亚硒酸钠对糖尿病大鼠血小板聚集功能的影响

亚硒酸钠对糖尿病大鼠血小板聚集功能的影响
李萍;弥曼;杜洪霞;候进
【摘要】目的观察亚硒酸钠对糖尿病大鼠血小板聚集功能的影响.方法在以链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型上,测定血糖及二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板最大聚集率、血浆中血栓素A_2 (代谢产物为TXB_2)、前列环素(代谢产物为6-Keto-PGF_(1α))的含量.结果糖尿病大鼠的血糖、ADP诱导的血小板最大聚集率、血浆中TXB_2含量及TXB_2/6-Keto-PGF_(1α)比值明显高于正常组,血浆中6-Keto-PGF_(1α)的含量低于正常组.亚硒酸钠治疗后糖尿病大鼠的血糖降低,ADP诱导的血小板最大聚集率下降,血浆中TXB_2的含量降低,6-Keto-PGF_(1α)的含量升高,TXB_2/6-Keto-PGF_(1α)比值降低.结论亚硒酸钠能抑制糖尿病大鼠ADP诱导的血小板聚集,其机制与调节TXA_2/PGI_2平衡有关.
【期刊名称】《南方医科大学学报》
【年(卷),期】2010(030)001
【总页数】2页(P193-194)
【关键词】糖尿病;哑硒酸钠;血小板聚集;血栓素A_2;前列环素
【作者】李萍;弥曼;杜洪霞;候进
【作者单位】西安医学院基础医学部药理教研室,陕西西安710021;西安医学院基础医学部药理教研室,陕西西安710021;西安医学院基础医学部药理教研室,陕西西安710021;西安医学院基础医学部药理教研室,陕西西安710021
【正文语种】中文
【中图分类】R587.1
糖尿病血管并发症是糖尿病患者致死致残的最主要原因［1］。

血小板聚集性增强在糖尿病血管病变发生发展中具有十分重要的作用［2］。

因此，在糖尿病早期，有效的抗血小板治疗对于预防糖尿病血管病变的发生发展具有积极的临床意义。

糖尿病病人的血小板聚集性增强的机制目前尚不清楚。

有证据表明糖尿病病人的血小板聚集性增强可能与血小板内氧自由基代谢增强有关［2-3］。

硒作为具有抗氧化应激作用的微量元素，已被证明在糖尿病及其并发症中具有积极的效果［4-5］。

本研究观察亚硒酸钠对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型血小板聚集功能及血浆TXB2、6-Keto-PGF1α 的含量及 TXB2/6-Keto-PGF1α 比值的影响。

1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药品及仪器亚硒酸钠、链脲佐菌素（STZ）、二磷酸腺苷（ADP）（Sigma 公司，美国）；TXB2及6-Keto-PGF1α放免试剂盒（苏州大学医学院）；LG-PABER血小板聚集分析仪（日本日立公司）；血糖仪及血糖试纸（罗氏公司）；γ放射免疫计数仪（上海二六二厂）。

1.1.2 实验动物 SD大鼠由西安交通大学医学院实验动物中心提供，雌雄各半，体质量180～200 g。

1.2 方法
1.2.1 糖尿病动物模型的建立与分组 40只大鼠，适应性喂养1周，随机选取30只大鼠禁食12 h后建立糖尿病模型。

模型的建立参照文献［6］：链脲佐菌素溶于0.1 mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液（pH 4.5）中配成1%的溶液，以70
mg/kg体质量剂量一次性腹腔注射，72 h后尾静脉采血测血糖，1周后尾静脉取血测血糖，以血糖＞16.7 mmol/L确定为糖尿病大鼠模型，血糖＜16.7 mmol/L
者弃去。

成模大鼠随机分为糖尿病对照组和亚硒酸钠干预组，每组10只。

另10只大鼠给以等体积的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液腹腔注射，作为空白对照组，72 h后尾静脉采血测血糖，该组大鼠FBG均处于正常值范围（FBG＜6.0 mmol/L）。

N 组及DM组每日等量生理盐水灌胃，连续12周；DM-Se组每日以20 μg/kg亚硒酸钠灌胃，连续12周。

最终各组有大鼠10只。

1.2.2 动物麻醉及血样制备大鼠末次给药后，禁食12 h，尾静脉取血测血糖；用3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，颈总动脉插管取血6 ml，其中4.5 ml以3.8%枸橼酸钠按1∶9比例抗凝，用于血小板聚集率测定，1.5 ml血用2%消炎痛-EDTA溶液按1∶9比例抗凝，以3000 r/min离心30 min，吸取上清液置于低温冰箱保存，用于血浆中TXB2及6-Keto-PGF1α含量的测定。

1.2.3 血小板最大聚集率测定采用Born氏比浊法［7］，将3.8%枸橼酸钠抗凝血轻轻倒置混合后，以1000 r/min离心10 min制备出富血小板血浆（PRP），剩余血以3000 r/min离心30 min分离出贫血小板血浆（PPP），用PPP稀释PRP调血小板数为40万/mm3。

将调节好的PRP加入LG-PABER血小板聚集分析仪的测定杯中37℃下温育5 min，加入聚集诱导剂ADP（4 μmol/l），记录血小板聚集率。

1.2.4 血浆中TXB2及6-Keto-PGF1α含量的测定按照试剂盒说明操作。

1.3 统计学处理
采用SPSS11.5软件，所有实验数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验。

2 结果
2.1亚硒酸钠对糖尿病大鼠血糖的影响
对照组、模型组和亚硒酸钠组大鼠血糖（mmol/L）分别为5.63±0.13、
21.03±1.78、17.78±1.40。

与对照组比较，糖尿病模型组大鼠血糖明显升高（P ＜0.01），说明糖尿病模型制造成功。

亚硒酸钠组能降低糖尿病模型大鼠的血糖水
平，与糖尿病模型组比较有显著性差异（P＜0.01），说明亚硒酸钠具有降血糖作用。

2.2 亚硒酸钠对糖尿病大鼠ADP诱导的血小板最大聚集及血浆中 TXB2、6-Keto-PGF1α含量及 TXB2/6-Keto-PGF1α 比值的影响
糖尿病模型组与对照组比较，ADP诱导的血小板最大聚集率升高（P＜0.01），血浆中TXB2含量升高（P＜0.01），6-Keto-PGF1α 含量降低（P＜0.01），TXB2/6-Keto-PGF1α比值升高（P＜0.01）。

亚硒酸钠组能降低糖尿病模型组大
鼠ADP诱导的血小板最大聚集率及血浆中 TXB2含量，升高 6-Keto-PGF1α含量，降低TXB2／6-Keto-PGF1α比值，与糖尿病模型组比较有显著性差异（P＜
0.01）。

说明亚硒酸钠具有抑制糖尿病模型组大鼠血小板聚集作用，见表1。

表1 亚硒酸钠对糖尿病大鼠ADP诱导的血小板最大聚集率及血浆中TXB2、6-Keto-PGF1α含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值的影响（±s,n=10）与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.01组别血小板最大聚集率（%） TXB2（pg/ml） 6-Keto-PGF1α（pg/ml） TXB2/6-Keto-PGF1α对照组
46.27±4.02 3006.41±269.29 839.72±115.11 3.64±0.55模型组
68.04±5.25* 3393.24±207.53* 569.43±113.80* 6.18±1.30*亚硒酸钠
49.73±3.96△ 3112.71±138.24△ 708.59±83.16△ 4.45±0.59△
3 讨论
ADP诱导的血小板聚集反应为两相聚集：第一相聚集是由ADP直接作用于血小板产生的，第二相聚集则是由于外加ADP使血小板释放内源性ADP而再次引起的。

一般认为ADP等血小板聚集诱导剂可与存在于血小板膜上的受体结合导致Ca2+
由致密管道系统释放从而激活磷酯酶A2启动血小板的花生四烯酸代谢途径使血小板TXA2合成及释放增加。

而TXA2合成增加可引起血小板的释放反应，此时致
密体移向细胞边缘释放其内容物，主要有ADP、5-羟色胺、PF4、Ca2+等，此释
放反应导致血小板的二相聚集。

因此抑制TXA2合成的药物如阿斯匹林等均可阻
滞ADP诱发的血小板二相聚集。

血栓素 A2（TXA2）及前列腺环素（PGI2）同为花生四烯酸环加氧酶途径的代谢产物，其共同前身为PG内过氧化物，血小板合成的TXA2是血管的强有力收缩剂和血小板的聚集诱导剂，而由血管内皮细胞合成的PGI2则是强烈的血管扩张剂和抗血小板聚集剂。

两种物质对CAMP的影响呈对立效应，进而在止血、血栓形成等多方面起重要的调节作用。

近来大量研究表明糖尿病及其血管并发症的发生发展都与TXA2/PGI2失衡，TXA2升高 PGI2生成减少导致TXA2/PGI2比值升高有密切关系［8-9］。

因 TXA2及 PGI2本身性质极不稳定，一般以其稳定代谢产物TXB2、PGF1α的测定数据反映体内的TXA2、PGI2变化。

本实验表明糖尿病模型大鼠血浆ADP诱导的血小板最大聚集率升高（P＜0.01），血浆中 TXB2含量升高（P＜0.01），6-Keto-PGF1α 含量降低，TXB2/6-Keto-PGF1α 比值升高。

与文献报道一致。

亚硒酸钠用药后可降低糖尿病模型大鼠血浆ADP诱导的血小板最大聚集率（P＜0.01），降低血浆中 TXB2含量（P＜0.01），升高 6-Keto-PGF1α含量，降低TXB2/6-Keto-PG F1α比值。

硒对血小板聚集的抑制作用与抑制TXA2生成、促进PGI2生成、导致TXA2/PGI2比值下降有关。

参考文献：
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［2］Baynes JW.Role of oxidative stress in development of complication in diabetes［J］.Diabetes,1991,40:405.
［3］扑元林,洪英杰,葛光岩.六味地黄汤对实验性糖尿病大鼠心、肝、肾组织中过氧化氢酶和过氧化脂质含量的影响［J］.延边大学医学学报,1998,21（3）:156-60. ［4］Ozdemir S,Ayaz M,Can B,et al.Effect of selenite treatment on
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