人类免疫缺陷病毒I型Tat基因真核表达载体的构建

人类免疫缺陷病毒I型Tat基因真核表达载体的构建
梁庄万
【期刊名称】《医学信息（下旬刊）》
【年(卷),期】2010(023)003
【摘要】目的:构建人类免疫缺病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法:以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞.RT-PCR检测其基因转录情况,WesternBlot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质.结果:成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达Hiv-1Tat目的片段. 结论:成功构建了HIV-1Tat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础.
【总页数】2页(P16-17)
【作者】梁庄万
【作者单位】641300,四川省资阳市人民医院检验科(原四三一医院)
【正文语种】中文
【中图分类】R394
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