一种简便的热启动PCR方法扩增金荀菌nuc基因
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Ａｃｄ ｓ ａ ｃ ．２ ０ ｉ ｓ Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ０ ３，Ｖｏ ．３ ， Ｎｏ １ １ ．２１６ ３ — １ ７ ：１ ９ ６ ４ ．
试 验 研 究
实验室饲养昆明系 小 自鼠死亡原因的诊断
张 明君
（ 青海省 祁连 县野 牛沟 乡兽 医站 ，祁 连 ８ ４ ０ １ ０） ０
摘 要： 通过 对实验 室饲养非正常病死亡昆明 系小白鼠的解剖 、 病原分 离及 实验 室相 关试验 ， 确定小 白鼠死亡是 由致
病 性 大肠 杆 菌 引起 的 。
１１ 病料采集 ．
白 鼠肝 脏 。
１ 培养基 普通琼脂斜面、 ． ２ 营养肉汤、 均为 自 制培养基。
１ 药敏 纸 片 购 自杭州 天 和 微 生 物有 限公 司 。 ． ３
１ 实验动 物 ． ４
２ 方 法
健康 昆 明系小 白鼠 ４只 （４ １ｇ ， １ ６ ） 购于青
海 地方 病 预 防控 制 所 。 ２１ 镜 ． 检 病 料 触 片 、 特 氏染 色 。 瑞
３ 生化试验结果见表 １ ． ４
表 １ 生 化试 验 结 果
阿 拉 伯 糖 山梨 醇 Ｈ Ｓ 尿素 葡 乳 糖 麦芽糖 甘 露醇 蔗 糖 果糖 ＃ 睹
２ 分 离培养 ． ２
将 无菌采 集 的小 白鼠肝脏 接种 到普 通斜
注：“ ” ＋ 表示 阳性 ，“ ” 一 表示 阴性 ３５ 药敏试验 结果 ． 该菌对对 复方新诺 明（ ． ｍ） 乙酰螺 ２ｃ 。 ２
关键 词 ： 白 鼠 ； 肠杆 茵 小 大 Ｄ０Ｉ ０３ ６ ／ ． ： ．９ ９Ｊ Ｉ １ ＳＳＮ．６ １ ０ ７．０ ２ ０ ．２ １ ７ —６ ２ ２ １ ． ８０ ８
１ 材 料
３ 细菌培养 普通斜面上为圆形隆起 、边缘整齐的灰白 ． ２
无菌采集实验室饲养非正 常死 亡昆明系小
色菌落 ， 普通 肉汤中度浑浊 。 ３ 动物试验结果 ． ３ 腹腔注射 ５倍稀 释肉汤培养物 的 ２只 小 白鼠均在 ２ ｈ死亡 ，０ ４ １ 倍稀 释肉汤培养物 的小 白鼠死亡 ２ 只 。５ ０倍稀释 肉汤培养物的小 白鼠健活 ， 剖检死亡小 白鼠， 肝脏触 片 ， 特氏染色后 ， 瑞 镜检可见到与病料一致 的小杆菌。
『 ｌ ａ ｄｅ Ｖ ｅ ａ． ｏ Ｓａ Ｃ ｉ ｅｔ ａ ｔ ａ ｂｅ ４ ｅ ｎ ｒ ． ｔ１ Ｈ ｔ ｔ ｔＰ Ｒ ｗ ｔ ｈ ａ— ｃ ｖ ｔ ｌ ］Ａ ｘ ｒ ｈ ｉ ａ
ｐｉ ｒ ｏｅ ａｐｏｃ ｏ ｍ ｒｖｄ ｐ ｒ ｒ ａｃ ． Ｊ ｒ ｓ ｍｅ ：ａｎｖｌ ｐ ｒａｈ ｆ ｉ ｐｏｅ ｅ ｏｍ ｎ ｅ ［ ． ｒ ｆ ］
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３ 结 果
旋霉素 ， 氧氟沙星 （． ｍ）氯霉素 （．ｃ 、 ２２ ， ｃ ２ ｍ）头孢氨苄 （．ｃ ２ ２ ｍ） ０
等药物敏感 、 卡那 霉素（ ． ｍ）庆 大霉素（ ． ｍ）链 霉素 对 １ｃ 、 ５ １ｃ 、 ３ （ ． ｍ） １ ｃ 等药物较敏感 。 ２
４ 诊 断
根据 流行病学 调查 、 临床症状 、 病理剖检 及实验室检 测 变化确诊为大肠杆菌病 。
ｂ ｄｅ ｇ ｉｓ Ｋ Ｄ Ｄ Ａ Ｐ ｌｍ ｒｓ ． Ｊ ｙ ｔｅ ｃ Ｃ ｅ ｏ ｉ ａ ａ ｔ Ｏ Ｎ ｏ ｅａ ｅ Ｊ Ｓ ｎｈ ｔ ｈ ｍ ｓ ｎ ｙ 【． ｉ
ｐ ｌ ｅａｅ ｐｏｉｅ ａｈｔｓ ｒ ｆｒＰ Ｒ ［．Ｎ ｃ ｉ ｏ ｍ ｒｓ ｒｖｄ ｏ ｔ ｔ ｏ Ｃ ．Ｊ ｕｌ ｃ ｙ ａ ］ ｅ
面 ，７ ３ ℃培养 ２ ｈ 挑取 圆形隆起 ， ４， 边缘整齐 的灰 白色菌落至 普通平板上进行纯培养 。 ２ 动物试验 ． ３ ２４ 药敏试验 ． 取 肉汤培养物做 ５ 、Ｏ倍及 １０倍稀 释 ， 倍 １ ０ 将纯 化好 的细菌用灭菌接种棒均匀涂布于 分别腹腔注射体重 １ ～ ６ ４ １ｇ的昆明系小 白鼠各 ０２ ／ ． ｍＬ 只。 整个普通琼脂平板 ， 经室温干燥 ３ ５ ｉ ， － ｍｎ后 每块平板贴等距 离 间隔贴 ５片药敏纸片 ，７Ｃ ３ ￣培养 ２ ｈ 记录结果 。 ４，
３１ 镜 ．
检
触 片， 瑞特 氏染色后 ， 镜检呈小杆菌。
引物与模板结合的效率 。 本文采用低熔 点琼脂糖 在室温下为凝 固状态 ， 当加热 到
复性温度 以上 时 （ 般品种的复性温度是 ５ ℃）才开始融 一 ５ 化 ， 其存在不影 响 Ｐ Ｒ反 应的进行的特性 ， 且 Ｃ 使其包 被 Ｔ ｑ ａ 酶， 有效避免低温度 时的非特异性扩增 。 本文实验证 明， 该方 法扩增效果与常规 Ｐ Ｒ无异 ，而包埋 的 Ｔ ｑ酶可于便于存 Ｃ ａ 放使用 ， 不易污染 ， 有利于试 剂的合理使用 。
２ ０８． ６：９ ０ １ ７ ８１ ．
【 ５ 】Ｈｉ ｓ ｉ ｚ ｇ ｃ ｉ ｔａ ｈ ｒｃ ｒ ａｉ ｎ ｐ ｌ ａ ｒ ｈ ｕ ｕ ｈ ，ｅ １ ｏ Ｍｉ ．Ｃ ａａ ｔｉ ｔ ｎ ａ ｄ Ａ ｐｉ ｅｚ ｏ ｃ
ｔｏ ｔ Ｈｏ Ｓａ ＰＣＲ ｆ Ｎｅ ｒ ｌｚｎ ｏ ｃｌｎ ｌ ｉｎ ｏ ｔ ｔｒ ｔ ｏ ｕｔａｉｉ ｇ Ｍ ｎｏ ｏ ａ Ａｎ ｉ ． ｏｄ ｓｎｉｖ ｕａｔ ｏ Ｔ ｑ Ｄ Ａ 】Ｍ ｌ ． ｔ１ Ｃ ｌ ｅ ｓｉ ｍ ｔｎｓ ｆ ａ Ｎ ｋ － ｔｅ
册 Ｎ ｃｅ ｃｄ ｅｅｒｈ ２ ０ ，Ｖ ｋ２ ， ｏ ２ ： ． ． ｕｌｉ Ａ ｉｓＲ ｓａｃ． ０ ０ ｏ ８ Ｎ ． １ ４ ｃ ９
试 验 研 究
实验室饲养昆明系 小 自鼠死亡原因的诊断
张 明君
（ 青海省 祁连 县野 牛沟 乡兽 医站 ，祁 连 ８ ４ ０ １ ０） ０
摘 要： 通过 对实验 室饲养非正常病死亡昆明 系小白鼠的解剖 、 病原分 离及 实验 室相 关试验 ， 确定小 白鼠死亡是 由致
病 性 大肠 杆 菌 引起 的 。
１１ 病料采集 ．
白 鼠肝 脏 。
１ 培养基 普通琼脂斜面、 ． ２ 营养肉汤、 均为 自 制培养基。
１ 药敏 纸 片 购 自杭州 天 和 微 生 物有 限公 司 。 ． ３
１ 实验动 物 ． ４
２ 方 法
健康 昆 明系小 白鼠 ４只 （４ １ｇ ， １ ６ ） 购于青
海 地方 病 预 防控 制 所 。 ２１ 镜 ． 检 病 料 触 片 、 特 氏染 色 。 瑞
３ 生化试验结果见表 １ ． ４
表 １ 生 化试 验 结 果
阿 拉 伯 糖 山梨 醇 Ｈ Ｓ 尿素 葡 乳 糖 麦芽糖 甘 露醇 蔗 糖 果糖 ＃ 睹
２ 分 离培养 ． ２
将 无菌采 集 的小 白鼠肝脏 接种 到普 通斜
注：“ ” ＋ 表示 阳性 ，“ ” 一 表示 阴性 ３５ 药敏试验 结果 ． 该菌对对 复方新诺 明（ ． ｍ） 乙酰螺 ２ｃ 。 ２
关键 词 ： 白 鼠 ； 肠杆 茵 小 大 Ｄ０Ｉ ０３ ６ ／ ． ： ．９ ９Ｊ Ｉ １ ＳＳＮ．６ １ ０ ７．０ ２ ０ ．２ １ ７ —６ ２ ２ １ ． ８０ ８
１ 材 料
３ 细菌培养 普通斜面上为圆形隆起 、边缘整齐的灰白 ． ２
无菌采集实验室饲养非正 常死 亡昆明系小
色菌落 ， 普通 肉汤中度浑浊 。 ３ 动物试验结果 ． ３ 腹腔注射 ５倍稀 释肉汤培养物 的 ２只 小 白鼠均在 ２ ｈ死亡 ，０ ４ １ 倍稀 释肉汤培养物 的小 白鼠死亡 ２ 只 。５ ０倍稀释 肉汤培养物的小 白鼠健活 ， 剖检死亡小 白鼠， 肝脏触 片 ， 特氏染色后 ， 瑞 镜检可见到与病料一致 的小杆菌。
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４ 诊 断
根据 流行病学 调查 、 临床症状 、 病理剖检 及实验室检 测 变化确诊为大肠杆菌病 。
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引物与模板结合的效率 。 本文采用低熔 点琼脂糖 在室温下为凝 固状态 ， 当加热 到
复性温度 以上 时 （ 般品种的复性温度是 ５ ℃）才开始融 一 ５ 化 ， 其存在不影 响 Ｐ Ｒ反 应的进行的特性 ， 且 Ｃ 使其包 被 Ｔ ｑ ａ 酶， 有效避免低温度 时的非特异性扩增 。 本文实验证 明， 该方 法扩增效果与常规 Ｐ Ｒ无异 ，而包埋 的 Ｔ ｑ酶可于便于存 Ｃ ａ 放使用 ， 不易污染 ， 有利于试 剂的合理使用 。
２ ０８． ６：９ ０ １ ７ ８１ ．
【 ５ 】Ｈｉ ｓ ｉ ｚ ｇ ｃ ｉ ｔａ ｈ ｒｃ ｒ ａｉ ｎ ｐ ｌ ａ ｒ ｈ ｕ ｕ ｈ ，ｅ １ ｏ Ｍｉ ．Ｃ ａａ ｔｉ ｔ ｎ ａ ｄ Ａ ｐｉ ｅｚ ｏ ｃ
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册 Ｎ ｃｅ ｃｄ ｅｅｒｈ ２ ０ ，Ｖ ｋ２ ， ｏ ２ ： ． ． ｕｌｉ Ａ ｉｓＲ ｓａｃ． ０ ０ ｏ ８ Ｎ ． １ ４ ｃ ９