多肽等电点与疏水性

多肽等电点与疏水性
一、氨基酸的等电点，该如何进行计算？
1、氨基酸是两性电解质，在碱性溶液中表现出带负电荷，在酸性溶液中表现出带正电荷，在某一定pH 溶液中，氨基酸所带的正电荷和负电荷相等时的pH,称为该氨基酸的等电点。

2、氨基酸等电点的计算
公式：pH=(pKn+pKn+1)/2
n:氨基酸（或多肽）完全质子化时带正电荷基团数
pK:解离基团的解离常数
等电点的计算步骤
先将氨基酸/多肽可解离基团的pK值自小到大按顺序排列
判断n值
判断氨基酸的分类
酸性氨基酸和中性氨基酸的完全质子化数n=1
碱性氨基酸的完全质子化数n=2
3、氨基酸等电点表
甘氨酸5.97
丙氨酸6.00
缬氨酸5.96
亮氨酸5.98
异亮氨酸6.02
苯丙氨酸5.48
丝氨酸5.68
苏氨酸6.16
酪氨酸5.68
半胱氨酸5.05
蛋氨酸5.74
脯氨酸6.30
色氨酸5.89
赖氨酸9.74
精氨酸10.76
组氨酸7.59
门冬氨酸2.77
谷氨酸3.22
门冬酰胺5.41
谷氨酰胺5.65
二、20种氨基酸的疏水参数见下表（高正值的氨基酸具有更大的疏水性，而低负值的氨基酸则更加亲水）：
Arg（R）-4.5
Lys（K）-3.9
Asn（N）-3.5
Asp（D）-3.5
Gln（Q）-3.5
Glu（E）-3.5
His（H）-3.2
Pro（P）-1.6
Tyr（Y）-1.3
Trp（W）-0.9
Ser（S）-0.8
Thr（T）-0.7
Gly（G）-0.4
Ala（A）1.8
Met（M）1.9
Cys（C）2.5
Phe（F）2.8
Leu（L）3.8
Val（V）4.2
Ile（I）4.5
多肽保存
多肽一般长期保存需要避光保存，并应保存在-20度以下，短期可以保存在4℃。

可以短时间以室温运输。

多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中时，在将它们暴露于空气之前，冷冻干燥多肽可以放于室温自然升温，这将使湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met or Trp的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽容易空气氧化，在封瓶前，氮气或氩气保护会降低氧化作用。

含Gln 或Asn的多肽比较容易降解，所有这些肽与不含这些有问题的简单肽相比，保存期要短。

多肽溶解
溶解多肽是非常复杂的事情，一般很难一下子确定合适的溶剂。

通常是先取一点试验，在没有确定合适的溶剂前千万不要全部溶解。

下列方法有助于您选择合适的溶剂：
(1)判定多肽的电荷特定，设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。

计算出将电荷数。

(2)如果净电荷数>0，多肽为碱性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上);如果多肽还不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。

(3)如果净电荷数<0，多肽为酸性，用水溶解;如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。

(4)如果净电荷数=0，多肽为中性，一般需要用有机溶剂如乙腈，甲醇或异丙醇，DMSO等溶解。

还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。