FDA检测沙门氏菌

田鸡腿
将15对田鸡腿放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没。如果单个腿估计平均重 在25g或以上，则只需检查15对的每对中的一条腿。把袋放入大塑料烧杯内或其它合 适的容器中，在机械荡器上震荡15min，以4cm（1-1/2in）机械振荡100次/分钟。从 袋中倾倒出乳糖肉汤于另一个灭菌塑料袋内。加更多的乳糖肉汤，使总量为3500mL。 充分混匀，于室温下静置60分钟。必要时调节pH值至6.8±0.2。再把装有乳糖肉汤 的塑料袋放入塑料烧杯或其它合适的容器内，于35℃培养24±2小时。
明胶
无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。 加入225mL灭菌的乳糖肉汤和5mL5%木瓜蛋白酶水溶液。混合均匀，盖紧瓶盖在室温 下静置60分钟。转动混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。将瓶盖 旋松1/4转，置35℃培养24±2小时。 肉、肉代用品、肉副产品、动物产品、腺体制品和粗粉（鱼，肉，骨） 无菌操作称取25g样品放入灭菌的搅拌器中。加入225mL灭菌的乳糖肉汤，搅拌2分 钟。再无菌操作转移已搅拌的混合物到灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合 适的容器内。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。如果混合物为粉状，研磨过或已粉碎 的，则不用搅拌。不需要搅拌的样品，加入乳糖肉汤，并充分混匀；盖紧瓶盖在室 温下静置60分钟。旋动使充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。 总计加入2.25mL已蒸过（15分钟）的Tergitol Anionic 7 或Triton X－100 。控 制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。实际用量取决于试验材料的成分； 分析粉状腺体制品，不需要用表面活性剂。将瓶盖旋松1/4转后，将样品混合物置 35℃培养24±2小时。
橙汁（巴氏灭菌法和非巴氏灭菌法），苹果酒（巴氏灭菌法和非巴氏灭菌 法），苹果汁（巴氏灭菌法） 无菌操作称取25g样品，加入无菌的，带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其 他合适的容器内。加入225mL灭菌通用前增菌肉汤（Universal preenrichment broth）。充分混匀，于室温静置60分钟。不调pH值。于 35℃培养24±2小时。 猪耳和其他狗咀嚼物 放1片（样品小时2～3片）到无菌塑料袋中，把袋放入大塑料烧杯内或其它 合适的容器中。加灭菌乳糖肉汤浸没样品。充分混匀，于室温静置60分钟。 必要时用pH试纸调置6.8±0.2，加Tergitol Anionic 7 或Triton X－100 至1%。控制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。于35℃培养24±2 小时。
鲜蛋
A、含壳蛋：用硬刷子在水流下刷洗蛋。把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸钠 （SDS）的200ppm氯离子溶液中浸泡30min。加8mL 5.25%次氯酸钠到含1g SDS的992mL蒸馏水中，制备200ppm cl-/0.1%SDS溶液。这种消毒剂需在 使用前临时制备。无菌操作打开蛋到无菌容器中，彻底混合蛋黄和蛋白。 无菌操作称取25g蛋黄到灭菌的500mL锥型瓶或其他合适容器内。加225mL 含硫酸亚铁的胰胳胨（胰化物）大豆肉汤（TSB），并振荡充分混匀。在 室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节 pH值至6.8±0.2，置35℃培养24±2小时。
全脂奶粉 按上述A脱脂乳粉的方法进行，只不过不允许将多份检验单位按比例合并检验。
酪蛋白 无菌操作称取25g样品，加入无菌均质杯中，加225mL灭菌乳糖肉汤（对酪蛋白钠）或 通用前增菌肉汤（Universal preenrichment broth） （对皱胃酪蛋白）到样品中 并匀质2分钟。无菌操作，把已匀质的混合物转移到灭菌，带螺旋帽的500mL广口瓶或 其他合适的容器内。盖紧盖子在室温下静置60分钟。振摇使充分混匀，用试纸测定pH 值。必要时调节pH值至6.8±0.2。在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。旋松瓶盖 约1/4圈后，置35℃培养24±2小时。 豆粉 按上述酪蛋白的方法进行，只不过不允许将多份检验单位按比例合并检验。 含蛋制品（面条，蛋卷，通心粉，意大利面条）、干酪、生面团、调制色拉（火腿， 蛋，鸡肉，金枪鱼，火鸡）、新鲜的、冷冻的、或干的水果和蔬菜、果仁、甲壳类动 物（小虾，蟹，小龙虾，LANGOSTINOS，龙虾）和鱼 检测前冷冻样品最好不要解冻，如果冷冻样品必须软化以取其检测部分，则要在持续 搅拌并带有自动调温器控制的45℃水浴内15分钟内解冻。或者在2-5℃18小时内进行。
糖果与糖衣（包括巧克力） 无菌操作称取25g样品放入灭菌的搅拌容器中。加入225mL灭菌的再造脱 脂奶粉 ，搅拌2分钟。再无菌操作转移搅拌过的混合物到灭菌带螺旋帽 的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。 转动混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。再加入 0.45mL1%煌绿染液混匀，将瓶盖旋松1/4转后培养。
干酵母 无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL），或其他合适的 容器内。加入225mL灭菌胰酪胨（胰化）大豆肉汤，充分混匀使酵母形成均匀悬 液。盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。必 要时，调节pH值至6.8±0.2，在测定最终pH前要混合充分。旋松瓶盖约1/4转后， 置35℃培养24±2小时。 食品上霜和上顶用的混合物
椰子
无菌操作称取25g样品放入灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适 的容器内。加入225mL灭菌的乳糖肉汤，振摇后，盖紧瓶盖在室温下静 置60分钟，再振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至 6.8±0.2。总计加入2.25mL已蒸过（15分钟）的Tergitol Anionic 7 或Triton X－100。这些表面活性剂限制使用最小量，使之刚刚起泡沫 即可。 Triton X－100大约2或3滴。旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养 24±2小时。
无菌操作称取25g样品，放入灭菌，带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。加 入225mL营养肉汤并充分混合。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。振摇使其充分混 匀，用试纸测定pH值。必要时，调节pH值至6.8±0.2。旋松瓶盖约1/4转后，置 35℃培养24±2小时。
调味品
A、黑胡椒、白胡椒、芹菜籽或者干辣椒粉、小茴香、红辣椒、欧芹片、迷叠香、 芝麻、麝香草、蔬菜片：无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶或其 他合适的容器中。加入225mL灭菌胰酪胨大豆（TSB）肉汤，充分混匀，盖紧瓶盖 于在室温下静置60分钟。旋动混匀，用试纸测定pH值。必要时，调节pH值至 6.8±0.2。旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时。 B、洋葱片、洋葱粉、大蒜片：无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口 瓶或其他合适的容器中。将样品于含K2SO3的TSB胰酪胨大豆肉汤（1000mLTSB加5g K2SO3使K2SO3的最终的浓度为0.5%）中进行前增菌。添加K2SO3于肉汤中。分装 225mL于500mL锥形瓶中，经121℃高压灭菌15分钟。灭菌后无菌操作测定容量，必 要时再调整至225mL。将225mL含K2SO3的无菌TSB加入样品中，充分混匀。接下去同 上。 C、牙买加胡椒、桂皮、丁香及薄荷：目前还没有方法可以中和这四种香料的毒性。 将香料稀释至无毒的程度，再进行菌检。检验牙买加胡椒，桂皮和薄荷时，样品 与肉汤比例为1∶100，而丁麝香样品与肉汤比例为1∶1000。检查叶状的调味品， 因遇到脱水的制品，可吸收肉汤这一实际困难，其样品与肉汤比例要大于1∶10。 检查这些调味品按A描述的方法进行，保持推荐的样品与肉汤的比例。
FDA方法中样品处理
干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脱 脂奶）、粉状调制食品（蛋糕，甜饼，炸面圈，饼干和面包）、婴儿食品、 口食或软管进食含蛋的食品 检测前冷冻样品最好不要解冻，如果冷冻样品必须软化以取其检测部分，则 要在持续搅拌并带有自动调温器控制的45℃水浴内15分钟内解冻。或者在25℃18小时内进行。 25g样品，加入225mL灭菌乳糖肉汤。如果制品是粉状， 加入约15mL灭菌乳糖肉汤，用灭菌玻璃棒，匙或灭菌压舌器搅拌，使成均匀 悬液。再加3份乳糖肉汤10mL，10mL，190mL，使总量为225mL。充分搅拌，直 到样品完全悬浮没有团块为止。盖紧瓶盖在室温静置60min。振摇使充分混匀， 用试纸测定pH值。必要时用灭菌的1NNaOH或1NHcl调节pH至6.8±0.2。在测定 最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。然后将瓶盖旋松约1/4圈，置35℃培养 24±2小时。
兔胴体 取兔胴体放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没，把袋放入大塑料烧杯内或其 它合适的容器中，振荡，于室温静置60分钟。 混匀，如果需要，用pH试纸调至 6.8±0.2，于35℃培养24±2小时。 瓜尔豆胶 无菌操作称取25g样品到灭菌烧杯（250mL）或其他合适容器中。制备过滤除菌的 1.0%纤维素酶溶液（加1g纤维素酶到99mL无菌水中），置于150mL瓶中。（纤维素酶 溶液在2· -5℃可保存最长2周时间）。加入225mL无菌乳糖肉汤和2.25mL无菌1%纤维 素酶溶液于500mL无菌带螺旋盖的广口瓶或其他合适容器。用磁力搅拌器剧烈搅拌酶 /肉汤混合物时，通过无菌玻璃漏斗迅速倒入25g待检样品。旋好瓶盖，室温下静置 60分钟，无须调pH值。旋松瓶盖，35℃培养24±2小时。
B、液全蛋（均状）：无菌操作称25g置于无菌的500mL锥形烧瓶或其 它合适容器中。加225mL含硫酸亚铁的TSB并振荡充分混匀。按上面所述 继续。
C、煮硬的蛋（鸡蛋，鸭蛋或其他蛋类）：无菌剥离蛋壳。无菌压碎 蛋白和蛋黄。称取25g到无菌500mL锥型瓶或其他合适容器中。加 225mLTSB并旋转充分混匀，按上面所述继续。
无菌操作称取25g样品，加入灭菌的均质器中。加入225mL灭菌的乳糖肉汤并均质 2分钟。再无菌操作转移已均质的混合物到无菌的带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其 他合适的容器内。盖紧瓶盖，于在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀，用试纸测 定pH值。必要时调节pH值至.8±0.2。充分混匀。旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养 24±2小时。
脱脂干奶粉 A、速溶：无菌操作称取25g样品，加入灭菌烧杯（250mL）或其它合适容器内。 经灭菌玻璃或纸质（用带卷好以备高压灭菌）漏斗，往灭菌的500mL锥形烧瓶 或其它合适容器中（装有225mL煌绿水），缓缓倾注25g检测单位，使其覆盖 在煌绿水表面。也可将多份25g检验单位按比例 倒入相应份数的煌绿水表面。 按每1000mL灭菌蒸馏水中加1%煌绿溶液2mL配置煌绿水。前增菌培养基的容器 静置60±5分钟。松松地盖上容器盖，不需要混合或调节pH值，于35℃培养 24±2小时。 B、非速溶：按上述A脱脂乳粉的方法进行，只不过不允许将多份检验单 位按比例合并检验。
食用染料与食用色素 pH6.0或以上的染料（10%悬浮液），按上述干全蛋方法处理。沉淀染料或pH低于 6.0的染料，无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他 合适的容器内。加入225mL不含煌绿染料的四硫磺酸盐肉汤混匀。盖紧瓶盖在室温 下静置60分钟，用pH计调节pH值至6.8±0.2。再加入2.25mL0.1%的煌绿溶液，充分 旋动混匀。旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时。
非沙门氏菌排除需要的条件 试验
1. 尿素酶 2. 吲哚试验 和 多价鞭毛（H）抗原 或 吲哚试验 和 Spicer-Edwards 鞭毛试验 阳性(紫红色) 阳性(液面紫红色) 阴性 (不凝集) 阳性(液面紫红色) 阴性(不凝集)
结果
3. 赖氨酸脱羧酶 和 KCN 肉汤 4. 酚红乳糖肉汤 5. 酚红蔗糖肉汤 6. KCN 肉汤， VP试验 和 甲基红试验