真核生物基因组总DNA的提取与鉴定
第十一章 核酸提取与鉴定
Trizol一步法提取总RNA：
附：Trizol法步骤
1）实验前取冰，4℃离心机预冷，DEPC处理水（高压灭菌 处理）配制的75%乙醇4℃预冷； 2）1ml Trizol匀浆好的样品； 3）加入0.2ml氯仿，颠倒混匀（15秒）——“慢”，氯仿使蛋
白变性
4）室温，静置3分钟； 5）离心机4℃、14000转/分，离心15分钟；静置1分钟（分
（2）体液标本
浆膜腔积液、脑脊液、尿液、关节积液等； 按水样标本方式离心，取沉淀用于核酸提取。
（二）提取用具预处理
1. DNA提取用具的处理
要求无菌；试剂、器材高压干燥等进行无DNase处理。
2. RNA提取用具的处理
要求无菌，防止二次污染。 RNA易被RNase水解，RNase无处不在且耐高温， 提取条件要求严格。
条件用-20℃、1小时，目的为了更好分层）
9）离心机4℃、14000转/分，离心10分钟 10）弃上液（移液器调至1ml，分两步快速轻轻吸弃上清：第1步，
沿液面吸弃约0.9ml上清；第2步，沿液面吸弃其余上清;注意吸头不要接 触到沉淀斑区）
11)沿试管内壁轻轻加入1ml 4℃预冷的75%乙醇,注意切勿 冲击到沉淀斑区 12）离心机4℃、10000转/分，离心5分钟 13）弃上液（用枪把里面的乙醇吸去，留极少许即可，以防干燥过 程中把RNA烤干），60℃恒温箱干燥5分钟（注意：打开管盖；或用
• 所需溶液的配制：必须用高压灭菌的水和RNA 提取专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药 匙称取试剂，把溶液装入无RNase的玻璃器皿。
• 严格来说，所有溶液均应用0.1％DEPC于37℃ 处理12小时以上，然后于100℃加热15分钟或高 压灭菌15分钟，去除残余DEPC。
实验一 植物基因组DNA提取
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速心机，台式高速离
心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris· Cl，20mmol/L
EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。
3. TE缓冲液：10mmol/L Tris· Cl（pH8.0），
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μ g/mL DNA
思考题: 1. 如何检测和保证DNA的质量？
2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
植物基因组DNA的提取
一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好
的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K
的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿：
异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的
DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇， 3mol/L NaAc（pH5.2）。
六、操作步骤
1. 在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液，60℃水浴预热。
2. 取玉米幼叶0.1g，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入 预热的离心管中，摇动混匀，60℃水浴保温3min，每隔 一分钟摇动一次。 3. 12000rpm 离心1min。 4. 吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加入600ul 的氯仿：异戊醇：乙醇（80： 4 ：16）溶液，颠倒混匀 室温下静置1 min，使水相和有机相分层。 5. 室温下12000rpm离心5 min。
DNA提取原理和方法
More Proteinase K may be added if digestion is not complete after 24 hr;
Add 0.5 ml Phenol/Chloroform and vortex at top speed for 15 min at RT; Spin at 13,000 rpm for 30 min at RT; Transfer the top aqueous phase to a fresh microfuge tube;
Wash pellet once with 70% ethanol, air dry; Resuspend DNA in ddH2O. Use ~100-200 ml ddH2O to get final concentration as 100ng/ml for PCR.
10
可编辑ppt
2. Add 0.5 ml tail solution and 25 ml Proteinase K, mix well and incubate at 55ºC overnight or until tissue is dissolved;
after 24 hr;
Proteinase K :
作用：广谱蛋白酶，能在SDS和EDTA的存在下保持很 高的活性，降解蛋白质，将DNA游离。
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4. Add 0.5 ml Phenol/Chloroform and vortex at top speed for
DNA extraction
ZJL
12014.05.09
可编辑ppt
DNA extraction
人类基因组DNA的提取与鉴定
实验一人类基因组DNA的提取与鉴定实验目的1、学习人类基因组DNA的提取原理和方法。
2、熟悉应用分子生物学实验常用仪器。
实验原理哺乳动物的一切有核细胞都可以用来制备DNA，除特殊要求外，白血球、肝或脾组织是最常用的材料。
原始材料较少或较难获得时（如羊水细胞），还必须经过细胞培养来获得足够量的细胞；有时为了简便易行起见，还可以无创伤地采集材料，如用口腔上皮脱落细胞、发根细胞。
根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下原则：（1）防止和抑制DNase对DNA的降解；（2）尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏，保持DNA分子的完整；（3）将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净。
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。
这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。
一、材料一份提取总DNA的细胞或组织1.5ml Eppendorf管、微量移液器与吸头、15ml离心管、三角瓶（500或1000ml）。
二、设备离心机、电子天平、恒温水浴箱、紫外分光光度计、电泳仪、电泳槽、凝胶成像仪、微波炉或沸水浴、透射紫外灯。
三、试剂1．细胞核裂解液(STE)：0.1 mol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA2．0.8%（W/V）标准琼脂糖；3．0.5×TBE缓冲液4．其他试剂：TE缓冲液或重蒸水、氯仿/异戊醇（24:1，V/V）、异丙醇或无水乙醇、电泳加样缓冲液、溴化乙锭（EB）四、操作步骤（酚法抽提染色体DNA）（一）DNA的提取1. 采集口腔粘膜脱落细胞，用舌头舔颊粘膜上颚、用牙刮颊部，嘬咀，用分泌出的唾液反复漱口；将唾液吐到杯中。
真核生物基因组总DNA的提取与鉴定
02
使用酚和氯仿时要注意 安全，避免直接接触皮 肤和吸入蒸汽。
03
储存和使用乙醇时要远 离火源，避免明火。
04
在操作过程中要保持实 验台面的清洁和整洁， 避免交叉污染。
03 真核生物基因组总DNA 的纯化
纯化的目的和重要性
目的
去除细胞碎片、蛋白质和其他杂质， 获得高纯度的基因组DNA。
重要性
纯度高的DNA更适用于后续的分子生 物学实验，如PCR、酶切、测序等。
学实验和基因组学研究。
03
实验操作简便
整个提取过程操作简便，易于掌握，为实验室和研究人员提供了可靠的
DNA提取方案。
对未来研究的展望
深入研究基因组结构
基于提取得到的真核生物基因组总DNA，可以进一步深入 研究基因组的复杂结构和功能，揭示更多关于真核生物的 遗传奥秘。
拓展应用领域
提取得到的DNA可以应用于基因组学、分子生物学、遗传 学等多个领域，为未来的研究提供更多可能性。
05 DNA提取与鉴定的应用 前景
在遗传学研究中的应用
基因组测序
通过提取和鉴定DNA，可以对整个基因组进行测序，从而研究基因组的序列结构和变异，揭示生物体的遗传特征 和进化关系。
遗传性疾病研究
DNA提取与鉴定有助于研究遗传性疾病的病因和发病机制，为遗传性疾病的诊断、预防和治疗提供科学依据。
在生物技术中的应用
真核生物基因组总DNA的提取与 鉴定
contents
目录
• 引言 • 真核生物基因组总DNA的提取 • 真核生物基因组总DNA的纯化 • DNA质量的鉴定 • DNA提取与鉴定的应用前景 • 结论
01 引言
真核生物基因组DNA简介
真核生物基因组DNA
真核生物组织DNA的提取
加入等体积的饱和酚或氯仿-异戊醇混 合液，颠倒混匀，离心，使蛋白质和 DNA分离。将上层水相转移到新的离 心管中，重复此步骤直至达到所需的 纯度。
DNA纯化
沉淀DNA
在DNA水相中加入等体积的异丙 醇或无水乙醇，混匀后静置几分 钟，使DNA沉淀下来。
洗涤和干燥
弃去上清液，用70%乙醇洗涤 DNA沉淀，去除残余的盐分和杂 质。风干DNA沉淀，用适量的TE 缓冲液或无菌水溶解DNA。
真核生物组织DNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
01
实验准备
实验材料
离心管和吸头
新鲜或冷冻的真核生物组织 样本
01
02
03
石英砂和研钵
滤纸和棉签
04
05
10%的氢氧化钠溶液
实验试剂
1M Tris-HCl（pH8.0）
01
02
0.5M EDTA（pH8.0）
DNA的双螺旋结构
DNA以双螺旋结构存在，两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕，碱基对 位于双螺旋内侧。
DNA的稳定性
DNA分子具有相对稳定性，但在特定条件下，如高温、酸碱处理等，其结构可能发生改 变或降解。
DNA的提取方法
01
02
03
酚-氯仿抽提法
利用酚和氯仿对DNA和蛋 白质的不同溶解度，将 DNA从细胞或组织中释放 出来，并去除杂质。
展望
随着分子生物学技术的不断发展，真核生物组织DNA提取技术将不断完善和优化，为生命科学研究提 供更加精准和高效的实验材料。同时，该技术还可应用于临床诊断、法医学等领域，为相关领域的发 展提供有力支持。
基因工程实验流程
基因工程实验流程1.选择目标基因：首先，确定要研究或改造的目标基因。
这个基因可以是来自任何生物的DNA序列，包括原核生物和真核生物，甚至可以是合成的DNA片段。
2.基因分离：将包含目标基因的DNA从生物体中分离出来。
这可以通过提取目标生物体的基因组DNA，然后使用特定的酶切酶将目标基因从DNA中剪切出来。
3.DNA克隆：将目标基因插入到合适的载体中，形成重组DNA分子。
常用的载体包括质粒、病毒或人工染色体。
重组DNA分子可以通过转化、感染或转染等方法导入到宿主细胞中。
4.转化宿主细胞：将重组的DNA分子导入到适当的宿主细胞中。
这可以通过热冲击、电穿孔、化学方法或用载体病毒感染的方式实现。
在这一步中，多个宿主细胞可能被转化，以增加目标基因的表达量。
5.分子鉴定：通过PCR反应、限制性酶切、DNA测序等方法，对导入宿主细胞的重组DNA分子进行鉴定和验证。
这可以确认目标基因是否被正确克隆和定位在宿主细胞的基因组中。
6.蛋白质表达：通过转录和翻译，使目标基因在宿主细胞中转录成mRNA，然后翻译成蛋白质。
这个过程可以通过合适的启动子和转录因子来调控。
7.蛋白质纯化：通过细胞裂解和各种分离技术，获得纯度较高的目标蛋白质。
这包括离心、超滤、电泳等技术，可以去除其他细胞组分和杂质。
8.蛋白质功能研究：对纯化的目标蛋白质进行功能研究，了解其生物学功能和相互作用。
这可以通过基因敲除、突变、结构分析、生物活性检测等方法进行。
9.结果分析和确认：对实验结果进行数据分析和统计，确保实验结果的可靠性和重复性。
这包括基因表达水平、蛋白质功能、相互作用准确性和可靠性的验证。
10.应用和进一步研究：根据实验结果，根据需要对目标基因进行进一步改造或利用。
这可能涉及到设计新的实验和技术，以满足具体的应用需求。
总结：基因工程实验流程是一个复杂的过程，需要多个步骤和技术的相互协作。
这个过程涉及到基因选择、分离、克隆、转化、鉴定、蛋白质表达和纯化等多个关键步骤。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
提取总dna的方法
提取总dna的方法
提取总DNA的方法是指从生物体中获得并分离出所有的DNA分子，包括核基因组、线粒体基因组、质粒等。
以下是一种常用的总DNA提取方法，即苯酚-氯仿提取法。
1. 准备样品：将需要提取总DNA的生物样品（如细菌、植物、动物组织）收集并研磨成细胞悬浮液或粉末状。
注意，样品的处理方式应根据不同的生物物种和细胞类型来选择。
2. 细胞破碎：将研磨好的样品加入细胞破碎缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液），使细胞破碎并释放出DNA。
同时，加入蛋白酶K以消化细胞膜和核酸酶以降解RNA。
3. 乙醇沉淀：将破碎后的细胞溶液离心，上清液中含有DNA、RNA和其他杂质。
将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的冷乙醇（约70%浓度），混合并静置，使DNA沉淀出来。
4. 洗涤和纯化：使用75%的乙醇溶液洗涤沉淀下来的DNA，以去除残留的盐和其他杂质。
将洗涤后的DNA溶解于Tris-EDTA缓冲液中，并使用紫外光谱仪检测DNA的浓度，以确保提取的DNA质量和浓度。
以上简述了一种常见的总DNA提取方法，但在实际操作中根据研究对象的不同
和实验目的的需求，可能需要对上述步骤进行一些修改和优化。
例如，在细胞破碎过程中，可以使用超声波破碎法或冻融破碎法来替代机械研磨；在乙醇沉淀步骤中，可以加入盐酸或乙酸以增加DNA的沉淀效率。
总之，总DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤，为后续的分子生物学实验提供了DNA样本。
随着DNA提取技术的不断改进和发展，提取出来的DNA 可应用于许多领域，包括基因检测、测序、重组DNA技术和基因工程等。
探究 实践 DNA的粗提取和鉴定 教学设计
《DNA的粗提取和鉴定》教学设计一、教学目标概述DNA粗提取与鉴定的原理、过程。
二、教学重难点DNA粗提取的原理、DNA鉴定的原理三、教学过程导入新课大家回忆一下，真核细胞中DNA主要存在于在细胞核中的染色体上， DNA，蛋白质以及少量的RNA一起构成染色体，那么我们怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？并鉴定我们提取的DNA？本节课我们就来解决这些问题，基本思路：我们的基本思路是利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
基本原理：首先DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可初步分离DNA 与蛋白质。
其次 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同。
DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？我们来看一下这个曲线。
（当NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；当NaCl溶液浓度大于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐增大。
）利用这一点我们可以选择2mol/ L盐浓度使DNA充分溶解，进而进行DNA的鉴定。
DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性较大，①蛋白酶—水解蛋白质，对DNA没有影响。
②高温—大多数蛋白质在60～80℃时变性沉淀,而DNA在80℃以上才会变性。
③洗涤剂—溶解细胞膜，去除脂质、蛋白质;但对DNA没有影响。
怎样鉴定我们提取的物质是DNA呢？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。
实验目的：（1）了解DNA的物理化学性质；理解DNA粗提取和鉴定的原理，（2）学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA进行鉴定实验材料：不同生物的组织中DNA含量不同。
在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？哺乳动物成熟的红细胞不合适，因为它没有细胞核，细胞中没有DNA。
真核生物基因组DNA的提取和含量测定
实验报告课程名称： 生物化学实验 实验名称： 真核生物基因组DNA 的提取和含量测定 指导老师： 同组学生姓名： 廖杰 成绩：__________________真核生物基因组DNA 的提取和含量测定【实验原理】 制备具有生物活性的大分子核酸，必需采取温和的制备条件，避免过酸、过碱的反应环境和剧烈的搅拌，防止核酸酶的作用，并要求在低温下进行操作 。
一、 真核生物基因组DNA 的提取本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法破碎组织细胞。
DNP 在L NaCl 中不溶解,而RNP 可溶解。
用无菌水溶解沉淀，加入蛋白酶消化液（含有蛋白酶K 和SDS ）。
１温和方法的破碎细胞而不产生机械剪切以致破坏DNA 的完整性， ２可以变性Dnase ，３还可以去除部分的蛋白。
４使核蛋白体从DNA 上解离。
然后加RNase 以去除RNA ，再用苯酚:氯仿抽提法反复抽提提取DNA 苯酚:氯仿抽提法：酚、氯仿是有机溶剂，能有效地使蛋白质变性。
纯酚在与水混合时处于下层。
然而有机相和水相会难于分开。
专业： 药学 姓名： 阿卜杜合力力 学号： 56 日期： 地点： 生化实验室 装订 线若使用酚：氯仿混合物抽提，由于氯仿的比重较大，可在很大程度上解决这个问题，促进两相的分离。
异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。
变性蛋白一般集中在两相之间的界面层，而脂类则有效地分配在有机相中，核酸则被留于上层水相。
该法其具有操作条件比较温和，能迅速使蛋白质变性并同时抑制核酸酶的活性，可得到具有生物活性的高聚合度的核酸等优点。
但其操作步骤较为繁琐，去除蛋白质需要反复进行多次。
砷盐、氟化物、柠檬酸、EDTA等可抑制DNase的活性；皂土等可抑制RNase 的活性。
收集上清液后用乙醇沉淀DNA，最后用TE缓冲液溶解DNA，并用紫外吸收法测定DNA的含量及纯度。
二、紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度1．紫外分光光度法测定核酸含量：由于DNA在260nm处有最大的吸收峰，因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，吸光度A值为1相当于大约50μg /ml双链DNA。
实验一 真核生物基因组DNA的提取和分析
（八）废弃液体除指定有专门容器收集者外，应倒 入水池，并放水冲走，固体废物倒入废物缸内。 动物尸体应放入指定的容器中。
（九）实验过程中自己不能解决或决定的问题，切 勿盲目处理，应及时向指导教师反映取得帮助。
（十）实验完毕，须将试剂排列整齐，整理好公用 物品，将仪器洗净收起。檫净实验台，请指导教 师检查，允许后方可离开。
1) 破碎细胞 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于真核细胞 基因组较大，在纯化出的DNA的操作中应注意动作轻 柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学 作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA 3) 沉淀核酸
DNA提取和分析步骤图解
SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
二苯胺法
紫外分光光度法分析
答辩ppt内容： 实验目的，意义，原理，实验方法选择，预计结果及数据表现形式， 实验难点及可能出现问题，可能出现的实验结果偏差及解释
答辩安排： 最后一周答辩，每组时间控制为20分钟演讲，10分钟提问。
设计性实验题
1 免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定。 2 人血清白蛋白的提取纯化及分子量的测定。 3 蛋清中溶菌酶的分离鉴定。 4 小鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及酶动力学研究。 5 如何从动物心肌细胞中提取乳酸脱氢酶同工酶？ 6 如何提取真核细胞中的线粒体基因组DNA？ 7 请设计实验从基因及蛋白表达角度讨论老年痴呆症模型小鼠与人类老年痴 呆症的可比较性 （即小鼠模型建立的可靠性） 8 请设计实验从基因及蛋白表达角度追踪老年痴呆模型小鼠发病期典型变化， 及给药治疗后效果评价 9 蛋白质的表达具有一定的组织特异性，请以实验小鼠胰腺和肝脏为材料设 计实验检测羧肽酶A1酶原(procarboxypeptidase A1)和白蛋白(Albumin) 并计算这两种蛋白质在胰腺和肝脏中的表达量。 10 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）在肝脏中有三种亚型，即细 胞色素氧化酶1，2和3，请以实验小鼠肝脏为材料设计实验检测这三种酶的 表达并计算它们的表达量。
真核细胞基因组DNA的提取与鉴定
真核细胞基因组DNA的提取与鉴定一、目的要求掌握真核细胞基因组DNA的提取方法，掌握紫外分光光度法测定DNA含量的方法和DNA电泳方法。
重点实践植物 DNA 的抽提，掌握 CTAB 法快速抽提白三叶草 DNA 。
二、基本原理植物DNA的抽提常采用两种方法：（1）SDS 法：离子去污剂，过程长，纯度高；（2）CTAB 法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作) 。
CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。
CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM ）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl ）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
经离心弃上清后，CTAB-核酸复合物再用70－75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。
再经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA 沉淀分离出来。
现生物试剂公司多依据此原理，经过改造，以吸附膜吸附DNA，除去杂质，从而减少了使用有害药品氯仿抽提的步骤。
琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的标准方法之一。
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，将其熔化在所需缓冲液中使成清澈、透明的溶液，然后倒入胶模令其固化。
不同浓度的琼脂糖形成的固体基质具有不同的密度（或孔隙度），因此适宜分离不同大小的DNA片段。
在电场中，DNA分子主要因其分子大小不同而被分离。
三、实验步骤（具体见试剂盒操作说明）植物基因组DNA的提取（参考步骤）1．采集适量幼嫩叶片，用液N2 研成粉末，0.4 g 装入1.5ml 离心管中（-20 ℃预冷）。
2．预热 1.5 ×CTAB 到95 ℃，加1ml 到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。
真核细胞基因组DNA的提取与鉴定
真核细胞基因组DNA的提取与鉴定一、目的要求掌握真核细胞基因组DNA的提取方法，掌握紫外分光光度法测定DNA含量的方法和DNA电泳方法。
重点实践植物 DNA 的抽提，掌握 CTAB 法快速抽提白三叶草 DNA 。
二、基本原理植物DNA的抽提常采用两种方法：（1）SDS 法：离子去污剂，过程长，纯度高；（2）CTAB 法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作) 。
CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。
CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM ）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl ）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
经离心弃上清后，CTAB-核酸复合物再用70－75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。
再经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA 沉淀分离出来。
现生物试剂公司多依据此原理，经过改造，以吸附膜吸附DNA，除去杂质，从而减少了使用有害药品氯仿抽提的步骤。
琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的标准方法之一。
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，将其熔化在所需缓冲液中使成清澈、透明的溶液，然后倒入胶模令其固化。
不同浓度的琼脂糖形成的固体基质具有不同的密度（或孔隙度），因此适宜分离不同大小的DNA片段。
在电场中，DNA分子主要因其分子大小不同而被分离。
三、实验步骤（具体见试剂盒操作说明）植物基因组DNA的提取（参考步骤）1．采集适量幼嫩叶片，用液N2 研成粉末，0.4 g 装入1.5ml 离心管中（-20 ℃预冷）。
2．预热 1.5 ×CTAB 到95 ℃，加1ml 到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。
实验报告 植物基因组的提取和检测
四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA一、实验目的1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二、实验原理1.在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；2.SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来；3.苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三、实验材料1.设备移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心管2.材料植物幼嫩叶片3.试剂（1）细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.25%SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）（2）氯仿:异戊醇（24:1）（3）其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液四、方法和步骤0C水浴（金属浴）中加热备用；μ500L细胞提取液于651、取2、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水冲洗干），去除叶脉，剪成细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；0C预热的细胞提取液中，迅速摇匀，65500、取0.1g粉末（大约两勺半）转移至μL3水浴（金属浴）中保温30min，10min左右温和颠倒混匀一次；第 1 页四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA4、从水浴（金属浴）中取出离心管，加等体积(约500μL)氯仿/异戊醇（24:1），室温下10000rpm×10min；5.将上清液转移到另一1.5mL离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等2/3体积的异丙醇，轻轻混匀，静置1min,使核酸沉淀下来，12000r/min× 5min，倒掉上清液；6、加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，静置5min,12000r/min× 2min,去除上清液，再加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，放置5min;7、12000r/min× 10min后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉，室温静置干燥；8、干燥后，加入20μLTE缓冲液，溶解DNA，做好标记；9、取5μL溶液，0.7%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小和质量。
基因组DNA抽提操作流程
基因组DNA抽提操作流程
1.收集样本：首先需要从待测样本中收集细胞。
这可以是任何包含细胞核的生物组织，如血液、组织样本或细菌培养物。
选择合适的样本类型根据具体的研究目的和实验要求。
2.细胞裂解：将收集到的样本进行细胞裂解，使细胞内部的DNA释放出来。
这可以通过一系列方法实现，如物理破碎、化学裂解或酶的作用。
具体使用哪种方法取决于待测细胞的特点和实验室的设备条件。
3.蛋白质去除：在细胞裂解的过程中，细胞核中的DNA会与蛋白质连接在一起形成复合物，需要进一步去除蛋白质。
可以使用蛋白酶对DNA溶液进行处理，将蛋白质降解分解，并使用盐溶液或酒精进行去除。
4.DNA沉淀：将去除蛋白质的DNA溶液中加入盐溶液或酒精，使DNA 沉淀下来。
这可以通过离心的方法加快DNA的沉淀速度。
离心操作常常需要根据DNA溶液的体积和设备的转速进行优化。
5. 溶解DNA：将沉淀下来的DNA溶于适当的缓冲液中，使其稳定并易于后续的分析和实验。
常用的溶解液包括TE缓冲液（含有Tris-HCl和EDTA）或纯化水。
6.检测DNA浓度和纯度：使用光谱分析仪或比色法等方法检测DNA的浓度和纯度。
这可以帮助确定DNA样本的适用性和是否需要进一步纯化。
需要注意的是，基因组DNA抽提的操作步骤可能会因实验目的和样本类型的不同而有所差异。
在具体操作过程中，应该根据实验室的设备和实验条件进行优化和调整。
同时，实施基因组DNA抽提操作的人员还需要注意安全规范，避免对人体和环境造成潜在的危害。
实验7基因组DNA的提取(综合性设计实验)
展望
未来，基因组DNA提取技术将更加广泛应 用于生命科学、医学、农业等领域的研究和 实践中，为人类认识生命本质、解决重大疾 病和促进农业发展等方面发挥重要作用。同 时，随着技术的进步和应用领域的拓展，基
因组DNA提取技术也将面临更多的挑战和 机遇。THANK YOU提取效率低详细描述
在某些情况下，由于实验条件 或操作不当，可能导致DNA的 提取效率较低。这可能表现为 提取时间较长，获得的DNA量 较少，甚至出现DNA降解的情 况。这可能是因为某些试剂使 用不当或实验操作失误所导致 。
DNA纯度与质量的评估
总结词：纯度高 总结词：纯度低
详细描述：通过电泳和紫外光谱分析等方法，可以 评估所提取DNA的纯度和质量。纯度高的DNA表现 为电泳时条带单一、无杂质，紫外光谱分析中 A260/A280比值接近1.8，说明DNA无蛋白质和 RNA污染。
酚-氯仿法
利用酚和氯仿的混合液反复抽提细胞破 碎后的上清液，使蛋白质变性并去除， 留下基因组DNA。
VS
试剂盒法
利用特定的试剂盒，通过细胞裂解、洗涤 、纯化等步骤，高效地提取基因组DNA 。
实验中使用的试剂与设备
试剂
细胞培养基、蛋白酶K、酚-氯仿混合液、乙醇、洗涤缓冲液等。
设备
离心机、PCR仪、电泳仪、移液器等。
03
实验步骤
样品准备与处理
01
样品来源
选择合适的生物样品，如人类、 动物或植物组织，确保样品新鲜 且无污染。
样品处理
02
03
清洗与去杂质
将样品进行匀浆或研磨，以充分 破碎细胞结构，释放出基因组 DNA。
去除样品中的蛋白质、脂肪和糖 类等杂质，以避免干扰后续的 DNA提取。
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蛋白酶K的作用
•水解组蛋白，促进DNA与组蛋白的分开。 DNA酚抽提法示意图
DNA的沉淀
无水乙醇沉淀 ➢ 沉淀前往往加入NaAc等盐离子，作用是中和
核酸分子表面的负电荷，有助于分子之间的 聚集。 ➢ 无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉 淀析出，无水乙醇使用前冰冻，可以减少 DNA沉淀析出过程释放热量对DNA的损伤。
真核生物基因组 DNA的提取（一）
1.低渗去除红细胞
2.裂解白细胞
真核生物基因组 DNA的提取（二）
3.酚抽提
500μl
4.无水乙醇沉淀
真核生物基因组 DNA的提取（三）
5.DNA沉淀的洗涤与干燥
6.DNA溶解与电泳鉴定
三 结果
琼脂糖凝胶电泳鉴定
EB可嵌入到 碱基平面，使 核酸在 UV 激 发下发出桔红
TE
10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA
上样缓冲溶液（6 × 或10×）
甘油/蔗糖（增加DNA溶液的密度） 溴酚蓝（电泳指示剂，约相当于300bpDNA） 二甲苯氰（电泳指示剂，约相当于4000bpDNA）
0.5~1.4%琼脂糖凝胶
水相的吸取
SDS（去垢剂）
基因组DNA的分离与纯化
一、酚抽提法的原理
以含EDTA、SDS的裂解液裂解细 胞，经蛋白酶K消化后，用PH8.0的 Tris 饱和酚抽提蛋白质，离心后取上 层水相，无水乙醇沉淀DNA。
二、技术路线
破膜 提纯 沉淀、洗涤
细胞膜碎片，细 胞器，脂、蛋白 质，DNA，RNA
去除脂、 蛋白质
浓缩DNA、 去盐杂质
色荧光。
EB与DNA的结合
三 结果
琼脂糖凝胶电泳鉴定
he End
裂解液的作用
EDTA
乙二胺四乙酸(络合物) 二价金属螯合剂，抑制DNA酶
裂
解
SDS
十二烷基磺酸钠（去污剂） 使细胞膜破裂；将核酸释放出来；
使蛋白质变性
液
Tris -HCl 缓冲夜，维持稳定的pH值（8.0）
酚的作用
•酚可以使蛋白质变性沉淀、抑制DNA酶活性。 •PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA进入水相 。