猪瘟的间接免疫荧光实验PPT教案

异硫氰酸荧光素(FITC)
能够产生明显荧光并能 作为染料使用的有机化 合物称为荧光色素或荧 光染料。用于标记抗体 的荧光色素，必须具有 化学上的活性基因，能 与蛋白质稳定结合，且 不影响标记抗体的生物 活性及抗原抗体的特异 性结合。
荧光二抗
荧光素及其激发波长和发射波长
荧光素
异硫氰酸荧光素 （FITC）
生物薄片马赛克：将包被有不同基质的生物薄片固定在一个载片 反应区中，可同时检测多种抗不同组织或病原体的抗体。
荧光显微镜：
四、IIF操作步骤：
１．准备：取病猪的扁桃体，淋巴结、脾或其他组织一小 片，用滤纸吸去外面的液体。用笔编号、标记。
２．触片：取干净载玻片一块，稍为烘热，将组织小片的 切面触压玻片，略加转动，作成压印置室温内干燥。或 用所采的病理组织，做成切片。
着触片组织冲），然后立即将其浸入装有磷酸盐缓冲液的平皿 中浸洗3次，每次5分钟。
7．第二次温育：滴上标记荧光抗体（30ul），置37℃饱和湿
度箱内处理10—30分钟。
8．清洗：用pH7.2的PBS漂洗3次，每次5—10分钟。
9．封闭：干后，滴上甘油缓冲液数滴，加盖玻片封闭，用荧
光显微镜检查。
10．结果判断：如细胞胞浆内有弥散性、絮状或点状的亮黄
猪瘟的间接免疫荧光实验
会计学
1
荧光免疫显微技术
直接法---荧光素标记Ab直接检测 间接法---荧光素标记二抗 补体结合法---荧光素标记抗补体Ab 双结合法---两种荧光素标记Ab
二、实验原理：
固定在载片上的待检病变组织与适当稀释 的猪瘟阳性血清反应后，如果待检组织中 有猪瘟病毒抗原就会与猪瘟阳性血清中的 抗体特异性结合，加入FITC(异硫氰酸荧光 素)标记的的兔抗猪IgG二抗又可与猪瘟阳 性抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见 呈现绿色荧光。
3. 固定：滴加冷丙酮数滴，置–20℃固定15一20分。 4. 清洗：用PBS（pH7.2）洗涤3次，每次5 min，阴干。 5. 第一次温育：滴加25ul稀释后的血清覆盖触片样品，避
免产生气泡。滴加完所有待测标本后才开始室温温育30 分钟。
四、IIF操作步骤：
6．清洗：用磷PBS冲洗载片（注意水流不要太急，不要直接对
绿色荧光，为猪瘟，如仅见喑绿或灰蓝则不是猪瘟。对照试验 用已知猪瘟病毒材料压印片先用抗猪瘟血清处理，然后用猪瘟 荧光抗体处如上检查，应不出现猪瘟病毒感染的特异荧光。
五.注意事项:
1．触片要求均匀。 2．每次试验应该设阳性和阴性对照。 3 应注意荧光抗体的质量。 4. 标本应及时检发射的 荧光色
绿
红
激发波长 （nm）
495
570
发射波长 （nm）
528
595
三、试剂与仪器：
1.猪瘟病料、抗原片、FITC荧光标记的兔 抗猪二抗、PBS缓冲液、猪瘟标准阴、阳性 血清、封片介质:磷酸盐缓冲甘油、盖玻片、 滤纸
2.荧光显微镜、摇床、移液器、吸管等
生物薄片