p27蛋白及细胞凋亡指数在慢性胃病及胃癌患者胃黏膜中的表达及临床意义

p27蛋白及细胞凋亡指数在慢性胃病及胃癌患者胃黏膜中的
表达及临床意义
刘润;高海燕;韩淑琴;刘俊霞;刘培茹;杨春燕
【摘要】目的研究慢性胃病及胃癌患者胃黏膜中p27蛋白及细胞凋亡指数(AI)的表达水平,探讨p27蛋白及AI的表达与胃癌演变的关系.方法选择消化科门诊胃镜检查患者黏膜活检标本共155例,其中慢性非萎缩性胃炎32例、慢性萎缩性胃炎
25例、肠上皮化生30例、非典型增生32例、胃癌36例.采用免疫组织化学SP
法检测慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生及胃癌组患者胃黏膜中p27蛋白与AI的表达水平并进行临床分析.结果 P27蛋白阳性染色呈
黄色或棕黄色颗粒,定位于细胞核,在胃癌组织浅表部位着色相对较强,而深部着色较弱.随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的
演变规律,P27蛋白表达水平呈现逐级减低,两两组间比较差异有统计学意义
(P<0.05).凋亡细胞阳性染色定位于细胞核内,浓缩的核质紧贴于核膜或核质呈现均匀染色,其周围无炎性反应,随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变规律,AI在前3个阶段呈现逐级升高,至肠上皮化生最高,
之后的2个阶段逐级下降,慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生两两
组间比较差异无统计学意义(P>0.05),肠上皮化生、非典型增生与胃癌两两组间差
异有统计学意义(P<0.05).胃黏膜P27蛋白表达水平与非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌疾病类型呈负相关(r=-0.976,P<0.01),AI表达水平与上述疾病类型无相关性(r=0.060,P>0.05).P27蛋白表达水平及AI均与年龄、性别、肿瘤部位及大小无相关性(P>0.05).结论 P27蛋白在胃黏膜中的表达水平及细胞凋亡与慢性胃病、胃癌前病变、胃癌的发生发展有关,其在胃癌的演变过
程中起着重要的作用.%Objective To study the expression of p27 protein and
apoptosis index in gastric mucosa of patients with chronic gastric diseases and patients with gastric cancer, and to explore the relationship between the expression of p27 protein in gastric cancer and the evolution of AI. Methods A total of 155 mucosal biopsy specimens including 32 cases of chronic nonatrophic gastritis, 25 cases of chronic atrophic gastritis, 30 cases of intestinal metaplasia, 32 cases of atypical hyperplasia and 36 cases of gastric cancer from outpatients were enrolled in the study. The expression levels of p27 protein and apoptosis index ( AI) were detected by immunohistochemical SP method. Results Yellow or brown granules were located in the nucleus in gastric cancer tissues, with relatively weak staining in superficial layer and relatively strong staining in deeper layer. The expression levels of P27 protein were gradually decreased with the progression of disease. There were significant differences between the groups each other (P<0. 05). The positive staining of apoptotic cells were located in the nucleus, with condensed cytoplasm against the nuclear membrane or stained evenly, without inflammatory reaction around. With the progression of disease ( chronic nonatrophic gastritis, chronic atrophic gastritis, intestinal memplasia, atypical hyperplasia, gastric cancer) , AI was increased gradually in the first three stages, then decreased gradually in the last stages, and there were no significant differences between the first three groups each other (P > 0. 05),however, there were significant differences between the last three groups each other (P<0. 05). In addition, the expression of p27 protein in gastric mucosa of the patients was negatively related to the type of disease (r=0. 976,P<0. 01). However there
was no correlation between the expression levels of AI and the type of disease (r=0. 060,P>0. 05),moreover, the expressions levels of p27 protein and AI were not correlated with patient's age, gender, the location and size of the tumor (P>0. 05). Conclusion The expression levels of P27 protein and cell apoptosis are related with the pathogenesis and development of chronic gastric diseases, gastric precancerous lesions and gastric cancer, which play an important role in the evolution of gastric cancer.
【期刊名称】《河北医药》
【年(卷),期】2018(040)011
【总页数】4页(P1642-1645)
【关键词】细胞凋亡指数;p27;慢性胃病;早期胃癌
【作者】刘润;高海燕;韩淑琴;刘俊霞;刘培茹;杨春燕
【作者单位】050011 河北省石家庄市第一医院;050011 河北省石家庄市第一医院;050011 河北省石家庄市第一医院;050011 河北省石家庄市第一医院;050011 河北省石家庄市第一医院;050011 河北省石家庄市第一医院
【正文语种】中文
【中图分类】R735.2
与胃癌发展相关的疾病被称为“胃癌前病变瀑布”，这是一个动态过程，如萎缩性胃炎、肠上皮化生和不典型增生，独立的流行病学调查和动物实验已经证实癌前病变发展为胃癌的过程，且发现0.1%萎缩性胃炎，6%的肠上皮化生可进展为胃癌
[1]。

目前临床工作中多采用内镜检查、血清学指标、呼气样本检测等方法对胃癌
进行筛查[2-4]。

恶性肿瘤的发生是多种因素共同作用的结果，抑癌基因的减低或
缺失以及细胞凋亡的减少是其发生发展的2个重要因素，p27是抑癌基因的一种，细胞凋亡指数(AI)是细胞凋亡的重要指标。

研究发现，p27是预测胃癌患者预后的独立因素，且p27低表达可能导致胃癌进展或转移[5,6]。

AI被应用于肺癌、口腔癌等肿瘤的预后评价[7,8]。

本研究通过检测慢性胃病及胃癌患者胃黏膜组织中
p27的表达及细胞凋亡指数，探讨两者与胃癌发生发展的关系，为早期发现胃癌
及在胃癌前病变阶段进行预防干预提供依据。

1 资料与方法
1.1 一般资料收集我院2010年1月至2013年6月消化科门诊胃镜检查患者黏膜活检标本共155例，其中慢性非萎缩性胃炎32例，慢性萎缩性胃炎25例，肠上皮化生30例，非典型增生32例，胃癌36例。

所有患者检查前未经过任何治疗，均无肿瘤家族史。

胃癌患者发病部位：胃窦22例，胃小弯5例，贲门6例，胃角3例；肿瘤大小≤4 cm 20例，>4 cm 16例。

5组性别比、平均年龄等比较，差
异无统计学意义(P>0.05)。

见表1。

表1 5组一般资料比较类别性别[例(%)]男女平均年龄(岁,x±s)慢性非萎缩性胃炎(n=32)24(75.0)8(25.0)56±12慢性萎缩性胃炎(n=25)19(76.0)6(24.0)55±10肠
上皮化生(n=30)22(73.3)8(26.7)56±11非典型增生
(n=32)25(78.1)7(21.9)54±13胃癌(n=36)27(75.0)9(25.0)56±10 χ2(F)值
0.20780.20 P值0.99500.9381
1.2 方法与试剂采用HE染色明确患者分组，免疫组织化学SP法染色检测p27蛋白在胃黏膜中的表达水平，TUNEL法检测细胞凋亡指数，P27多克隆抗体、S-P
试剂盒及DAB显色剂均使用福州迈新生物技术有限公司产品，TUNEL试剂盒为
德国hringer Mannheim公司产品。

1.3 结果判定 P27蛋白以细胞核出现黄色或棕黄色颗粒为阳性标准，在每张切片随机检测5个视野(倍数×400)，计数200个细胞，计算阳性细胞所占的百分率，作为该项指标的阳性表达率。

TUNEL检测仪细胞核内出现棕黄色或综合素质物质为阳性凋亡细胞，随机取5个高倍视野(倍数×400)，计数200个细胞，计算阳性细胞所占的百分率，作为该项指标的阳性表达率。

1.4 统计学分析应用SPSS 18.0统计软件，计量资料以表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用q检验，两个指标间的关系采用直线相关进行分析，
P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 P27蛋白在慢性胃病、胃癌前病变及胃癌胃黏膜组织中的表达及规律 P27蛋白阳性染色呈黄色或棕黄色颗粒，定位于细胞核，极个别病例中在细胞核周围紧邻细胞核胞浆处也可见阳性着色；在胃癌组织浅表部位着色相对较强，而深部着色较弱。

随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变规律，P27蛋白表达水平呈现逐级减低，两两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

见图1、2，表2。

图1 胃癌患者胃黏膜(HE×10)
图2 胃癌患者胃黏膜 P27蛋白(SP×20)
2.2 细胞凋亡在慢性胃病、胃癌前病变及胃癌胃黏膜组织中的表达及规律凋亡细胞阳性染色定位于细胞核内，浓缩的核质紧贴于核膜或核质呈现均匀染色，其周围无炎性反应，阳性细胞单个散在分布或簇状分布。

随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变规律，AI在前3个阶段呈现逐级升高，至肠上皮化生最高，之后的2个阶段逐级下降，慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生两两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，肠上皮化生、非典型增生与胃癌两两组间差异有统计学意义(P<0.05)。

见图3，表2。

2.3 P27蛋白及AI在慢性胃病、胃癌前病变及胃癌胃黏膜组织中的表达相关性胃黏膜P27蛋白表达水平与非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌疾病类型呈负相关(r=-0.976，P<0.01)，AI表达水平与上述疾病类型无相关性(r=0.060，P>0.05)。

见图4～6。

图3 胃癌患者胃黏膜细胞凋亡(SP×20)
表2 慢性胃病及胃癌患者胃黏膜组织中p27表达及细胞凋亡指数指标慢性非萎缩性胃炎(n=32)慢性萎缩性胃炎(n=25)肠上皮化生(n=30)非典型增生(n=32)胃癌(n=36)F值P值
P2741.04±6.9428.29±6.18*15.72±3.64*#11.27±3.06*#△3.95±2.58*#△☆438. 29≤0.05AI
7.94±1.5316.45±3.0724.37±2.4614.06±1.783.94±2.03141.38≤0.05注：与慢性非萎缩性胃炎比较，*P<0.05；与慢性萎缩性胃炎比较，#P<0.05；与肠上皮化生比较，△P<0.05；与非典型增生比较，☆P<0.05
图4 5组疾病类型与p27相关性分析
图5 5组疾病类型与AI相关性分析
2.5 P27蛋白表达水平及AI与其他临床资料的关系 P27蛋白表达水平及AI均与年龄、性别、肿瘤部位及大小无相关性(P>0.05)。

见表3。

图6 5组间胃黏膜P27蛋白与PCNA表达水平
表3 P27蛋白表达水平及AI与其他临床资料的关系指标性别年龄肿瘤大小肿瘤部位p27 Pearson 相关性0.098-0.00130.2280.108 显著性(双
侧)0.5690.9390.1800.532AI Pearson 相关性0.2060.0350.014-0.079 显著性(双侧)0.2270.8370.9360.646
3 讨论
研究表明，胃癌前病变患者患癌风险随病变部位严重程度增加而增加，同时也证实
了Correa级联反应的正确性。

即首先是正常黏膜组织通过微小黏膜病变发展为胃炎，萎缩性胃炎和肠上皮化生，最终发展成异型增生[9]。

Song等[10]研究发现，微小病变人群、胃炎人群、萎缩性胃炎、肠上皮化生人群和异型增生的人群的每年胃癌标准化发生率分别为1.0%、1.5%、1.8%、2.8%、3.4%和6.5%，20年胃癌风险大致为1/256、1/85、1/50、1/39、1/19，Cox回归分析显示，与正常人群相比，胃癌风险随着Correa级联反应进展而升高，危害比从黏膜微小病变人群的1.8%到异型增生人群的10.9%。

研究发现，目前胃癌有年轻化趋势，且≤40岁胃癌占全部胃癌的10%[11，12]。

因此加强胃癌前病变的检测至关重要。

P27主要抑制Cyclin-CDK复合物活性,在细胞周期G1/S 的重要转换中若P27 蛋
白表达水平下降,则无法阻断细胞分裂及增殖,会引起肿瘤形成[13]。

大量研究表明
组织中P27Kip1蛋白下降可导致细胞周期蛋白-CDK2 复合物活性增加,从而可促
进细胞不断增殖,最终演变成肿瘤[14]。

大多数学者实验结果证明在胃癌进展过程中,P27 表达逐渐下降从而使癌细胞分化越低、恶性程度越高、淋巴结转移更快。

本研究发现，P27蛋白阳性染色呈黄色或棕黄色颗粒，定位于细胞核，在胃癌组
织浅表部位着色相对较强，而深部着色较弱。

随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变规律，P27蛋白表达水平呈现逐级
减低，两两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

胃黏膜P27蛋白表达水平与非
萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌疾病类型呈负相关(r=-0.976，P<0.01)，此外，本研究还发现P27蛋白表达水平与年龄、性别、肿
瘤部位及大小无相关性(P>0.05)。

研究表明，胃癌普遍存在细胞凋亡障碍的现象，胃癌细胞丧失自发性凋亡的能力，这是肿瘤无限生长的重要原因之一[15]。

近年来p27蛋白与细胞凋亡的关系各家报道不甚相同，多数研究认为，p27蛋白可以启动、诱导细胞凋亡，而且这一作用具有普遍性。

本研究显示凋亡细胞阳性染色定位于细胞核内，浓缩的核质紧贴于核膜或核质呈现
均匀染色，其周围无炎性反应，随着慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变规律，AI在前3个阶段呈现逐级升高，至肠上皮
化生最高，之后的2个阶段逐级下降，慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠
上皮化生两两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，肠上皮化生、非典型增生与
胃癌两两组间差异有统计学意义(P<0.05)，AI表达水平与上述疾病类型无相关性(r=0.060，P>0.05)。

这表明在各种癌前病变中存在着活跃的细胞凋亡，随着胃黏膜细胞恶性转化程度的升高，胃黏膜癌变过程中可能出现细胞凋亡的抑制，其原因可能是在肠上皮化生之前胃黏膜已经出现异常增殖，而机体试图通过增加细胞的凋亡来保持细胞增殖与凋亡的动态平衡，避免细胞过度增殖进一步发展，而肠上皮化生之后的胃黏膜细胞进一步增殖，机体已无法将过度增殖的细胞完全清除，因而发生增殖凋亡失衡，胃癌形成。

研究表明，胃癌是由慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生演变而来[16]，胃癌的发生发展与细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂p27及细胞凋
亡减少或缺失有关，检测其在胃黏膜癌前病变中的表达水平有助于早期发现胃部恶性肿瘤，并在胃癌癌前病变阶段进行预防干预，但其相关机制还有待于进一步研究确认。

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