PCR扩增DNA

多聚酶链式反应扩增DNA片段
一、PCR是一种迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。

生物体内DNA分子复制的条件
1．四种＿＿＿＿＿＿＿是合成子链的原料。

2．＿＿＿＿＿＿＿＿提供了DNA复制的模板。

3．＿＿＿＿＿＿＿＿打开了DNA双链。

4．＿＿＿＿＿＿＿＿催化合成DNA子链。

5．＿＿＿＿＿＿＿＿使DNA聚合酶能够从＿＿＿＿＿＿＿的＿＿＿＿＿开始连接脱氧核苷酸。

DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为，而磷酸基团的末端称为。

DNA聚合酶不能开始合成DNA，而只能，因此，DNA复制需要引物。

DNA的合成方向总是
二、PCR扩增的原理及条件1．原理
（1）DNA的热变性：在＿＿＿＿＿＿的温度范围内，DNA＿＿＿＿＿＿结构解体，＿＿＿＿＿分开，这个过程称为＿＿＿＿＿。

当温度缓慢＿＿＿＿＿后，两条彼此＿＿＿＿＿的DNA链又会重新结合成＿＿＿＿＿。

（2）子链的合成：①需要＿＿＿＿；②合成方向总是从子链的＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

3．条件（1）＿＿＿＿＿模板。

（2）分别与模板DNA＿＿＿＿＿＿相结合的两种＿＿＿＿＿。

（3）A、T、G、C四种＿＿＿＿＿＿。

（4）＿＿＿＿＿DNA聚合酶，一般用＿＿＿＿＿DNA 聚合酶。

（5）需要稳定的＿＿＿＿＿和能严格控制＿＿＿＿＿的温控设备。

三、PCR反应过程
PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿三步。

1．＿＿＿＿＿：当温度上升到＿＿＿＿＿以上时，双链DNA＿＿＿＿＿为单链。

2．＿＿＿＿＿：当温度下降到＿＿＿＿＿左右，＿＿＿＿＿引物通过＿＿＿＿＿与两条单链DNA结合。

3．＿＿＿＿＿：温度上升到＿＿＿左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在＿＿＿＿＿的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

四、实验操作 1．实验用具
（1）PCR仪：该仪器能自动调控＿＿＿＿＿，实现DNA的扩增。

如果没有PCR仪，可用＿＿＿个＿＿＿＿＿＿代替，操作时按程序在3个＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）微量离心管：总容积为＿＿＿，实际上是进行＿＿＿＿＿的场所。

（3）微量移液器：用于＿＿＿＿转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头要＿＿＿。

2．操作步骤：准备→＿＿＿＿＿→混合→＿＿＿＿＿→反应。

五、操作提示 1．为避免＿＿＿＿＿等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行＿＿＿＿。

2．所用的＿＿＿和＿＿＿应分装成小份，并在＿＿＿＿储存。

3．在＿＿＿＿＿中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的＿＿＿必须＿＿＿。

六、DNA含量的测定
1．原理：利用DNA在＿＿＿＿＿的紫外线波段的＿＿＿曲线来测定相应含量。

2．计算公式：DNA含量（μg/mL）＝50×（＿＿＿的读数）×＿＿＿＿＿＿。

2.PCR过程中,引物的作用是( )
A.打开DNA双链,使DNA解旋为单链
B.催化合成DNA子链
C.使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制
D.为DNA复制过程提供模板
3.PCR的每次循环都可以分为三步,按循环的顺序排列是( )
A.变性、延伸、复性
B.变性、复性、延伸
C.复性、变性、延伸
D.延伸、变性、复制
4.PCR利用了DNA的热变性原理,PCR仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器。

下列对PCR过程中“温度的控制”的说法,错误的是( )
A.PCR反应需要高温,是为了确保模板是单链
B.延伸的温度必须高于复性温度,而低于变性温度
C.要用耐高温的DNA聚合酶
D.需要耐高温的解旋酶
5.下列有关PCR的叙述,不正确的是( )
A.是一种酶促反应
B.引物决定了扩增的特异性
C.扩增对象是氨基酸序列
D.扩增对象是DNA序列
6.关于DNA的复制,下列叙述正确的是( )
A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从5′端延伸DNA链
B. B.DNA复制不需要引物
C.引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合
D.DNA的合成方向总是从子链的3′端向5′端延伸
7.下列有关PCR的叙述中正确的是( )
A.PCR反应所需要的引物只是RNA
B.PCR反应所需要的原料是核糖核苷酸
C.PCR反应所需要的酶在60℃会变性
D.PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行
8.在PCR的实验操作中,下列说法正确的是( )
①PCR所用的缓冲液和酶要在常温下储存;②离心管的盖子一定要盖严;③用手指轻弹离心管壁④离心的目的是使反应液集中在离心管的底部
A.①②③
B.①②④
C.②③④
D.①③④
9.下列操作过程的叙述中错误的是( )
A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌
B.PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出之后,迅速融化
C.PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在-20℃储存
D.在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必须更换
10、关于PCR技术的应用,错误的一项是( )
A.古生物学、刑侦破案、DNA序列测定
B.诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学
C.DNA 序列测定、基因克隆、刑侦破案
D.诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定
11、在遗传病及刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析,其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体
(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开键，称为。

这一过程在生细胞中是在酶的作用下进行的。

(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两个DNA分子，此过程中原料是，遵循的原则是。

(3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、A TP、酶以外，至少还需要三个条件，即液体环境、适宜的和，前者由PCR仪自动调控，后者则靠来维持。

(4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次后，则15N标记的DNA分子占总数的比例为。

(5)假设一个模板DNA分子中有800个碱基对，其中含有腺嘌呤600个，若通过PCR技术共消耗周围环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则模板DNA在PCR扩增仪中已经复制了次。

(6)PCR反应过程需要DNA解旋，PCR技术利用DNA的原理解决了这个问题。

(7)在对样品DNA进行分析的过程中发现DNA掺杂着一些组蛋白，要去除这些组蛋白可加入的物质是。