量表达的影响。

方法将实验动物分为假手术组、模型组、黄茂煎液组、黄英总皂普组、地塞米松组5组，用酶联免疫免法测定大鼠肺组织中的SOD、MDA的含量。

结果模型组大鼠肺组织中的SOD降低（P<0.（H）、MDA水平升高，经黄英药物干预后，大鼠肺组织中的SOD水平明显上升（P<0.（H）、MDAP水平明显下降（P<0. 01）o结论黄英可以提升大鼠肺组织SOD的水平，降低MDA的水平，达到预防治疗肺纤维化的作用。

关键词：肺纤维化;黄英煎液;黄英总皂昔;超氧化物歧化酶；丙二醛
中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号：1007-2349（2019）08-0067-03
Effect of Astragalus Membranaceus on SOD and MDA Content Expression
in Bleomycin-Induced Pulmonary Fibrosis Rats
YANG Jun
(Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine,Xi，an712046,China)
[Abstract]Objective:To study the effect of Astragalus membranaceus on the expression of superoxide dismutase(SOD)and malond­ialdehyde(MDA)in lung tissue of rats with pulmonary fibrosis.Methods:Experimental animals were divided into sham operation group, model group,Astragalus decoction group,Astragalus total saponin group and dexamethasone group.The contents of SOD and MDA in lung tissue were determined by enzyme-linked immunosorbent assay.Results:The SOD in the lung tissue of the model group decreased(P< 0.01)and the MDA level increased.After the intervention of Astragalus,the SOD level in the lung tissue of the rats increased significantly (P<0.01),and the MDAP level decreased significantly(P<0.01).Conclusion:Astragalus can increase the level of SOD in lung tis­sue of rats and reduce the level of MDA to prevent and treat pulmonary fibrosis.
[Key words]pulmonary fibrosis,Astragalus decoction,Astragalus total saponin,superoxide dismutase,malondialdehyde
肺纤维化（pulmonary fibrosis,PF）临床以呼吸困难、动则尤甚、乏力、消瘦、咳嗽、咯血等为特征,是一种严重威胁人类身体健康的慢性疾病。

据报道，本病五年的生存率仅为50%⑴,预后与癌症相似。

对肺纤维化的预防治疗,现代医学对本病的治疗主要是采用糖皮质激素及免疫抑制剂等。

由于肺纤维化发病率高、死亡率不断上升，目前尚无理想的治疗方法，所以近年来中医药防治肺纤维化成关注的重点，意味着中医药有可能成为临床治疗肺纤维化的主要方法。

黄茯⑵作为临床上预防治疗肺纤维化的重要药物之一,其药理应用广泛,是黄罠临床上预防治疗肺纤维化的重要成分之一，故把黄罠作为实验药物的首选。

本研究以博来霉素诱导的肺纤维化大鼠作为实验动物模型,用黄茯、黄罠总皂昔进行干预治疗，检测模型大鼠肺组织中SOD.MDA含量变化，揭示黄苗防治肺纤维化的作用机制。

1材料
1.1实验药物黄罠由陕西中医药大学校附属医院药剂科提供，经鉴定为合格药材，动物灌胃前制备成混悬液;醋酸地塞米松片,河南濮阳市汇元药业有限公司生产，药品批准文号:J20160009；黄罠总皂昔标准品，上海如吉生物科技发展有限公司生产,药品批准文号：J20160089o
1.2实验动物SPF级Wistar大鼠60只，体重（200±20）g,雌雄各半，购自第四军医大学实验动物中心，许可证号：SCXK-（军）2012-0007o动物饲养于清洁级饲养室,期间自由饮水、摄食，室温20~25弋，湿度40%〜70%,光照周期12h/12h,通风良好。

1.3试剂与仪器注射用盐酸博来霉素（浙江海正药业股份有限公司，国药准字H20051232）；大鼠丙二醛（MDA）测定试剂盒（批号:20160901）,南京建成生物工程研究所，大鼠超氧化物岐化酶（SOD）测定试剂盒（批号:20160919）南京建成生物工程研究所。

2方法
2.1动物造模SPF级大鼠60只，雌雄各半，体重（200土20）g,适应性喂养3天后,根据体重随机分为分为假手术组、模型组、黄蔑煎液组、地塞米松组、黄茂总皂昔组共5组。

大鼠造模参照⑶的研究方法加以改进。

除空白组外，其余组用20%的乌拉坦1.4g/kg腹腔麻醉大鼠。

将麻醉后的大鼠仰卧固定于鼠板上，拾高鼠板头端,使之与桌面成70-80度角，用橡皮固定大鼠的牙齿，用5号输液器的软管部分，注
基金项目：陕西省教育厅自然专项计划项目（15JK1212）
作者简介:杨军（1971-）,男，医学博士，副教授，研究方向:经方治疗老年病的研究。

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入0.5-1mL气体，发现输液器的软管内有气泡上下运动，即用1mL的注射器取针头后，迅速将约0.2mL左右的博莱霉素注射液(5mg/kg-1)推入气管后，置大鼠于手，捏其颈部，均而快速旋转大鼠5圈，使药液尽可能均匀地布达两侧肺部。

最后将大鼠置于安静处，观察动物的呼吸状态,待动物自然清醒后置笼内常规饲养。

2.2给药方法假手术组和模型组每天灌胃以相应体积冷开水，黄罠煎液组(黄茂原药量1.8g/kg/d).地塞米松组(0.405mg/kg/d)A黄罠总皂昔(15mg/kg/d)灌胃以相应药物,各组均从造模次日开始给药，每天灌胃1次。

2.2标本采集分别于14d,28d每组处死各6只,剪开胸腔，小心分离肺组织，摘取肺脏，立即用预冷的生理盐水冲洗，滤纸拭干，称重，冰盘上切取少部分左下叶肺脏组织，以40%戊二醛固定溶液固定，备检。

2.3指标检测主要测定大鼠肺组织SOD.MDA含量变化,采用硝酸还原酶法，严格按说明书操作，最后进行化学比色。

2.4统计学方法用SPSS18.0软件包分析,实验设计为多因素非平衡的组合类型，将组别拆分成两个组合进行比较，即模型组与空白组进行比较，模型组与观察组、对照组进行比较，实验数据以均数土标准差G±$)表示，先进行正态分析,符合要求后各组间差异分别采用单因素方差分析和t检验,P 值小于0.05认为有统计学意义。

3结果
从表1、2可以看出,14d时,模型组大鼠与假手术组大鼠肺组织匀浆中SOD活力明显降低(PV0.01),28d时,与模型组比较，黄苗煎液组、黄罠总昔组、地塞米松组SOD活力升高明显(P<0.01)；但对与SOD活力的影响，黄苗煎液组、黄苗总昔组、地塞米松组之间没有统计学意义(P>0.05)o 表1黄夷煎液、黄夷总皂昔对14d肺纤维化大鼠肺组织
SOD活性的影响(无±$)
组别动物数(只)剂量(mg/kg)SOD(U/m gprot)假手术组6—306.71±53.91模型组6—161.40±14.39
*地塞米松组60.405235.22±28.35A 黄苗煎液组61800215.38±30.95A 黄英总昔组615228.59±30.93A 注:与假手术组比较,*P<0.01；与模型组比较,A P<0.01
表2黄蔑煎液、黄英总皂昔对28d肺纤维化大鼠肺组织
SOD活性的影响G±s)
组别动物数(只)剂量(mg/kg)SOD(U/mgprot)假手术组6—363.78±68.69模型组6—242.55±40.74
*地塞米松组60.405311.69±35.62^黄茂煎液组61800323.70±32.65A 黄茯总昔组615343.12±25.26A 注:与假手术组比较,*P<0.01组比较<0.05,仃<0.01
从表3、4可以看出,14天时,与空白组相比，模型组肺组织匀浆中MDA含量明显升高(P<0.01),说明复制肺纤维化模型成功;28天时,与模型组比较，黄罠煎液组、黄罠总皂昔组、地塞米松组MDA含量降低明显(P<0.01)；但对MDA 含量的影响，黄罠煎液组、黄罠总昔组、地塞米松组之间没有统计学意义(P>0.05)o
表3黄英煎液、黄夷总皂昔对14d肺纤维化大鼠肺组织
MDA含■的影响(%±5)
组别动物数(只)剂量(mg/kg)MDA(nmol/mgprot)
假手术组6— 6.01±0.93
模型组6—12.27±1.18
*
地塞米松组60.4059.59±1.46a
黄苗煎液组618009.65±1.03a
黄喪总昔组6159.52±1.19a 注:与假手术组比较/P<0.01,与模型组比较/P<0.01
表4黄英煎液、黄茂总皂昔对28d肺纤维化大甌肺组织
MDA含量的影响(无土$)
组别动物数(只)剂量(mg/Kg)MDA(nmol/m gprot)
假手术组6—7.29±0.69
模型组6—11.79±1.61
*
地塞米松组60.4059.46±1.19a
黄隹煎液组618009.71±1.60探
黄苗总昔组6159.00±1.43a 注:与假手术组比较,*P<0.05,与模型组比较，豪P<0.05,a P<0.01 4讨论
SOD和MDA是反映机体清除氧自由基能力和氧自由基对机体损害的两个重要指标15］。

在肺纤维化时，肺组织内积累着大量的自由基，引起自由基对机体长期、反复的损害,并可能形成恶性循环，促进肺纤维化的形成。

因此，自由基在肺纤维发病起着重要作用。

SOD是机体内重要的抗氧化酶,MDA是脂质过氧化的终产物,SOD、MDA的变化可反映机体活性氧及其衍生物水平的高低，对反映肺纤维化的活程度具有重要的临床价值。

实验表明，随着肺纤维化严重程度的加重,SOD活力降低,MDA含量升高,当肺纤维化缓解时，SOD降低、MDA升高的程度随之减轻。

SOD活力升高,MDA 含量降低，表明机体具有抗氧自由基损伤的能力，应此对阐明肺纤维化发病机理具有重要意义。

在本实验中，与假手术组比较,14天时,模型组大鼠肺组织匀浆中SOD活力明显降低(P<0.01),28天时,与模型组比较，黄苗煎液组、黄罠总昔组、地塞米松组SOD活力升高明显(P<0.01)；m与SOD活力的影响，黄茂煎液组、黄罠总昔组没有统计学意义(P>0・05),因此说明，黄罠以及其有效部位总昔可以提高肺纤维化大鼠模型肺组织的SOD 活性,有效清除肺纤维化大鼠体内产生的自由基，预防治疗肺纤维化的产生和发展。

同时，在14天时，与假手术组相比，模型组肺组织匀浆中MDA含量明显升高(P<0.01)，说明复制肺纤维化模型成功;28天时,与模型组比较，黄苗煎液组、黄罠总皂昔组、地
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保元汤颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖昔的含量测定
袁玲玲，钱如贵△,丁丽娜，李心锋
(昆明邦宇制药有限公司，云南昆明650211)
摘要：目的建立HPLC法测定保元汤颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖昔的含量。

方法#■据《中国药典》规定的方法，并加以优化，以Agilent Eclipse plus(5|jLm,4.6mm X250mm)为色谱柱，以乙購(A)-0.2%甲酸溶液(B)为流动相，梯度洗脱(0~ 20min,15%~40%A；20~25min,40%A)，流速1.0mL/min,柱温25弋，检测波长260nm o结果经方法学验证，毛蕊异黄酮葡萄糖昔在25.23~504.5ng(/?2=0. 9995)范围内线性关系良好，该检测方法专属性较好，阴性无干扰，精密度RSD为0.26%,重复性RSD为3.98%,中间精密度RSD为3.12%，加样回收率为93.63%(RSD为3.98%),溶液稳定性在8h以内可保持稳定(RSD为1.47%),该方法耐用性较好。

经测定，甘草中毛蕊异黄酮葡萄糖普含量为0.0045~0.0161%，保元汤颗粒(含有辅料,6g/袋)中为87.98-97.46^・g"。

结论本研究所建立的方法简便，结果准确可靠，适用于保元汤颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖昔的测定，为建立保元汤质量标准提供依据。

此外，本研究首次对甘草中毛蕊异黄酮葡萄糖著进行了鉴别及含量测定，为甘草及其制剂质量标准深入研究奠定基础。

关键词：保元汤颗粒;毛蕊异黄酮葡萄糖普;甘草;HPLC法
中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号：1007-2349(2019)08-0069-07
Content Determination of Calycosin Isoflavone Glucoside in Baoyuantang Granules
YUAN Ling-ling,QIAN Ru-gui,DING Li-na,11Xin-feng
(Kunming Bangyu Pharmaceutical Ca,ltd.,Kunming650211,China)
[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for the determination of calycosin isoflavone glucoside in Baoyuantang granules. Methods:According to the method specified in the Chinese Pharmacopoeia,Agilent Eclipse plus 4.6mm x250mm)was taken as chromatographic column and acetonitrile(A)—0.2%formic acid solution(B)as mobile phase,with gradient elution(0-20min,15% ~40%A；20~25min,40%A),flow rate 1.0mL/min,column temperature25°C,and detection wavelength260nm.Results:The method showed that calycosin isoflavone glucoside had a good linear relationship in the range of25.23to504.5ng(T?2=0.9995).The de­tection method had good specificity and no interference.The precision RSD was0.26%and the reproducible RSD was3.98%,and the in­termediate precision RSD is3.12%.The sample recovery rate was93.63%(RSD is3.98%),and the solution stability could be kept stable within8h(RSD is1.47%).The method had better durability.The content of calycosin isoflavone glucoside in the licorice was de­termined to be0.0045—0.0161%,and that in the Baoyuantang granules(containing excipients,6g/bag)was87.98~97.46(ig•g-1. Conclusion:The method established in this study is simple,accurate and reliable and suitahle for the determination of calycosin isoflavone glucoside in the Baoyuantang granules,and provides a basis for establishing the quality standard of Baoyuantang.In addition,the study was the first to identify and determine the content of calycosin isoflavone glucosides in licorice and lay a foundation for further research on the quality standards of licorice and its preparations.
[Key words]Baoyuantang granules,calycosin flavonoid glucoside,licorice,HPLC method
作者简介:袁玲玲(1985-)，女，工程师,主要从事药物制剂工程和质量标准研究。

△通信作者:钱如贵,E-mail：c[rg99@
塞米松组MDA含量降低明显(P<0.01)；但对MDA含量的影响，黄茂煎液组、黄茯总昔组之间没有统计学意义(P>0.05),由此提示中药黄茂可以降低模型肺纤维化大鼠肺组织MDA的含量，有效清除MDA对肺纤维化的侵害，增强肺纤维化大鼠的抗氧化能力，从而达到防治肺纤维化的疗效。

参考文献：
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京:南京中医药大学,2009.
[5]张小莉，杨军.壮骨止痛方对骨质疏松大鼠血清BGP、TRAP、SOD
含量的影响[J].云南中医中药杂志,2018,39(9):71-73.
(收稿日期：2019-05-09)。