多肽合成蛋白测序

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临床检验仪器第十四章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题

临床检验仪器第十四章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题

第十三章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪一、名词解释1.荧光标记引物法:将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端,称为荧光标记引物法。

2.荧光标记终止底物法:将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上,称为荧光标记终止底物法。

3.多色荧光标记引物法:是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。

将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端,当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后,便形成了一组(4 种)标记引物。

特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。

4.多色荧光标记终止底物法:是D NA 测序反应常用的一种荧光标记方法。

将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。

反应中将4种d dNTP 分别用4种不同的荧光染料标记,带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延伸终止的同时,也使该片段3′端标上了一种特定的荧光染料。

根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。

5.Edman降解法:是检测蛋白质一级结构的方法。

在弱碱条件下,多肽链N末端N H2与P ITC 反应,生成PTC-多肽。

在无水强酸如三氟醋酸的作用下,可使PTC-多肽形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。

剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环。

如此不断循环,可依次使多肽链的氨基酸逐一降解,形成A TZ 衍生物。

ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的P TH 氨基酸。

6.Sanger 双脱氧链末端终止法:是检测D NA 序列的一种方法。

其原理是利用P CR,但反应体系中除了dNTP 外,还有ddNTP。

ddNTP 可掺入到正在延伸的DNA 链中,但不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键,从而使正在延伸的DNA 链在此终止。

由于存在ddNTP 与dNTP 的竞争,生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。

7.平板电泳型DNA测序仪:为D NA 测序仪的一种类型。

平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间,聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少,因此又称为超薄片层凝胶电泳。

蛋白de novo测序

蛋白de novo测序

百泰派克生物科技
蛋白de novo测序
蛋白质序列即蛋白质的一级结构,是指组成蛋白质的氨基酸的排列顺序,在很大程度上决定了蛋白质或多肽的高级结构和生物学功能。

因此,蛋白质序列测定有助于研究功能蛋白或活性多肽作用的机理,也为人工合成活性多肽提供了依据。

蛋白
de novo测序即蛋白从头测序,蛋白从头测序利用串联质谱技术对目标蛋白质进行
全序列分析,不依赖已有的序列数据库,非常适合一些新发现的蛋白质或者数据库中无法匹配到的蛋白质的序列分析。

蛋白从头测序的大致流程为:首先对蛋白样品进行多重酶切;将酶切片段进行质谱分析;然后分析质谱数据进行无偏差序列鉴定;再利用相应软件进行序列反向验证;最后拼接出完整的蛋白序列。

百泰派克生物科技基于高分辨率质谱仪Obitrap Fusion Lumos结合丰富的生物信
息学分析经验,可提供全新一代蛋白de novo测序服务技术包裹,能够实现对单克隆抗体一级结构序列,蛋白质序列和突变进行快速准确的分析,欢迎免费咨询。

多肽合成技术

多肽合成技术

精心整理多肽合成技术多肽化学已经走过了一百多年的光辉历程,1902年,EmilFischer首先开始关注多肽合成,由于当时在多肽合成方面的知识太少,进展也相当缓慢当时合成采用了苯甲酰,乙酰保护,脱去相当困难,而且容易导致肽链断裂。

直到1932年,MaxBergmann等人开始使用苄氧羰基(Z)来保护α-氨基,该保护基可以在催化氢化或氢溴酸的条件下定量脱除,多肽合成才开始有了一定的发展。

到了20世纪50年代,随着越来越多的生物活性多肽的发现,大大推动了有机化学家们对多肽合成方法以及保护基的研究,因此这一阶段的研究成果也非常丰富,人们合成了大量的生物活性多肽,包括催产素(oxytocin),胰岛素等,同时在多肽合成方法以及氨基酸保护基上面也取得了不少成绩,这为后来的固相合成方法的出现也提供了实验和理论基础。

也就是这个阶段,FredSanger 发明了氨基酸序列测定方法,并为此获得了1958年的Nobel化学奖。

还是他后来发明了DNA序列检测方法,并于1980年再次获得了Nobel化学奖,成为到目前为止唯一获得两次Nobel化学奖的科学家。

1963年,Merrifield 提出了固相多肽合成方法(SPPS),这个在多肽化学上具有里程碑意义的合成方法,一出来,就由于其合成方便,迅速,现在已经成为多肽合成的首选方法,随后的发展也证明了该方法不仅仅是一种合成方法,而且也带来了有机合成上的一次革命,并成为了一支独立的学科,固相有机合成(SPOS)。

当然,Merrifield也因此荣获了1984年的Nobel化学奖。

也正是Merrifield,他经过了反复的筛选,最终屏弃了苄氧羰基(Z)在固相上的使用,首先将叔丁氧羰基(BOC)用于保护α-氨基并在固相多肽合成上使用,其可以在酸性条件下定量的脱除,反应也非常迅速,在30min就可以反应完全。

由于叔丁氧羰基(BOC)方法中,氨基酸侧链的保护基团大多基于苄基(Bzl),因此也称为BOC-Bzl策略。

生物体内的多肽合成

生物体内的多肽合成

生物体内的多肽合成生物体内的多肽合成是一个非常重要的生物化学过程,多肽是由氨基酸聚合而成的,具有多种功能,如激素、抗生素、酶等生物活性。

多肽合成是生命的一个重要过程,对生物体维持正常而健康的运转至关重要。

多肽合成的两种途径多肽合成的途径通常有两种:核糖体翻译途径和非核糖体翻译途径。

1. 核糖体翻译途径在核糖体翻译途径中,信息在DNA上转录成为mRNA,然后mRNA在核糖体上依序翻译成为蛋白质。

最初的起始信号是由核糖体识别mRNA上的一个AUG密码子,始动子核心序列,这个AUG密码子可以编码甲硫氨酸。

翻译过程包括了起始、延长和终止三个步骤。

控制这些步骤的是蛋白合成因子,它们在起始和终止过程中,分别与mRNA和核糖体结合,开始蛋白质的合成过程。

2. 非核糖体翻译途径在非核糖体翻译途中,RNA序列通过一系列的加工和嵌合过程形成了RNA导向机器。

这个机器可通过切割已知的RNA模板来准确和定向的对RNA进行嵌合,从而形成一条新的RNA。

多肽合成的过程多肽合成的过程是一个很复杂的化学反应链,主要包括了以下几个步骤:1. 起始每个多肽合成都需要一个起始物质,这个物质是一个特殊的tRNA,称为Met-tRNA。

这个tRNA携带着甲硫氨酸作为起始氨基酸,并且识别与之结合的起始密码子AUG。

2. 伸长在伸长过程中,tRNA和多肽由一种酶催化称为肽酰-转移酶,同时租借一个辅助因子,叫做肽肽化酶。

这个过程是通过水解酰胺键的羧肽键实现的,将tRNA上的氨基酸和多肽链上的羧酸基转化为一个新的酰胺键,将原有的tRNA释放出来。

3. 终止当遇到终止密码子UAA、UGA或UAG时,肽链停止往下生长,并且释放出来。

在这个过程中还需要其他的终止因子,并且在其它细胞中还需要复合物的辅助。

多肽合成的调控多肽合成是一个非常复杂、有序的化学反应,它需要大量的辅助因子和各种蛋白质的参与,而这些蛋白质的参与需要受到调控。

多肽合成的调控主要是通过mRNA的数量和mRNA翻译的速度来进行的,当细胞需要一种特定的多肽时,它就会开启相应的基因,并且产生足够的mRNA,从而达到提高合成速度的目的。

多肽和蛋白质的化学合成过程

多肽和蛋白质的化学合成过程

多肽和蛋白质的化学合成过程多肽和蛋白质是构成生命体的基础。

多肽是由数个氨基酸结合而成的化合物,而蛋白质则是由数个多肽链组成的复杂有机物。

它们在生化反应、细胞信号传递、免疫系统等方面都发挥着至关重要的作用。

原本只存在于生物体内的多肽和蛋白质,现在已经得到了人工的化学合成方法,为科学和医学研究提供了巨大的便利。

在多肽和蛋白质的化学合成过程中,最重要的步骤就是氨基酸的连接。

氨基酸是多肽和蛋白质的组成单元,每个氨基酸分子都包含有一个氨基基团(NH2)、一个羧基团(COOH)和一个侧链。

在化学合成时,我们需要将氨基酸的羧基和氨基通过化学键连接起来,形成肽链。

这个过程被称为“肽键形成”。

实现肽键形成的难度主要在于,连接两个氨基酸的反应需要在合适的条件下进行,避免受到空气、水和温度等外在因素的干扰而导致反应失败。

因此,化学家们在肽合成反应的过程中,必须选用适合的方法来控制反应条件,使其保持在理想的状态下进行。

一种常用的合成方法是固相合成法。

这种方法先将第一个氨基酸通过其中的侧链和选择性化学反应物连接在固相合成介质上生成支架,然后再依次加入接下来的氨基酸。

反应的过程可以通过依靠不同的化学反应物来控制反应条件,从而避免了其他因素的影响。

除了固相合成法,在溶液中的合成法也是一种常见的方法。

这种方法需要通过不同的溶剂、反应物和温度等条件来控制反应过程。

反应层次多、选择性差和带有多种副反应是这种方法的主要难点。

化学家们还在不断改进这些方法,近年来也发展出了新的多肽和蛋白质化学合成技术。

其中,化学合成的核心原理是通过对氨基酸结构的改变,在不改变氨基酸序列的情况下,增加和改变功能基团的数量和分布,从而解决肽链性质差异的问题。

另一种技术是利用天然的酵素做反应催化剂,通过营造特定的条件来加速反应,提高合成效率。

通过以上方法可以合成不同类型和数量的多肽和蛋白质,从而进行真正意义上的生命科学研究。

这些研究为疾病治疗、药物发现、功能化学和新材料等领域的发展提供了重要的支持。

蛋白质N末端测序

蛋白质N末端测序

百泰派克生物科技
蛋白质N末端测序
蛋白质N末端即氨基(-NH2)端,是蛋白质合成的起始端。

蛋白质N末端测序就是对N-末端的氨基酸种类和排列顺序进行准确分析。

随着生命科学研究和测序技术
的发展,蛋白质末端序列分析的方法也在不断更新、进步。

目前,测定蛋白质或多肽N末端的方法主要有Sanger法、酶降解法、Edman法、二硝基氟苯法(FDNB法)、丹磺酰氯法(DNS法)和基于质谱的方法,其中Edman法和质谱法在N末端序列分
析中应用最广。

百泰派克生物科技提供基于质谱法和Edman法的蛋白质N末端测序一站式科研技术服务,用于蛋白或活性多肽N端序列分析,还可用于确认重组蛋白表达情况,如是否完整表达、表达过程是否发生断裂以及N端序列是否发生修饰等。

百泰派克生物科技还可根据需求提供定制化技术服务,欢迎免费咨询。

探秘蛋白质从头测序技术的原理与流程

探秘蛋白质从头测序技术的原理与流程

探秘蛋白质从头测序技术的原理与流程蛋白质从头测序(De Novo Sequencing)是指不依赖于任何已知蛋白质或核酸数据库,仅依赖于实验数据,来确定蛋白质或多肽的氨基酸序列的技术。

这种技术在新蛋白质或修饰蛋白质的鉴定中尤为重要。

一、原理:从头测序通常利用质谱技术(MS)。

蛋白质或多肽在质谱仪中被电离,产生正离子。

这些离子在碰撞细胞中与碰撞气体(例如氩气)产生碰撞,使多肽或蛋白质分裂成一系列的小片段离子。

这些碎片离子的质谱被称为串联质谱(MS/MS)。

MS/MS中的碎片离子是由于蛋白质或多肽的肽键断裂形成的,所以其质量差表示了两个相邻的氨基酸残基的质量。

二、流程:1.样品准备:提纯的蛋白质或多肽样品被准备好并通过适当的方法送入质谱仪中。

2.电离:使用电喷雾电离(ESI)或激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)技术,将蛋白质或多肽电离成离子。

3.质谱分析:首先通过质谱仪测量蛋白质或多肽的母体离子的m/z值,然后选择特定的母体离子进行进一步的碰撞以产生碎片离子。

4.串联质谱分析:母体离子在碰撞细胞中与碰撞气体产生碰撞,导致蛋白质或多肽分裂并形成一系列的碎片离子。

这些碎片离子的m/z值被测量,并由此得到串联质谱。

5.数据分析:使用专门的软件,如Mascot、PEAKS等,对串联质谱数据进行分析,通过比对碎片离子之间的质量差异来推断原始蛋白质或多肽的氨基酸序列。

6.验证:通过其他实验方法,如Edman降解法或合成对应的多肽进行验证。

图1。

蛋白质从头测序技术的发展在很大程度上受益于质谱技术的进步。

随着仪器灵敏度和分辨率的提高,以及数据处理软件的进步,这一技术在蛋白组学和生物医药领域的应用将更为广泛。

多肽与蛋白质HPLC分析和纯化

多肽与蛋白质HPLC分析和纯化

第一章多肽和蛋白质的反相HPLC分析与纯化反相高效液相色谱(RP-HPLC)已经成为一种分析和纯化生物分子广泛而可靠的方法。

RP-HPLC在肽、蛋白质分析和纯化方面的重要作用在于它的分离度:RP-HPLC能够分离具有几乎同样序列的多肽,这不仅包括那些胰岛素消化物中的小肽,还包括更大的肽。

仅相差一个氨基酸残基的多肽通常可以用RP-HPLC分离,如图1所示的胰岛素变异物的分离。

胰岛素变异物的分子量都在5300左右,只是在氨基酸序列上有轻微的不同,即使这样,大部分的变异物都可以用RP-HPLC分离。

特别的是,反相色谱能分离人和兔的胰岛素,两者仅在于一个亚甲基的不同——兔胰岛素有一个苏氨酸,而人胰岛素有一个丝氨酸!RP-HPLC对相近胰岛素变异物的分离图 1.RP-HPLC分离含有一个不同氨基酸的人和兔胰岛素。

色谱柱:VYDAC 214TP54 洗脱液:27-30%ACN+0.1%TFA,1.5mL/min,25min。

科学文献中已有很多用RP-HPLC分离相似多肽的例子。

含有一个氧化蛋氨酸的胰岛素样生长因子与其未氧化态类似物已得到分离,白细胞介素-2突变蛋白也已经得到分离。

在最近的论文中,Kunitani及其同事提出,RP-HPLC的保留时间能提供保留在反相表面的蛋白质的结构信息。

他们研究了30种白细胞介素-2 突变蛋白,并分离了几乎相同的突变蛋白。

含氧化蛋氨酸的白介素与其自然状态得到分离,另外,单个氨基酸取代基也被与其自然状态分离。

他们得出结论:蛋白质的结构在反相分离中非常重要,同时,RP-HPLC也能用来研究蛋白质的结构。

在该过程中,他们展示了RP-HPLC技术对相似多肽的分离能力。

RP-HPLC用于分离酶消化产物中的肽碎片,纯化天然肽及合成肽。

制备RP-HPLC常常用于纯化克及毫克量的合成肽。

RP-HPLC能用于分离血红蛋白变体,鉴别微粒种类,研究酶亚基和细胞功能。

RP-HPLC还能纯化用于序列测定的微量级肽,并纯化治疗用的毫克级到千克级生物技术衍生多肽。

多肽蛋白质N-端序列分析

多肽蛋白质N-端序列分析
图 1 Edman 降解法示意图
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多肽蛋白质 N-端序列分析
报告编号:«报告编号» b) 实验方法
1) 液体样品处理: 加 40μl 甲醇到 Prosorb 装置的 PVDF 膜上,待滤过后;加入 40μl 0.1%TFA 溶液, 待滤过后;再加入供试品,供试品的量需大于 50pmol,滤过后;再分别加入 两次 600μl 0.1%TFA 进行滤过。将 Prosorb 放入已预热至 50℃的加热器中烘干, 用 PorSorb Punch(图 1)切下 PVDF 膜,上样。
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多肽蛋白质 N-端序列分析
报告编号:«报告编号»
8. 结论
综上所述,供试品«供试品名称»(批号:«供试品批号»)的 N 端序列为:xxxx
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多肽蛋白质 N-端序列分析
报告编号实验原理edman降解法是异硫氰酸苯酯pitc在弱碱tma条件下与蛋白质n端氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽ptc蛋白质然后在无水强酸tfa条件下n端的第一个残基从完整的多肽蛋白链上以2苯氨基噻唑啉酮atzaa的形式裂解下来之后在稀酸25tfa条件下atzaa转化为更加稳定的苯基乙内酰硫脲衍生物即pth氨基酸如图1生成的pthaa输送至高效液相色谱中进行在线分析剩下的多肽蛋白供试品可反复进行上述处理依次生成各种pthaa经液相系统色谱柱分离可以确定被测多肽蛋白质供试品n端的氨基酸排列顺序
报告编号:«报告编号»
多肽蛋白质 N-端序列分析
供试品:«供试品名称»
上海中科新生命生物科技有限公司 2015 年 4 月 19 日
报告编号:«报告编号»
«供试品名称»的多肽蛋白质 N-端序列分析
供试品名称:«供试品名称» 供试品批号:«供试品批号» 委托单位:«委托单位» 检测人员: 核验人员: 技术服务部负责人:

多肽合成技术

多肽合成技术

精心整理多肽合成技术多肽化学已经走过了一百多年的光辉历程,1902年,EmilFischer首先开始关注多肽合成,由于当时在多肽合成方面的知识太少,进展也相当缓慢当时合成采用了苯甲酰,乙酰保护,脱去相当困难,而且容易导致肽链断裂。

直到1932年,MaxBergmann等人开始使用苄氧羰基(Z)来保护α-氨基,该保护基可以在催化氢化或氢溴酸的条件下定量脱除,多肽合成才开始有了一定的发展。

到了20世纪50年代,随着越来越多的生物活性多肽的发现,大大推动了有机化学家们对多肽合成方法以及保护基的研究,因此这一阶段的研究成果也非常丰富,人们合成了大量的生物活性多肽,包括催产素(oxytocin),胰岛素等,同时在多肽合成方法以及氨基酸保护基上面也取得了不少成绩,这为后来的固相合成方法的出现也提供了实验和理论基础。

也就是这个阶段,FredSanger 发明了氨基酸序列测定方法,并为此获得了1958年的Nobel化学奖。

还是他后来发明了DNA序列检测方法,并于1980年再次获得了Nobel化学奖,成为到目前为止唯一获得两次Nobel化学奖的科学家。

1963年,Merrifield种方法,它具有合成方便,迅速,容易实现自动化,而且可以比较容易的合成到30个氨基酸左右多肽。

1.1.氨基酸保护基20种常见氨基酸,根据侧链可以分为几类:脂肪族氨基酸(Ala,Gly,Val,Leu,Ile,),芳香族氨基酸(Phe,Tyr,Trp,His),酰胺或羧基侧链氨基酸(Asp,Glu,Asn,Gln),碱性侧链氨基酸(Lys,Arg),含硫氨基酸(Cys,Met),含醇氨基酸(Ser,Thr),亚氨型基酸(Pro)。

多肽化学合成中氨基酸的保护非常关键,直接决定了合成能够成功的关键。

因为常见的20中氨基酸中有很多都是带有活性侧链的,需要进行保护,一般要求,这些保护基在合成过程中稳定,无副反应,合成结束后可以完全定量的脱除。

合成中需要进行保护的氨基酸包括:Cys,Asp,Glu,His,Lys,Asn,Gln,Arg,Ser,Thr,Trp,Tyr。

多肽和蛋白质的合成和表征

多肽和蛋白质的合成和表征

多肽和蛋白质的合成和表征多肽和蛋白质是生物体中不可缺少的大分子,它们参与着细胞信号传递、酶催化、抗体作用等多种生命活动。

这些大分子的组成单元是氨基酸,它们通过肽键的形成连接成不同长度和序列的多肽和蛋白质。

本文将简要介绍多肽和蛋白质的合成和表征。

一、多肽的合成1. 固相合成法固相合成法是一种基于无机载体的肽链从端到端互相扩展而形成多肽的方法。

其原理是,首先将C端氨基酸保护基固定在固相载体表面,然后将依次加入其余的氨基酸,每次加入后反应前需要对待接的氨基酸羧基和旧的氨基酸C端氨基进行保护处理,最后通过消除保护基进行反应,得到完整的多肽。

2. 液相合成法液相合成法是直接在溶液中进行合成的方法。

其原理是,在氨基酸官能团上挂载一定长度的保护基,不断进行反应脱保护来形成新的肽键,同样需要反复保护处理。

二、蛋白质的合成1. 原核系统表达法原核系统表达法是大肠杆菌等细菌原生质体内表达基因,从而得到蛋白质的方法。

该方法具有高效快捷、生产成本低等特点,但蛋白质表达具有一定难度,还可能出现蛋白质不纯和亲和性低等问题。

2. 哺乳动物细胞表达法哺乳动物细胞表达法主要通过细胞的“自我机制”,通过人工的基因植入,将目标蛋白合成成为细胞的“工具”。

该方法易于合成过量、促繁殖和质量优良的蛋白质,但成本较高。

三、多肽和蛋白质的表征1. 分子量的测定分子量是多肽和蛋白质的一个重要性质,可以通过凝胶过滤层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法进行测定。

2. 氨基酸序列的分析氨基酸序列是多肽和蛋白质确定的一个重要特征,可以通过胰蛋白酶、舍氏酶、丝氨酸氨基内酰胺酶等酶的酶解和质谱等技术进行分析。

3. 二级结构的测定二级结构是多肽和蛋白质的一种原始结构,可以通过核磁共振谱、圆二色光谱等方法进行测定。

本文介绍了多肽和蛋白质的合成和表征,相信读者对这两种大分子有了更加深入的了解。

在今后的生物医学领域和食品加工领域等方面,多肽和蛋白质的合成和表征将继续发挥重要作用。

蛋白质N端测序技术介绍.

蛋白质N端测序技术介绍.
序列分析的方法。此方法可避免因冲洗而使样品损失,同时在序列降解及冲 洗步骤采取较剧烈的条件。
z 气相测序:蛋白质通过polybrene等载体吸附在化学惰性的玻璃滤膜 上,偶联碱和裂解酸以气相方式转运,反应副产物和ATZ氨基酸通过有机溶
剂以气相方式萃取,蛋白质本身不会丢失.
2
蛋白质和DNA测序比较
3
z
z (3)质谱测序:80年代末出现的2大技术:电喷雾(ESI, electrospray ionization)质谱和基质辅助激光解吸电离-飞行时间 (MALDI-TOF ,matrix-assisted laser desorption/ionization time –offlight),采用软“电离”的电离方式。需求样品量少,速度快,价格 昂贵。
7
Edman降解的化学原理
z
一 Edman降解的化学原理
z Edman降解进行蛋白质与多肽序列分析是一个循环式的化 学反应过程。包括三个主要的化学步骤 :
(1)偶联:异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基反应
z
8
Edman降解的化学原理
z (2)环化裂解:苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解
9
Edman降解的化学原理
纯度鉴定方法:A :质谱
B :SDS-PAGE
C :HPLC
D :HPCE
z
一般采用2种以上的方法加以验证。
20
序列测试时应注意的问题
(2)样品量:
至少需要10Pmol,例如标准蛋白质测定:10Pmol样品可以测 定20氨基酸残基。
一般样品量大于50Pmol或者更多测定序列越长。如分子量为 20000的蛋白质,50Pmol约为1微克。所以蛋白质N-端测序属于常 规测定。

测定多肽链数目(末端分析)

测定多肽链数目(末端分析)
测定多肽链数目(末 端分析)
目录
CONTENTS
• 测定多肽链数目的方法 • 末端分析的原理 • 测定多肽链数目的实验操作 • 测定多肽链数目结果的解读 • 测定多肽链数目实验的优缺点
01 测定多肽链数目的方法
化学分析法
总结词
通过化学反应对多肽链的末端进行标记,然后通过色谱或质谱技术进行检测。
04 测定多肽链数目结果的解 读
结果解读的方法
01
02
03
对比标准曲线
将实验结果与标准曲线进 行对比,根据曲线的斜率 和截距计算多肽链数目。
统计误差分析
对实验数据进行统计分析, 计算误差范围,判断结果 的可靠性和准确性。
重复实验
进行重复实验,取平均值, 以提高结果的准确性和可 靠性。
结果解读的注意事项
末端分析的步骤
分离多肽链
将混合的多肽链分离成单个链,常用的 方法有凝胶电泳、高效液相色谱等。
断裂多肽链
通过化学或酶解方法将多肽链断裂, 使标记物释放出来。
末端标记
在多肽链的游离末端添加标记物,常 用的标记物有异硫氰酸荧光素 (FITC)、生物素等。
检测标记物
通过检测标记物的荧光信号或生物素 信号,确定多肽链的数目。
03 测定多肽链数目的实验操 作
实验材料准备
多肽样品
准备已知序列的多肽样品,确 保其质量和纯度。
氨基酸分析仪
用于测定多肽中氨基酸的组成 和数量。
酸解液
用于将多肽链水解为单个氨基 酸。
标准氨基酸溶液
用于校准氨基酸分析仪。
实验操作步骤
01 将多肽样品溶解于酸解液中,进行水解反 应。
02 将水解产物通过滤膜过滤,除去未水解的 多肽。

多肽和蛋白质的合成和结构确定

多肽和蛋白质的合成和结构确定

多肽和蛋白质的合成和结构确定多肽和蛋白质是生命体系中非常重要的分子,它们在细胞的结构和功能上发挥着至关重要的作用。

因此,研究多肽和蛋白质的合成和结构确定,对于深入理解细胞和生命的机理非常重要。

多肽和蛋白质的合成是一个非常复杂的过程,涉及到众多的基本单元和反应。

在生命体系中,多肽和蛋白质的合成通常发生在核糖体上,这是一种复杂的蛋白质和RNA的组合物,能够根据RNA的信息将氨基酸连接在一起,形成多肽和蛋白质分子。

在多肽和蛋白质的合成过程中,会涉及到许多不同的反应。

其中最常见的反应是肽键的形成。

这种反应会将两个氨基酸分子连接在一起,形成肽链。

在这个过程中,两个氨基酸化学反应,产生一个水分子和一个肽键。

这个反应在许多不同的地方都会发生,包括合成多肽和蛋白质分子的过程中,以及在分解蛋白质的过程中。

在多肽和蛋白质的合成过程中,还会涉及到其他不同的反应。

例如,在一些情况下,会涉及到残基的修饰。

这种修饰可以改变分子的形状和化学性质,从而改变它们的功能。

例如,磷酸化可以将磷酸基附加到蛋白质分子上,从而改变它们的电子荷分布,进而改变它们的结构和功能。

在多肽和蛋白质的结构确定方面,一些非常复杂的技术和方法被广泛应用。

其中最主要的是X射线晶体学。

这种技术利用X射线和晶体学的原理,将分子的结构解析出来。

这个过程需要使用高度精密的仪器和技术,包括X射线衍射仪和计算机模拟。

这个过程非常耗费时间和精力,因为对于每个蛋白质分子,需要进行大量的实验和模拟才能确定其精确的结构。

总的来说,多肽和蛋白质的合成和结构确定是非常重要的研究领域。

它们对于深入理解生命体系和细胞机制非常关键,同时也为新药物和治疗方案的开发提供了基础和依据。

随着科学技术的不断发展和研究方法的不断创新,我们相信未来会有更多的突破性发现和进展。

免疫多肽的合成和功能调控机制

免疫多肽的合成和功能调控机制

免疫多肽的合成和功能调控机制免疫多肽(immunopeptide)是一种分子量比较小的蛋白质,通常由20个氨基酸左右构成。

它们在生物体内发挥着重要的免疫调节作用,可以促进或抑制免疫反应的发生和进展。

因此,对免疫多肽的合成和功能调控机制进行深入研究,对深入理解机体免疫系统的工作原理,开发新型免疫治疗药物,具有非常重要的意义。

一、免疫多肽的合成免疫多肽的合成通常是通过转录、翻译和后修饰等步骤实现的。

其中,转录是指将免疫多肽的基因信息转录成一条RNA分子,即免疫多肽的前体RNA。

翻译是指将前体RNA转译成免疫多肽的氨基酸序列,即免疫多肽。

后修饰是指在免疫多肽的氨基酸序列中添加糖类、脂类或其他分子,以调节免疫多肽的活性和生物学特性。

目前,已经发现了很多种免疫多肽,并且通过化学合成或基因工程技术实现了免疫多肽的大规模生产。

例如,一些多肽类药物,如克雷预塔肽、艾多泊肽等,就是通过化学或基因工程合成的。

二、免疫多肽的功能调控免疫多肽的功能调控通常涉及到受体介导的信号转导和蛋白酶解等步骤。

这些步骤可以调节免疫多肽的稳定性、促进或抑制其与受体结合,最终影响免疫多肽的生物学功能。

1.信号转导免疫多肽可以与细胞膜受体结合并激活一系列信号转导通路,从而影响免疫反应的发生和进展。

这些信号转导通路通常包括各种酶、激酶、信号转导因子等,并最终影响免疫细胞的增殖、分化、运动和死亡等生物学功能。

例如,一种叫做TGF-β的免疫多肽可以通过与TGF-β受体结合并激活蛋白激酶SMAD信号通路,从而调节免疫细胞的增殖、分化和凋亡等生物学功能。

2.蛋白酶解免疫多肽在机体内通常会受到一些酶类的降解和活性调节。

例如,蛋白酶可以将免疫多肽分解成更小的片段,从而调节其生物学活性和稳定性。

此外,一些其他的信号分子和细胞因子也可以对免疫多肽的生物学功能进行调控。

这些信号分子和细胞因子通常可以影响免疫多肽的合成、稳定性、受体结合和功能调节等方面。

总之,免疫多肽的合成和功能调节机制非常复杂,涉及到多种蛋白质、信号分子、受体和细胞分子的相互作用和调节。

蛋白质和多肽的 N 端测序技术研究进展

蛋白质和多肽的 N 端测序技术研究进展

214 中国医药生物技术 2008年6月第3卷第3期Chin Med Biotechnol, June 2008, V ol. 3, No. 3·综述· 蛋白质和多肽的 N 端测序技术研究进展赵丽艳,张养军,钱小红氨基酸序列测定是了解蛋白质性质和功能的重要途径,N 端区域又是蛋白质及多肽重要的结构和功能部位,其序列特异性很高,通过 N 端的少数几个氨基酸残基就可以对大多数蛋白质进行鉴定[1]。

例如,可以通过对蛋白质和多肽类药物的 N 端进行人工修饰(如环化修饰、甲基化修饰等),提高其降解稳定性延长药效[2-3]。

因此 N 端肽段的鉴定具有非常重要的意义,本文对近年来蛋白质和多肽 N 端测序技术及方法进行了综述。

1 蛋白质和多肽 N 端的重要生物学功能 所有蛋白质合成都起始于 N 端,其序列组成对其生物学功能有着巨大的影响。

①蛋白质的半衰期与 N 端氨基酸的特异性有关,或者说 N 端氨基酸残基对蛋白质的寿命有控制作用[4];②N 端序列与蛋白质的亚细胞器定位有密切关系,例如,某些特殊的氨基酸序列可以作为蛋白质分选标记影响蛋白质定位[5];③蛋白质的 N 端可发生许多种翻译后修饰,影响其结构和功能。

如在新生肽链的成熟过程中,2/3 的叶绿体蛋白质会发生起始甲硫氨酸残基的剪切和前导肽的去除[6];又如核心组蛋白 N 端赖氨酸的可逆乙酰化修饰使组蛋白与 DNA 间的作用减弱, 导致染色体局部解旋,促进基因转录,而去乙酰化则抑制基因转录[7]。

这种乙酰化和去乙酰化过程中的任何异常都会导致生长、发育的紊乱, 诱发白血病、皮肤癌等疾病[8]。

因此,通过对蛋白质 N 端序列的研究有利于分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。

2 蛋白质和多肽 N 端测序技术 2.1 非质谱技术 1955 年,Frederick Sanger 采用二硝基氟苯(FDNB)法,首次成功地完成了第一个蛋白质——牛胰岛素的序列分析。

蛋白质多肽链氨基酸序列的测定

蛋白质多肽链氨基酸序列的测定
DNFB
肽段经过分离纯化后, 即可进行氨基酸测序。但是 获得数据之后,还不能得出 整条多肽链的氨基酸排列顺 序,因为尚不清楚这些片段 在多肽链中的先后次序。一 般需要用到多种水解法,并 分析出各肽段的氨基酸顺序, 然后经过组合排列对比,最 终得出完整肽链中的氨基酸 序列。
六、确定肽段在多肽链中 的次序
一、氨基酸组成
蛋白质经盐酸水解后成为个别氨 基酸,用离子交换树脂将各种氨基酸分 开,测定它们的量,算出各氨基酸在蛋 白质中的百分组成或个数。
二、末端测定的具体方法
二硝基氟苯法(DNP法) 肼解法 化学法 二甲基氨基萘磺酰氯法 (Dansyl-氯法) 还原成氨基醇法
酶解法
亮氨酸氨肽酶法 细胞外氨肽酶法
羧肽酶 CpA CpB CpC 来源 胰脏 胰脏 植物或微 生物 专一性 能释放除Pro、Arg、Lys外的所有 的C-端氨基酸 主要水解C-端为Arg、Lys的肽键 相当广泛,几乎能释放C-端的所有 氨基酸
还原成氨基醇法
• 多肽C-端氨基酸可被硼氢化锂(LiBH4) 还原成α-氨基醇,用层析法可以鉴定氨 基酸种类。 • Sanger早期测定胰岛素C-末端氨基酸采 用此法。
耦联: 使用苯异硫氰酸酯(PITC)在pH9.0的碱性 条件下对蛋白质或多肽甲酰(PTC)衍生物,即PTC-肽。 水解: PTC-肽用三氟乙酸处理,N-端氨基酸残基 肽键被有选择地切断,释放出该氨基酸残基 的噻唑啉酮苯胺衍生物。
萃取: 将该衍生物用有机溶剂(例如氯丁烷)从反应 液中萃取出来,而去掉了一个N-端氨基酸残基 的肽仍留在溶液中。 转化: 萃取出来的噻唑啉酮苯胺衍生物不稳定,经酸 作用,再进一步环化,形成一个稳定的苯乙内 酰硫脲(PTH)衍生物,即PTH-氨基酸。
氨基酸序列测定的基本步骤(化学方法)

蛋白质一级结构测序-1

蛋白质一级结构测序-1
法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是 能够不断重复循环,将肽链N-端氨基酸残基逐 一进行解离。
Edman
H
O
O

N C S HN CHC NHCHC

R1
R2
酸 顺 序
H
N C S: O
O
HN CH C NH CH C
H
N C S NH2
NH C O CH
O CH C R2

R1
R2
R1

N CS
O
NH 3+
ICH2CNH2 -OOC CHCH2 SCH2CNH2
NH3+
O
保 护 作用:这些反应可用于巯基的保护。
SS
S
S
S
S
胰岛素
SH
HSHO-CH2-CH2-SH
SH
SH
SH
SH
ICH2COOH SCH2C00HSCH2C00H
SCH2C00H SCH2C00H SCH2C00H SCH2C00H
蛋白质测定的详细步骤
A.测定蛋白质分子中多肽链的数目。
蛋 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋
白 质
白质分子量之间的关系,即可确定多肽
一 链的数目。






B.多肽链的拆分。
由多条多肽链组成的蛋白质分子,必须 蛋 先进行拆分。
白 质 一 级 结 构 的 测 定
B.多肽链的拆分。
蛋 几条多肽链借助非共价键连接在一起,

换)。 将所得的肽段利用Brown及Hartlay的
位 对角线电泳技术进行分离。
置 的 确
• 然后同其它方法分析的肽段进行比较, 确定二硫键的位置。

多肽合成研究进展

多肽合成研究进展

多肽合成研究进展[摘要]多肽是一类生物活性很高的物质。

本文从化学合成和生物合成两个方面综述了多肽的合成,介绍了固相合成、液相分段合成法、施陶丁格连接、天然化学连接、光敏感辅助基连接、可去除辅助基连接、化学区域选择连接、氨基酸的羧内酸酐(NCA)法、组合化学法、酶解法、基因工程法、发酵法等合成方法的原理及其优缺点,对多肽合成方法的发展及其中药资源领域的应用进行了展望,为相关研究提供参考。

多肽是一类介于氨基酸和蛋白质之间的物质,由一种或多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。

已发现存在于生物体内的多肽达数万种多肽是一种蛋白质的结构片段,能起到蛋白质的活性基团作用,是人体新陈代谢、调节活动的重要物质。

通过研究多肽的结构与功能之间的关系,进而了解多肽中各氨基酸系列的功能。

在进行化合物的设计时,尽可能选择短肽,以便提高其生理活性,并且减少临床不良反应。

在美国FDA1999年允许大豆蛋白制品标注可以预防心血管疾病的功能之后,随着人们对多肽中各氨基酸系列功能了解的不断深人及多肽药物和保健品的持续高速发展、多肽合成技术的日益成熟,越来越多的活性多肽已被开发并广泛应用于医药领域,多肽药物的开发越来越受到人们的重视,其市场需求也在日益增加。

本文对近年来多肽的合成方法与研究进展进行综述。

1.多肽合成的分类多肽的合成主要分为两条途径:化学合成和生物合成。

化学合成主要是以氨基酸与氨基酸之间缩合的形式来进行。

在合成含有特定顺序的多肽时,由于合成原料中含有官能度大于2的氨基酸单体,合成时应将不需要反应的基团暂时保护起来,方可进行成肽反应,这样保证了合成目标产物的定向性。

多肽的化学合成又分为液相合成和固相合成。

多肽液相合成主要分为逐步合成和片段组合两种策略。

逐步合成简洁迅速,可用于各种生物活性多肽片段的合成。

片段组合法主要包括天然化学连接和施陶丁格连接。

近年,多肽液相片段合成法发展迅速,在多肽和蛋白质合成领域已取得了重大突破。

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多肽合成蛋白测序433A多肽合成系统——公认的经典高效全自动合成系统合成规模0.1-1.0 mmol,可采用Fmoc和tBoc两种方法特有的涡流混合式反应腔和NMP溶剂系统:活化氨基酸与肽充分反应,偶联率高达99%以上专利的零死体积阀门设计:去除交叉污染,减少试剂消耗全套完备的试剂和树脂全自动电脑控制,程序编辑快速简便特有回馈监控功能,自动强化脱保护和偶联,保证高得率491型蛋白质测序仪Procise 系列HT和cLC,C型蛋白测序仪独一无二的高灵敏高效率蛋白序列测定系统适于各种方法制备样品的测序:电转移印迹法、PVDF膜上样品或HPLC等溶液样品,还适于各种蛋白的测序全自动电脑监控:对于未知蛋白测序编辑新程序即可,并可同步监测反应情况随时调整以获得最佳结果,便于GMP控制精确的试剂输送回馈调节系统:使试剂输送精确度,化学反应效率、灵敏度提高,达fmol 级样品独立的高精度HPLC系统分析PTH氨基酸Procise C 为C端测序系统173毛细管HPLC及微量蛋白印迹制备系统一体化的超微量高效液相色谱仪,样品分离收集一步完成灵敏度高,回收率高,可用于500fmol蛋白/多肽样品制备自动收集样品到PVDF膜上,避免了人为的误差PVDF膜可直接用于蛋白测序仪:可与质谱仪联用样品斑点只有2-3mm,无需进一步浓缩或转移,减少了样品的丢失及污染可能检测器灵敏度极高,专适于超微量分析和微量制备多肽合成试剂试剂分子量数量产品编号DCM 84.9 1000 mlGEN902017DIPEA (density 0.742 g/mL) 129.2 4 x 9 ml GEN075000DMAP 122.2 1 g GEN910015DMF (Peptide synthesis grade, low amine content, 2 ppm)(25 L DMF available on request) 122.2 1000 ml GEN9100032500 ml GEN002007Fmoc-succinimidyl carbonate(For introduction of Fmoc group) 337.3 5 g GEN91001620% (v/v) Piperidine/DMF 1000 ml GEN910008TFA 100 ml GEN910004脱保护试剂(20% (v/v) Piperidine(DMF) 4 升GEN903081DIPEA 1 升GEN903082DMF 4 升GEN903080DMF 25 升GEN002507活化试剂DIPCDI (density 0.806g/ml) 126.2 25 ml GEN910006HATU 380.2 5 g GEN07652125 g GEN076523100 g GEN0765251000 g GEN076527HOAt 136.1 5 g GEN07651125 g GEN076513100 g GEN0765151000 g GEN076517HOBt · H2O153.1 5 g GEN07600125 g GEN076003100 g GEN076005PyAOP 521.4 5 g GEN07653125 g GEN076533TBTU 321.1 5 g GEN030003Linker A-Opfp 348.2 1 g GEN910017Linker A 182.2 1 g GEN910009Linker B-Opfp 318.2 1 g GEN910018Linker B 152.2 1 g GEN910010Linker H-Opfp 378.3 1 g GEN910019Linker H 212.3 1 g GEN910011433A 试剂401466 Synergy Reagent Kit (~100 cycles) Includes: 2 Piperidine (P/N 400629), 2THF (P/N 401255), 2 DMF (P/N 400143), 1 HBTU (P/N 401278), 1 HOBt/DMSO/NMP (P/N 401279), and 1 DIEA/DMSO/NMP (P/N 401254).400629 Piperidine, 200 mL401255 THF, 200 mL400143 DMF, 4 L401278 HBTU, 8 mmoles401279 HOBt/DMSO/NMP, 0.2 M, 40 mL401254 DIEA/DMSO/NMP, 40 mLFmoc-L 氨基酸产品分子量包装产品号Ala-OH 311.3 5 g GEN91101125 g GEN911012100 g GEN758002β-Ala-OH 311.3 5 g GEN911071 Aib-OH 325.4 5 g GEN91107225 g GEN911073 Arg-OH 396.4 5 g GEN911013 Arg-(Pbf)-OH 648.8 5 g GEN911096 25 g GEN911097100 g GEN911098 Asn-OH 354.4 5 g GEN91101725 g GEN911018100 g GEN758004 Asn(Trt)-OH 596.7 1 g GEN911016 5 g GEN911019100 g GEN758178 Asp(OtBu)-OH 411.5 5 g GEN91102025 g GEN911021100 g GEN758005 Cys(Acm)-OH 414.5 1 g GEN9110235 g GEN911024 Cys(tBu)-OH 399.5 5 g GEN911029 25 g GEN911030 Cys(StBu)-OH 431.6 5 g GEN911031 Cys(Trt)-OH 585.7 5 g GEN911026 25 g GEN911027 100 g GEN758022 Gln-OH 368.4 5 g GEN911032 25 g GEN911033 100 g GEN758012 Gln(Trt)-OH 610.7 1 g GEN911034 5 g GEN911037 100 g GEN758179 Glu(OtBu)-OH 425.5 5 g GEN911035 25 g GEN911036 100 g GEN758021 Gly-OH 297.3 5 g GEN911038 25 g GEN911039 100 g GEN758013 His(Trt)-OH 619.7 5 g GEN077213 25 g GEN077215 100 g GEN758183 His(Fmoc)-OH 599.6 5 g GEN911041 25 g GEN911042 100 g GEN758111 Ile-OH 353.4 5 g GEN91104425 g GEN911045100 g GEN758014 Leu-OH 353.4 5 g GEN91104725 g GEN911048100 g GEN758015 Lys(Fmoc)-OH 590.7 1 g GEN9110935 g GEN91109425 g GEN911095 Lys(tBoc)-OH 468.6 5 g GEN911050 5 g GEN911051100 g GEN758006 Met-OH 371.5 5 g GEN91105325 g GEN911054100 g GEN758016 Nle-OH 353.4 1 g GEN07730125 g GEN911055100 g GEN758023 Orn(tBoc)-OH 454.5 5 g GEN911056 Phe-OH 387.4 5 g GEN91105725 g GEN911058100 g GEN758017 Pro-OH 337.4 5 g GEN91105925 g GEN911060100 g GEN758018 Ser(tBu)-OH 383.4 5 g GEN911061 25 g GEN911062100 g GEN758009 Thr(tBu)-OH 397.5 5 g GEN911063 25 g GEN911064100 g GEN758010 Trp-OH 426.5 5 g GEN91106525 g GEN911066100 g GEN758019 Trp(tBoc)-OH 526.6 1 g GEN911090 5 g GEN91109125 g GEN911092 Tyr(tBu)-OH 459.5 5 g GEN911067 25 g GEN911068100 g GEN75801Val-OH 339.4 5 g GEN91106925 g GEN911070100 g GEN758020烯丙基(Allyl )保护的Fmoc 氨基酸烯丙基保护的Asp 和 Glu 主要用以合成环化和侧链多肽,以及磺化,糖基化,磷酸化肽链Asp(OAl)-OH 395.4 5 g GEN91120525 g GEN911206Asp(OH)-Oal 395.4 1 g GEN9113005 g GEN91130125 g GEN911302Glu(OAl)-OH 409.4 5 g GEN91120725 g GEN911208Glu(OH)-Oal 409.4 1 g GEN9113055 g GEN91130625 g GEN911307Lys(Aloc)-OH 452.5 5 g GEN91120925 g GEN911210Tyr(Al)-OH 443.5 5 g GEN91121125 g GEN911212Fmoc-D-氨基酸Ala-OH 311.3 1 g GEN911105Asn-OH 354.4 1 g GEN911109Asp(OtBu)-OH 411.5 1 g GEN911111Gln-OH 368.4 1 g GEN911113Glu(OtBu)-OH 425.5 1 g GEN911115His(Trt)-OH 619.7 1 g GEN911108Ile-OH 353.4 1 g GEN911128Leu-OH 353.4 1 g GEN911117Lys(tBoc)-OH 468.6 1 g GEN911119Met-OH 371.5 1 g GEN911121Nle-OH 353.4 1 g GEN911123Phe-OH 387.4 1 g GEN911126Pro-OH 337.4 1 g GEN911124Ser(tBu)-OH 383.4 1 g GEN911138Thr(tBu)-OH 397.5 1 g GEN911139Trp-OH 426.5 1 g GEN911132Tyr(tBu)-OH 459.5 1 g GEN911140Val-OH 339.4 1 g GEN911136--------------------------------------------------------------------------------Fmoc-L-氨基酸OPfps带OPfp 脂的活化氨基酸主要用于HOBt 或 HOAt 等催化剂作用Ala-Opfp 477.4 5 g GEN91201125 g GEN912060Asn-Opfp 520.4 5 g GEN91201325 g GEN912061 Asn(Trt)-Opfp 762.7 1 g GEN912008 5 g GEN912009 Asp(OtBu)-Opfp 577.5 5 g GEN91201525 g GEN912062 Cys(Acm)-Opfp 580.6 1 g GEN9120195 g GEN91202025 g GEN912063 Cys(tBu)-Opfp 565.6 1 g GEN912023 5 g GEN912024 Cys(Trt)-Opfp 751.8 5 g GEN912022 25 g GEN912064 Gln-Opfp 534.4 5 g GEN912026 25 g GEN912065 Gln(Trt)-Opfp 776.8 5 g GEN912081 25 g GEN912082 Glu(OtBu)-Opfp 591.5 5 g GEN912028 25 g GEN912066 Gly-Opfp 463.4 5 g GEN912018 25 g GEN912067 His(tBoc)-Opfp 643.6 5 g GEN912030 25 g GEN912068Ile-Opfp 519.5 5 g GEN912032 25 g GEN912069 Leu-Opfp 519.5 5 g GEN912034 25 g GEN912070 Lys(tBoc)-Opfp 634.6 5 g GEN912036 25 g GEN912071 Met-Opfp 537.5 5 g GEN912038 25 g GEN912072 Nle-Opfp 519.5 5 g GEN912054 Phe-Opfp 553.5 1 g GEN912040 5 g GEN91204125 g GEN912073 Pro-Opfp 503.4 5 g GEN912043 25 g GEN912074 Ser-(tBu)-Opfp 549.5 5 g GEN912087 25 g GEN912088Thr(tBu)-Opfp 563.5 5 g GEN91209025 g GEN912091Trp-Opfp 592.5 5 g GEN91204925 g GEN912077Tyr(tBu)-Opfp 625.6 5 g GEN912051 25 g GEN912078Val-Opfp 504.4 5 g GEN91205325 g GEN912079多肽合成相关文献Reviews and mini-reviews1. “Instrumentation for automated solid-phase peptide synthesis.” 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