人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应

人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应张玥;孙宏彬;谈意隽;季育华
【期刊名称】《现代免疫学》
【年(卷),期】2005(25)6
【摘要】构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式。

用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65)。

用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物。

同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性。

结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确。

体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带。

另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显。

综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。

HCMVpp65DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究。

【总页数】4页(P461-464)
【关键词】人巨细胞病毒;pp65;核酸疫苗;细胞免疫
【作者】张玥;孙宏彬;谈意隽;季育华
【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院临床实验诊断中心
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
1.HCMV pp65和gB联合核酸疫苗表达载体的构建及其体内生物学活性研究 [J], 马道新;于修平;张晓梅;周亚滨;李勇;贾继辉;赵蔚明
2.HCMV pp65核酸疫苗表达载体的构建及其体内免疫效果评价 [J], 马道新;于修平;周亚滨;贾继辉;赵蔚明;孟红
3.流式细胞术检测分析人巨细胞病毒核酸疫苗诱导宿主细胞免疫效应 [J], 方风琴;张玥;钱春艳;卫蓓文;史桂英;季育华
4.人巨细胞病毒pp65原核表达载体构建及表达产物对特异性免疫应答的诱导 [J], 赵捷;闻良珍;陈素华;凌霞珍
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