种子生活力的测定资料
实验四 种子生活力测定
实验四种子生活力测定一、实验目的和要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
种子生活力：种子潜在的发芽能力。
二、测定原理四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。
染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。
判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。
三、材料及器具材料：刺槐器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等四、方法及步骤1. 测定样品的提取从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。
3次重复。
同时准备部分种子作为后备。
2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）3. 溶液配制溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。
4. 取种胚、染色处理剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。
如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取；种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。
置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。
5. 结果鉴定经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。
有生活力：种胚和胚乳完全着色；无生活力：种胚和胚乳完全不着色；根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。
6. 种子生活力计算生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。
种子生活力测定
3、炒种法
数出一定数目的种子，放在锅里或铁板上炒， 能爆响的种子多为有生活力的种子，爆响频率 越快、声音越响，种子生活力就越强；虽然能 爆响，但声音弱而无力的，则是无生活力的种 子。
4、剥胚法
先将种子放在清水中浸泡10～24小时，然后剥去 种皮，放入铺有吸水纸的玻璃器皿中，将玻璃器 皿置于温度为20～25℃的湿箱中6～10小时，凡 是胚不腐烂，且各部分增长伸开，饱满而有光泽 的为有生活力的种子。
种子生活力测定
通过以下四种方法可鉴定果树种子生活力：
1、形态鉴定法
凡砧木种子大小均匀，籽粒饱满，千粒重较重， 种皮有光泽，无霉变气味，无病虫危害，剥去种 皮后，胚和子叶呈乳白色、不透明，压之有弹性、 不出油的种子为有生活力的种子；反之，则为失 去生活力或生活力极弱的种子。
2、染色法
将砧木种子浸入水中10～24小时，使种皮软化， 然后细心剥去种皮（桃、杏、李、核桃等有坚硬 木质外壳的种子，只需轻轻砸碎外壳，不需用水 浸泡），放入染色剂(5％红墨水，或0.1％靛蓝胭 脂红，或0.1％曙红溶液）中，染色1～2小时，再 将种子取出，用清水冲洗干净。观察染色后的种 子，凡胚和子叶完全染色者，为无生活力的种子； 胚或子叶部分染色者，为生活力弱的种子；胚和 子叶没有染色者，为有生活力的种子。
种子生活力与活力测定
5．观察鉴定 一般鉴定原则是，凡是胚的主要构造及有关活营养
组织染成有光泽的鲜红色，为有生活力种子。禾本 科：观察盾片、胚芽、胚轴、胚根；双子叶：观察 子叶、胚芽、胚轴、胚根。
凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色， 并且活的营养组织不染色部分超过允许范围，以及 组织软化的，为不正常种子。
2.原理
将离体胚在规定的条件下培养5～14 d。有生 活力的胚仍然保持坚硬新鲜的状态，或者吸 水膨胀、子叶展开转绿，或者胚根和侧根伸 长、长出上胚轴和第一叶；而无生活力的胚， 则呈现腐烂的症状。
（二）离体胚测定方法
1．试验样品 需用400粒种子。设定重复次数（如4×100或 8×50）。
a．胚根顶端不染色，花生为三分之一，蚕豆为三分之二， 其他种为二分之一。 b．子叶顶端不染色，花生为四分之一，蚕豆为三分之一， 其他为二分之一。 c．除蚕豆外，胚芽顶部不染色四分之一 。
瓜类： a．胚根顶端不染色二分之一。 b．子叶顶端不染色二分之一。 棉花： a．胚根顶端三分之一不染色。 b．子叶表面有小范围的坏死或子叶顶端三分之一
DPNH2 + TTC (辅酶IH2) (四唑)
DPN + TTCH + HCl (辅酶I) (甲 ) (氯化氢)
依据四唑染成的颜色和部位，即可区分种子红色的有生活力部分和无 色的死亡部分。
注意：四唑染色是一酶促反应，因此反应不仅受酶活性的影响，还受 底物浓度、反应温度、pH值等因素的影响。
平均生活力百分率（%）
最大容许范 围
1
2
3
99
2
5
98
3
6
97
4
7
96
5
种子生活力的测定
欢迎阅读种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1gTTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供式粒数的%【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定一、实验原理通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。
二、实验原理（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。
三、实验材料、药品和器具1、实验材料：花生、黄豆2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等四、试验方法1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。
胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。
2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。
胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。
五、实验结果品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93%黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。
结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。
六、注意事项1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。
2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。
实验三种子生活力测定
进行实验操作
种子处理
对种子进行适当的处理，如消毒、催芽等，以准备进行生活力测定。
实验操作
按照实验要求，对种子进行染色、培养等操作，观察种子的萌发情况。
记录实验数据
数据记录
详细记录每个种子样本的萌发情况， 包括萌发时间、萌发率等。
数据整理
对实验数据进行整理和分析，得出种 子生活力的结论。
04
实验结果与分析
实验收获与体会
实验收获
通过实验三，我们学会了使用染色法测定种子的生活力，掌握了种子萌发的原理和影响因素，了解了种子质量对 农业生产的重要性。
实验体会
实验过程中，我们深刻体会到了科学研究的严谨性和细致性，明白了种子生活力测定的实际意义和应用价值，增 强了我们对农业科学研究的兴趣和信心。
对实验的改进建议
掌握测定种子生活力的方法
01
常用的测定方法有：染 色法、发芽试验法和电 导率法等。
02
染色法是通过染色剂对 种子进行染色，根据染 色结果判断种子是否具 有生活力。
03
发芽试验法是将种子置 于适宜的发芽条件下， 观察其发芽情况，计算 子的电导率来间接反映 种子的生活力。
实验结论总结
实验结论
根据实验结果和分析，得出种子生活力的测定结论，包括发芽率、 发芽速度、幼苗生长状况等方面的评价。
实验意义
阐述实验对于农业生产的重要意义，如指导种子选择、提高种植效 益等。
实验不足与展望
指出实验存在的不足之处，并提出改进和进一步研究的方向，为后 续研究提供参考和借鉴。
05
实验总结与展望
实验三种子生活力测 定
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验总结与展望
第五章___种子生活力与活力测定
色情况。
20 ml乳酸＋20 ml苯酚＋40 ml甘油＋20 ml蒸馏水
注意
该药液有毒性，最好戴塑胶薄膜手套配 制，并在通风橱里操作。在使用时谨防 触及皮肤或衣服等。
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（4） H202 ：加快酶活化和吸胀。一般用0.3%H202溶液 （5）杀菌剂和抗生素：延缓衰弱种子的劣变进程。
第一节 种子生活力测定原理及方法
2)种子预措
目的：采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营
养组织暴露出来。
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
方法：
刺穿：对经过预湿的种子或硬实种子，可利用解剖针或解
剖刀，刺穿种子的非主要部位，适用于小粒（牧草等）种子。
加速四唑还原成甲臜的速度；
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。
ISTA Working Sheets on Tetrazolium Testing, Volume I, 1st Edition, 2003 Volume I - Agricultural, Vegetable and Horticultural Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
种子生活力测定
料垫板（切种子用）、放大镜、标签纸等。
项目五. 实验步骤
任务1 浸泡：将种子用温水（约30--35℃）浸泡5h左右，使种 子充分吸胀，便于染色（一般用先泡好的种子）。 任务2 试样数取与切取：随机数取4份，每份50粒种子。沿种 胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要 完整的暴露在切3 样品染色：向上述 4 个培养皿中加入 5%的红墨水溶液，将切好的种子浸没，室 温下浸10min染色。
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少 2 次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗， 不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情 况（可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活 力的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生 活力的种子。 有 生 活 力 的 种 子
无生活力的种子
任务5 计算：
种子生活力（ % ） = （有生活力的种子数／检测种子数） ×100%（保留整数）
先计算每份实验的种子生活力。再计算其平均生活力。
项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称 品种名称 重复 检验粒数 种子 生活 力测 定 有生活力种子数 种子生活力 平均种子生活力
填表日期： 年 月 日
种子生活力测定的记载 表
产地 送检样品重（g）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；
3）染色时间不足或太长，否则不易区分；
4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
模块三
快速测定种子生活力
红墨水染色法
第五章 种子生活力与活力测定
Volume II, 1st Edition, 2003 Volume II - Tree and Shrub Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（2）磷酸缓冲液常用来配制四唑染色液（Ph6.5-7.5） (1)ISTA法： 母液I：9.078g KH2PO4溶解于1000ml蒸馏水；
母液Ⅱ： 9.472gNa2HP04 或11.876g Na2HPO4· 2O溶解于 2H
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。
实验三十九种子生活力的快速测定
实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。
但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。
本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。
Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。
二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。
种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。
当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。
三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。
2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。
3. 试剂：0.1﹪升汞。
四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。
1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。
1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。
1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。
1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。
1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。
2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。
实验23种子生活力的快速测定
实验23种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。
（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
实验三 种子生活力测定
衰弱和死亡部分的差异显现出来，判断种子生活力。 染色方法：将经过样品准备或不须准备的规定数量种子 分别放入四唑溶液（0.1%）里染色。 将不同重复的样品分别放在小烧杯中，加入四唑溶液， 以淹没种子为宜；
移置在30℃的黑暗恒温箱内或弱光下进行染色2小时。因 为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效 果。
实验方法和步骤
观察鉴定 凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的 鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。
凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和 光泽，并且活营养组织不染色部分已超过1/2，或超 过允许范围，以及组织软化的，为不正常种子。
凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色， 且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种 子。
实验方法和步骤
结果表示与报告
计算各个重复中有生活力的种子数，重复
间最大容许差距不得超过规定值；
平均百分率计算到最近似的整数。
实验三 种子生活力的测定
一、实验目的和要求
1、实验目的
了解四唑法测定种子生活力的原理
掌握主要农作物种子四唑染色测定种子生
活力的方法步骤和判别有无生活力的鉴定 标准。
一、实验目的和要求
2、实验要求
要求每组同学独立完成同一材料的生活力 测定。
二、实验原理
2、四唑染色法测定种子生活力的基本原理 利用四唑的无色溶液作为一种指示剂，以显示活 细胞中所发生的还原反应。 有生活力的种子胚部细胞具有脱氢酶，被种子吸 收的四唑盐类的无色溶液，参与了活细胞的还原 反应，从脱氢酶脱氢，被还原为红色而稳定的、 不扩散的、不溶于水的三苯基化合物。 无生活力的种子则无此反应。 借此可鉴别有生活力种子和无生活力种子。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
种子学chapter6.7 种子生活力测定
(2)一般鉴定原则
凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的 鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。凡是 胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光泽， 并且活营养组织不染色部分已超过二分之一，或超过 允许范围以及组织软化的，为不正常种子。
凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色， 且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。
5.观察鉴定
(1)目的
①确切计算种子能产生正常幼苗的能力，即种子生 活力百分率。
②按种子样品染色程度和组织特征，判断其强壮程 度，将种子分为强或弱2～3个等级，以便统计种子活 力。
③按局部解剖染色图形，观察染色部位，查明种子 劣变和生活力丧失的原因，为种子生理、种子加工、 种子贮藏和种子处理提供指导情报。
(三)四唑测定的适用范围 1.测定休眠种子的发芽潜力； 2.测定收获后要马上播种的种子的发芽潜力； 3.测定发芽缓慢种子的发芽潜力； 4.测定发芽末期未发芽种子的生活力； 5.测定种子收获期间或加工损伤的种子生活力； 6.查明发芽试验中不正常幼苗产生的原因和杀菌剂
处理或种子包衣等的伤害； 7.查明种子贮藏期间劣变、衰老程度； 8.时间紧迫，调种时快速测定种子生活力。
小 麦 种 子 四 唑 测 定 结 果 的 鉴 定 标 准
大豆种子四唑测定结果的鉴定结果标准
Oryza
viable seed
Non-viable seed
(七)结果表示与报告
计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大 容许差距不得超过表5.2的规定，平均百分率计算 到最近似的整数。
(六)四唑测定方法
四唑测定结果的正确性取决于采用方法的适合性、 检验人员对有关知识的理解和实际运用能力，以及操 作技术的熟练程度等因素。
实验六 种子生活力的快速测定
实验六种子生活力的快速测定一、实验目的1.加深对种子作用的理解；2.掌握种子生活力的测定方法。
二、实验原理在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。
因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。
种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；三、实验材料及用品材料：绿豆种子实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）四、实验步骤1. 浸种：将待测种子在30 ～35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。
b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。
c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h。
3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染色情况。
有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染色。
生活力的种子数计算种子生活力的比率= ————————X 100%实验组测定种子数五、实验现象与结果保温1h后种子染色情况：被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6煮沸的种子0 20表一种子染色情况记录表图1 未煮沸的种子染色情况图2 煮沸的种子染色情况生活力的种子数未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%实验组测定种子数生活力的种子数煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0实验组测定种子数六、分析和讨论1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。
种子生活力的测定方法
种子生活力的测定方法种子生活力的测定有以下几种方法：（一）氯化三苯基四氮唑法( TTC)1．将种子用温水（约30℃）浸泡2--6小时，使种子充分吸胀。
2．随机取种子100粒，红花、蓖麻等具有外壳的需要去掉外壳，豆类种子要去皮。
然后沿种胚中央准确切开，取一半备用。
3．将准备好的种子浸于2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)溶液中，于恒温箱( 30～35℃)中保温30分钟。
4．染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。
倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1--2次，观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或部分被染成红色的即为具有生命力的种子，种胚不被染色的为死种子。
如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。
（二）溴麝香草酚蓝法（BTB法）1．浸种：同上述 TTC 法。
2．BTB 琼脂凝胶的制备：取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。
待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。
3．显色：取吸胀的种子 200 粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少 l cm 。
然后将培养皿置于 30 ～ 35 ℃下培养1 ～2 小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。
4．计算活种子百分率。
用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。
（三）靛红染色法步骤同TTC染色法。
注意事项1．染料的浓度要适当，染色时间不能太长（如用红墨水染色，只需要5～10分钟即可），否则不容易区别染色与否。
2．靛红染色法测定种子生活力，适用于豆类、麻类、瓜类、十字花科、果树、乔灌木种子的生活力测定。
（四）碘化钾反应法1．将种子在水中浸18小时。
2．取出种子放在垫有湿滤纸的培养皿内，将培养皿置30℃恒温箱中，不同植物种子放置时间不同，如松种子放48小时，落叶松放72小时。
第五章种子生活力和活力测定
第五章种子生活力和活力测定第五章种子生活力与活力测定本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法§2、种子活力测定原理及方法第一节种子生活力测定的原理与方法在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。
一、种子生活力概念：种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力；种子生活力和发芽具有不同的含义：一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。
而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。
所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。
二、种子生活力测定的意义1、测定休眠种子的生活力新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。
必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。
（怎样利用？）播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。
种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。
2、快速预测种子的发芽力:休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需的时间较长。
如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。
而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d 计算发芽率）。
这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。
种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。
本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。
三、四唑测定法（GB）(一)四唑测定法概述1、发展简史四唑测定法于1942年由德国kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
实验七种子生活力的快速测定
上述标准鉴定煮沸和未煮沸
2021/4/24
种子的生活力。
5
实验报告
▪ 为什么要用处死的种子做对照？
2021/4/24
6
种子冲洗l~2次，观察种胚被 染色的情况。凡种胚全部或 大部分被染成红色的即为具 有生活力的种子，种胚不被 染色的为死种子。如果种胚
（30℃~35℃）中保温
中非关键性部位（如子叶的
0.5~1h。另取100粒吸涨种 一部分）被染色，而胚根或
子，于沸水中煮5min后，
胚芽的尖端不染色，都属于
再加入0.5%TTC溶液染色。 不能正常发芽的种子。根据
贮藏。若已变为红色，则不 能继续使用。
2021/4/24
4
实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ步骤
▪
浸种：将待测种子用温水 （30℃~35℃）浸泡2－6 h，
▪
使种子充分吸胀。
统计：染色结束后要立即进
行鉴定，因放置太久会褪色。 倒出TTC溶液，再用清水将
▪ 显色：随机取吸涨种子100 粒，小心剥去种皮或外壳， 务必不要伤害种胚。然后将 处理好的种子置于小白瓷碗 中，加入0.5% TTC溶液， 以浸没种子为度，于恒温箱
染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的 深浅程度来判定种子的生活力。
2021/4/24
3
实验材料和器材
• 实验材料
▪ 水稻种子
• 器材：恒温箱、小白瓷碗、
镊子、刀片、小烧杯
• 试剂： 0.5% TTC溶液：
称取0.5 g TTC放入小烧杯 中，先加少许乙醇溶解后， 再用蒸馏水稀释定容至100 mL。TTC溶液最好随用随 配，不宜久藏。溶液应遮光
实验七：种子生活力的快速测定
▪ （一）实验目的及意义 ▪ （二）实验原理 ▪ （三）实验步骤 ▪ （四）实验报告
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
三、实验原理 1 .四唑染色测定原理 四唑盐类的无色溶液是一种可被种子组织吸 收的指示剂，参与活细胞的还原过程 DPNH2+TTC→DPN+TTCH+HCL
（辅酶ⅠH2) （四唑）（辅酶Ⅰ）（甲 月替）（氯化氢）
2 .红墨水染色测定原理 种子活细胞的细胞膜均能选择性地吸收外界 有用物质，而死亡的细胞则丧失了这一能力。 有生活力的种子，胚部细胞不让染料进入，因 而不容易被染色；而丧失生活力的种子，胚部 细胞丧失了选择透过性，染料可以自由的进入 到细胞内，使胚部染色。
实验六 种子生活力的测定
生活力Seed viability：种子发芽的潜在能力或种胚 具有的生活力
种子生活力测定的必要性：
1、休眠种子必须进行生活力测定： 2、快速预测种子发芽能力
2
一、实验目的 1.了解四唑染色及红墨水染色测定种子生活力 的原理和方法。 2.掌握判别种子有无生活力的鉴定标准。 二、材料和用具 1. 种子材料：小麦、玉米、大豆 2. 试剂：0.1%四唑溶液、5%红墨水 3. 用具：镊子、刀片、吸水纸、烧杯、放大镜
11/4/2018
大豆种子红墨水染色测定结果的鉴定结果标准
五、计算种子生活力 种子生活力=有生活力种子的数量/种子总数× 100%
实验七 种子重量和重的测定方法及种子自流 角和静止角的测定 二 材料用具 小麦、玉米、大豆种子 容重器、真空数种器、电子自动数粒仪、玻璃 缸、玻璃板、量角器
11/4/2018
小麦种子四唑测定结果的鉴定标准
2.大豆种子红墨水染色测定
⑴ 浸种 ⑵ 染色 大豆：200n×(2-4) （20n×2） 剥种皮 浸入 5%红墨水中，0.5-1h ⑶ 漂洗 ⑷ 观察鉴定 除去种皮，掰开子叶，露出胚芽 鉴定：①整个胚不着色或着色很浅 ②胚根顶端染色，1/2 ③子叶顶端染色，1/2 ④胚芽顶部染色，1/4
四、实验过程
1 .小麦、玉米种子四唑染色测定 ⑴ 浸种：软化种子，活化有关酶 ⑵ 样品准备 小麦： 200n×(2-4) 沿胚纵切 20n 玉米： 200n×(2-4) 沿胚纵切 50n×2 ⑶ 染色 浸入0.1%四唑溶液中，35℃ 0.5-1h
⑷ 观察鉴定 小麦：观察切片、胚和盾片 鉴定 ①胚的主要构造染成正常鲜红色 ②盾片上下任一端1/3不染色 ③胚根大部分不染色，但不定根原基体 必须染 色 盾片中央有不染色组织，表明受到热损伤 玉米：观察切面 鉴定 ①胚的主要构造染成正常鲜红色 ②胚根 1/3不染色 ③盾片上下1/3不染色 盾片中央有不染色组织，表明受到热损伤
三、实验过程
1、小麦种子容重测定：
安装容重器 调零点 测量(2次重复）： 2、小麦种子千粒重测定，玉米种子百粒重测定（2次重复） 3、小麦、大豆种子散落性测定 静止角：将玻璃缸直立，种子装至总容积的1/3左右，缓慢 放平，测种子与玻璃缸的水平夹角。 流动角：称10g种子放在水平玻璃板一端，将其慢慢抬起， 当种子开始下滑时量取玻璃板倾斜角度为α1 ；继续将玻 璃板抬高，大部分种子滑落时量取α2 ，α1～α2。