142 例儿童急性白血病的流式分析

142 例儿童急性白血病的流式分析
摘要】目的探讨四色流式细胞术检测儿童急性白血病免疫表型的意义。

方法应
用流式细胞仪分析、形态学、细胞化学染色相结合的方法对142 例儿童急性白血
病进行诊断。

结果 142 例儿童急性白血病中AML39 例，占27.5%，ALL103 例，占73%，ALL 中B-ALL90 例，占63.4%，T-ALL13 例，占9.1%。

AML,B-ALL,T-ALL 分别
有不同抗原的高表达，且存在部分AML 表达淋系抗原，某些ALL 表达髓系抗原。

结论四色流式细胞术对儿童急性白血病的准确诊断有重要意义。

【关键词】儿童急性白血病流式分析
【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）
38-0113-02
白血病（A L）是一组高度异质性的造血系统恶性肿瘤，血细胞形态学及细胞
组织化学染色一直是白血病诊断与分型的基石，随着免疫学技术的不断发展，在
此基础上加上免疫分型，诊断率可从70% 左右提高到90% 以上，我们总结了142 例儿童急性白血病的形态学及免疫分型特点，报告如下。

1资料与方法
1.1 病例
选择2011 年8 月-2013 年6 月我院收治的AL 患者共142 例，其中男性63 例，女性79 例，年龄4 月-14 岁，平均年龄39.3 月。

分类按照法国、美国、英国三国
协作组(FAB 分型)[1] 方案分型，其中急性髓系白血病(AML)39 例，急性淋巴细胞
白血病（ALL）103 例。

1.2 细胞化学染色方法
骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500 个细胞，细胞化学染色包括过氧化
物酶染色、糖原染色、α- 乙酸萘酚酯酶染色，按F A B 标准进行白血病分型。

1.3 免疫分型试剂及方法
1.3.1 仪器与试剂仪器为美国BD 公司FACScalibur 型流式细胞仪。

单抗包括C
D2、C D3、C D4、C D5、C D7、C D8、C D10、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD38、CD64、CD117、HLA-DR、MPO、cCD79a、cCD3、
cCD22,TdT。

流式细胞仪及所有单抗均购自Becton-Dickson 公司。

1.3.2 荧光标记染色方法每个病例在治疗前抽取肝素抗凝骨髓或外周血3ML ,
取B D 专用流式细胞仪专用试管，每管中加入4 种荧光标记抗体
（FITC/PE/PerCP/APC）和标本，并同时设定阴性对照管，混匀后避光15m i n，然
后加入1X 溶血素，混匀避光10m i n，离心450g，5min，弃上清，加PBS 混匀，
再离心450g，5min，弃上清加PBS 混匀，上机检测。

1.3.3 流式细胞仪检测测定前以标准校正荧光微球校正仪器，应用Ce l l Q u e s t 软件设置获取条件，每测定管获取分析30000 个细胞。

用C D45/ S S C 双参数
建立二维点图，根据细胞C D45 抗原表达及S S C 将不同细胞分群，然后对各群细
胞设门，分析所圈定的白血病细胞群的表面标记。

以表面抗原阳性率≥ 20% 为阳
性判断[2]。

2结果
2.1 形态学分布
2 年内收治的142 例儿童急性白血病中 AML38 例，其中M0 型
3 例，M1 型2 例，M2 型11 例，M3 型5 例，M
4 型7 例，M
5 型10 例； A L L100 例，其中L1
型46 例，L2 型34 例，L3 型20 例；形态学不能准确归类的白血病的4 例。

2.2 免疫分型
142 例A L 中急性髓细胞系白血病（AML）39 例，急性淋巴细胞白血病（A L L）103 例。

133 例形态学+ 组织化学诊断与流式细胞免疫分型符合，符合率为93.7%。

形态学诊断为AML -M0 中有2 例经流式细胞检测分别诊断为B - A L L（1 例）、T-
A L L（1 例）。

而形态学诊断为A L L 中有3 例经流式细胞检测分别确诊为M0(1 例)、M5(1 例)、M7(1 例)，形态学不能准确分类的4 例流式细胞仪最后分别为B-ALL(3 例)、 M7(1 例)。

39 例髓系AML 中C D33 表达率最高为89.7%（35/39）, 同时或分别表达髓系
标志抗原C D64, C D13，C D117, C D15, MP O，分别为79.5%（31/39）、69.2%
（27/39）、69.2%（27/39）, 59.0% （23/39）,48.7%（19/39）。

其中15 例AML
伴随有淋系抗原CD7(7/39),CD56(6/39),CD19 (2/39) 。

103 例ALL 中，B-ALL 为63.4%（90/142），主要表达CD19、cCD79a,cCD22，HLA-DR、CD10，分别为100%（90/90）、100%（90/90）、100%（90/90）、98.9%（89/90）、91.1%（82/90）。

T-ALL 为9.1% （13/142），主要表达cCD3，CD7、CD5、CD2，分别为100%（13/13）、100%（13/13），92.3%（12/13），76.9%（10/13）。

其中29 例A L L 伴随髓系标志抗原CD13（11/103），CD13+33
（6/103）， CD33（2/103），CD15（8/103）表达,T-ALL 伴随CD10（2/13）。

3讨论
白血病为小儿常见的恶性肿瘤，小儿白血病以急淋多见，在A L L 免疫亚型中，又以B-ALL 最多见。

本研究借助CD45/SSC 双参数散点图进行设门将白血病细胞与
正常细胞分开，诊断急性白血病具有形态学不可比拟的优势。

在本组病例，儿童急性白血病中B-ALL最多见，占63.3%（90/142），与国
内外文献报道相符。

主要表达C D19, c C D79a , c C D22,HLA-DR,CD45 可以阴性。

而
T-ALL 以cCD3，CD7,CD5,CD2 为主。

AML 所占比值较成年人低，主要表达CD33,
CD64，CD13,CD117 MPO，其中急性早幼粒白血病占AML12.8% (5/39)，C D34、H
L A - D R 表达均较低，与文献报道一致。

AML -M5 细胞化学染色MP O 经常为阴性
或弱表达，C D14 对于形态不典型的单核细胞白血病较高的特异性。

AML - M7 在AML 中所占比例为5% , 两例均表达C D117、C D41a、CD61, 而MPO、TdT 和其他
的T、B 标志均为阴性。

本组病例白血病细胞表面分化抗原存在交叉表达现象，其中L y + A M L 表达
淋系抗原主要为C D7、C D19，C D56, 而A M L 伴随弱CD19+(CD56+)、弱CD33+
时多提示存在t（8；21）及AML1/ E T O 融合基因，文献报道此型A M L 患者对化疗反应好，预后相对好。

My+ALL 表达髓系抗原主要为CD13、CD15. CD33, 文献报
道M L L 基因异常在婴儿白血病中的发病率为60%，除C D10 阴性外，伴随髓系
标志C D15 表达是M L L 相对特异性的标志，此类白血病容易累及中枢神经系统
具有11q23 易位的患者预后非常差，临床将其作为高危组[3]。

我们的研究表明，流式细胞术可以了解被测白血病细胞的所属系列及其分化
程度，对形态学不能肯定细胞来源的白血病及白血病微小残留监测及预后判断有
重要意义。

参考文献
[1] 张之南. 血液病诊断及疗效标准[ M ] .2 版. 北京：科学出版社， 1998：171.
[2]Jennings CD,Foon KA.Recent advance in flow etometry:application to the diagnosis of hematologic malignancy[J].Blood,1997,90（8）：2 863.
[3] 刘艳荣. 实用流式细胞术[M]. 北京：北京大学出版社，2010，9.。