叶绿素a的测定
叶绿素-a测定
叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。
试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。
2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。
3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。
5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。
若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。
3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。
将提取的上层提取液注入测定池。
选择相应量程，测定样品的荧光值R b。
加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。
5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。
用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素a测定仪使用方法
叶绿素a测定仪使用方法简介叶绿素是一种广泛存在于光合生物中的生物色素，其结构主要由两个部分组成：色素分子和中央离子镁离子（Mg2+）。
其中，叶绿素a是光合作用中最重要的光合色素之一。
叶绿素a的含量检测是研究光合作用强度和生产力的重要手段。
而叶绿素a测定仪可以通过测量植物样品中叶绿素a的吸光度来确定其含量。
本文将介绍叶绿素a测定仪的使用方法。
准备工作所需材料•叶绿素a测定仪•磷酸缓冲液•丙酮•高纯度乙醇•点滴管•显微量移液管•水浴•紫外-可见分光光度计设置光度计首先，需要设置光度计的检测波长。
由于叶绿素a的最大吸收波长为665 nm，因此需要将光度计的检测波长设置为665 nm。
1.打开光度计，在主界面中找到“波长”或“WL”一栏；2.按下调节键（通常是▲/▼）将波长设置为665 nm；3.关闭显示器保护功能（通常按“mode”键）。
注意：在设置波长后，需要进行零点校正。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
实验步骤制备样本1.取出所需数量的植物样品，并洗净水分；2.将样品粉碎，并加入适量的磷酸缓冲液；3.混合均匀后，放入80℃水浴中加热10-15分钟，使叶绿素a脱离蛋白质和叶片结构；4.将样品离心分离出上清液，即可进行下一步操作。
取样与添加试剂1.取出约2 mL的上清液，并加入适量的丙酮，使样品溶解；2.用高纯度乙醇将测量池清洗干净，加入约2 mL的丙酮；3.加入1-2滴磷酸缓冲液，搅拌均匀；4.将样品溶液加入测量池中，搅拌均匀。
测量吸光度1.将测量池放入光度计中心；2.关闭图像显示器保护功能；3.按下“测量”键，记录测量值。
注意：每次测量前都需要进行零点校准。
具体方法请参考光度计的使用说明书。
计算结果计算叶绿素a浓度将所记录的吸光度值（A665）代入下列公式：叶绿素a浓度（mg/L）=8.02 × A665计算叶绿素a含量将样品体积（mL）乘以叶绿素a浓度（mg/L），即可得到样品中叶绿素a的含量（mg）。
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定一、实验目的：熟悉在未经分离的叶绿体色素中测定叶绿素a、叶绿素b的方法。
二、实验原理；根据叶绿体色素提取液对可见光的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测其吸光度，即可利用公式计算出提取液中各种色素的含量：Ca=13.95A665-6.88A649Cb=24.96A649-7.32 A665C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665三、仪器、试剂与材料：仪器：分光光度计、离心机、研钵；试剂：96%乙醇溶液、石英砂、CaCO3粉末；材料：菠菜叶片；四、实验步骤：1.取干净的菠菜叶片剪碎，分别混匀。
2.称取剪碎的样品0.2g，各2份，分别放入研钵中，加少量石英砂和CaCO3粉末、及2-3ml 96%乙醇溶液，研成匀浆，倒入离心管，再用96%乙醇溶液多次洗涤研钵，洗涤液也倒入离心管中。
3．将离心管放入离心机后取上述提取液放入比色皿中，以96%乙醇为对照，分别测定665nm、649nm处的吸光度值。
4.按公式计算提取液中叶绿素a、叶绿素b及叶绿素a+b的浓度。
五、实验结果及分析：1.研磨提取叶绿素是加入石英砂和CaCO3粉末各有什么作用？加入石英砂有助于研磨得更充分；加入CaCO3粉末可以保护叶绿素在研磨时不被破坏。
2.计算: A665(1)=0.399A A665(2)=1.237A 故A665=0.818AA649(1)=0.208A A649(2)=0.626A 故A649=0.417A 所以: Ca=13.95A665-6.88A649=8.542Cb=24.96A649-7.32 A665=4.421C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665=12.963。
水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法
标题：水质中叶绿素a的测定——荧光分光光度法一、概述水是生命之源，保持水质清洁对人类健康和生态环境至关重要。
叶绿素a是植物和浮游生物体内的主要叶绿素成分，它对于水体中的生物和化学过程具有重要影响。
对水体中叶绿素a的测定具有重要意义。
在众多叶绿素测定方法中，荧光分光光度法以其快速、灵敏、准确的特点而受到广泛关注。
二、荧光分光光度法原理及优势1. 荧光分光光度法原理荧光分光光度法是通过叶绿素a在特定激发光波长下产生荧光信号，并测定荧光光谱的强度来间接测定叶绿素a的浓度的一种方法。
其原理是叶绿素a在特定波长范围内吸收光线后发生激发态转变为基态过程中发射荧光。
通过检测叶绿素a的荧光强度，可以推断水体中叶绿素a的浓度。
2. 荧光分光光度法优势a. 灵敏度高：荧光分光光度法对叶绿素a含量的检测具有高灵敏度，能够在较低浓度范围内进行准确测定。
b. 非破坏性：该方法无需对样品进行破坏性处理，不影响样品原有特性，适用于连续监测和长期调查。
c. 快速准确：荧光分光光度法测定简单快速，结果准确可靠。
三、荧光分光光度法测定叶绿素a的步骤1. 样品采集样品来源于自然水体或实验室模拟水体。
应在样品收集后尽快进行实验分析，或进行样品的冷冻保存。
2. 仪器调试根据仪器操作手册调试荧光分光光度仪，确定最佳激发波长和检测波长。
3. 样品处理将样品进行预处理，如滤过滤膜去除颗粒物，或使用溶解剂提取叶绿素a。
4. 校准仪器利用标准叶绿素a溶液校准荧光分光光度仪，确定荧光强度和叶绿素a浓度的线性关系。
5. 测定样品放置校准后的仪器测定样品荧光强度，根据标准曲线计算叶绿素a 的浓度。
四、荧光分光光度法在水质监测中的应用荧光分光光度法在水质监测中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 监测水体富营养化程度：叶绿素a是水体富营养化的重要指标之一，荧光分光光度法可以快速准确地测定水体中叶绿素a的含量，从而评估水体富营养化程度。
2. 生态环境评估：荧光分光光度法可对水体中微生物的活性和生态环境进行评估，对水体生物多样性和生态平衡的研究具有重要意义。
叶绿素A的测定
叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（通常采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，二者同时被提取出来。在可 见光的范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A的测定方法
利用分光光度法，将所得的上清液在 分光光度计上，用1cm光程的比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波长处的吸光度，并以90%的丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
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目录
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叶绿素A的测定原理
叶绿素A的测定方法
叶绿素A的测定步骤
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理 有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。 叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
将所测的对应波长的吸光度，代入如 下公式计算： 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
式中:D为所测的吸光度 V为水样体积 V1为提取液定容后的体积 L为比色皿光程
叶绿素A的测定步骤
测定叶绿素A时，样品应该尽快测定， 防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
叶绿素a的测定原理
叶绿素a的测定原理叶绿素a是一种存在于植物和藻类细胞叶绿体中的绿色色素，它起到了光合作用中接受和传递光能的关键作用。
测定叶绿素a的浓度对于研究光合作用的机制以及评估植物和藻类的生长状态具有重要意义。
在实验室中，存在多种方法来测定叶绿素a的浓度，其中包括光度法、荧光法和高效液相色谱法。
下面将重点介绍常用的光度法测定叶绿素a的原理和步骤。
光度法是一种通过测量溶液对特定波长的光的吸收来确定溶液中某种组分浓度的方法。
对于叶绿素a的测定，通常使用的波长为650nm或663nm。
叶绿素a在这两个波长的光下有很强的吸收能力，而溶液中的其他组分对该波长的光吸收较小。
因此，测定叶绿素a的浓度可以通过测量溶液对650nm或663nm光的吸光度来间接确定。
下面是光度法测定叶绿素a浓度的一般步骤：1. 样品制备：将待测样品中的叶绿素a提取到有机溶剂中，一般使用甲醇、乙醇或二氯甲烷等极性较强的有机溶剂作为提取剂。
提取的方法可以根据需求选择，包括搅拌法、超声波法或研磨法等。
提取过程需要避光，以防叶绿素a被光降解。
2. 溶液制备：将提取出的叶绿素a溶解在适当的溶剂中，一般使用甲醇或乙醇等有机溶剂。
溶液中的叶绿素a浓度可以通过分光光度计测定吸光度来确定。
3. 吸光度测定：使用分光光度计，在650nm或663nm的波长下测量样品吸光度。
为了获得准确的测量结果，一般需要对比测量待测样品和纯溶剂的吸光度，以消除对溶剂的吸光干扰。
4. 计算叶绿素a浓度：根据比色法或校正曲线法，将测得的吸光度转换为叶绿素a的浓度。
比色法是通过比较待测样品吸光度与已知浓度叶绿素a标准溶液吸光度的关系，进行定量测定。
校正曲线法是首先制备不同浓度的叶绿素a标准溶液，然后测定它们的吸光度并绘制出吸光度与浓度的标准曲线，通过待测样品的吸光度在标准曲线上插值得到其浓度。
需要强调的是，在测定叶绿素a浓度时，有几个实验注意事项需要注意。
首先，提取过程需要避光，以免叶绿素a被光降解，影响测量结果。
HJ897-2017水质-叶绿素a的测定验证报告
方法验证报告项目名称：水质叶绿素ａ的测定方法名称：《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况实验室检测人员已通过标准《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况1.3 检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况1.4 环境设施和条件情况实验室具有校准合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定提取液的吸光度，根据公式计算水中叶绿素ａ的浓度。
2.2.样品的采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相关规定进行样品的采集。
样品的采集用有机玻璃采水器采集水面下0.5m样品，采样体积为1L，在样品中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。
2.2.样品的保存样品采集后应在0℃-4℃避光保存、运输，24h内运送至检测实验室过滤（若样品24h 不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输）。
2.3试样的制备2.3.1过滤在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。
确定取样200ml（根据水体的营养状态确定取样体积富营养和中营养过滤体积为100-200ml，贫营养过滤体积为500-1000ml），用量筒量取200ml混匀的样品，进行过滤，最后用少量的蒸馏水冲洗滤器壁。
过滤时负压不超过50kpa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。
叶绿素a测定
实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
叶绿素a测定原理
叶绿素a测定原理叶绿素a测定原理是一种用于测量植物叶片中叶绿素a含量的方法。
叶绿素a 是一种绿色植物色素，它在光合作用中起着重要的作用。
通过测定叶片中叶绿素a的含量，可以了解植物叶片的光合效率和生长状态，对研究植物生理和生态学过程具有重要意义。
测定叶绿素a的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性。
叶绿素a对可见光波段具有很高的吸收能力，特别是对于蓝色和红色光有较高的吸收峰。
测定叶绿素a含量的方法主要基于两种原理：叶绿素a的吸收光谱特性和叶绿素a与其他光敏色素的色素比。
第一种方法是利用叶绿素a的吸收光谱特性进行测定。
吸收光谱是指物质对于不同波长的光的吸收程度。
叶绿素a在波长范围为400-700纳米的可见光区域内吸收光线，特别是在430-450纳米和660-680纳米的波长区域具有高峰吸收。
通过测定叶绿素a溶液或植物叶片对不同波长光线的吸收程度，可以建立叶绿素a的吸光度与其浓度之间的关系。
一般采用分光光度计或分光光度计对吸光度进行测量，通过测量的数据来计算叶绿素a的浓度。
第二种方法是采用叶绿素a与其他光敏色素的色素比进行测定。
在叶绿素a与其他光敏色素的比例固定的情况下，可以通过测定叶绿素a与其他光敏色素之间的比例来间接推断叶绿素a的含量。
其中，常用的方法是使用高效液相色谱法（HPLC）测定叶绿素a与叶绿素b的比例，从而推算出叶绿素a的含量。
该方法的优点是准确性较高，但需要使用昂贵的仪器设备和耗时的操作。
此外，还有一些其他的衍生方法可以用于叶绿素a的测定，例如光学方法、荧光分析、近红外光谱法等。
这些方法在测定叶绿素a含量方面具有一定的优势，可以根据实际需求选择适合的方法进行测定。
总之，叶绿素a测定方法的原理主要基于叶绿素a的光谱吸收特性和叶绿素a 与其他光敏色素的色素比。
通过选取合适的测定方法和仪器设备，可以准确地测定出植物叶片中叶绿素a的含量，为植物生理和生态学研究提供重要数据。
叶绿素a的测定方法详解
叶绿素a的测定方法详解来源：本站类别：技术文章更新时间：2013-10-14 11:45:16阅读358次叶绿素广泛存在于果蔬等高等绿色植物中，与蛋白质结合成叶绿体。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a和叶绿素b。
这两种叶绿素都溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机物。
叶绿素是绿色植物进行光合作用的必需因子，在光合作用中起到吸收和传递光能的作用。
其中叶绿素a 的分子式为C40H70O5N4Mg，叶绿素a的分子结构由4个吡咯环通过4个甲烯基（=CH—）连接形成环状结构，称为卟啉（环上有侧链）。
卟啉环中央结合着1个镁原子，并有一环戊酮（Ⅴ），在环Ⅳ上的丙酸被叶绿醇（C20H39OH）酯化、皂化后形成钾盐具水溶性。
在酸性环境中，卟啉环中的镁可被H取代，称为去镁叶绿素，呈褐色，当用铜或锌取代H，其颜色又变为绿色，此种色素稳定，在光下不退色，也不为酸所破坏，浸制植物标本的保存，就是利用此特性。
利用分光光度计进行叶绿素a的测定，是最普通的测量叶绿素a的方法。
利用分光光度计，首先测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，叶绿素a在645nm和665nm处有最大的吸光值。
然后利用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
朗伯—比尔定律的数学表达式为A=lg(1/T)=Kbc ，其中A为吸光度；T为透射比,是投射光强度比上入射光强度；c 为吸光物质的浓度；b为吸收层厚度。
叶绿素a的测定过程首先介绍下我们在测定过程中要用到的仪器：分光光度计、叶绿素含量仪、天平、研钵、棕色容量瓶、便携式叶绿素测定仪、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管；准备几片新鲜的植物叶片；准备96%的乙醇（或80％丙酮）、石英砂和碳酸钙粉。
然后具体操作如下：取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。
称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白。
静置3～5min。
叶绿素a监测法
任务一 叶绿素a的测定
三、测定方法和步骤
❖1.水样的采集与保存
湖泊、水库：采样500mL；池塘：300mL ❖2. 浓缩水样 抽滤 ❖3.取出滤膜→在冰箱内低温干燥6～8h→研磨器（加入少 量碳酸镁粉末及2～3mL 90%的丙酮），充分研磨→离心 （3000～4000转/分）10分钟→上清液倒入容量瓶 ❖再 研 磨 离 心 ， 上 清 液 再 转 入 容 量 瓶 中 ， 重 复 l ～ 2 次 ， 用 90%的丙酮定容
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测定意义 测定原理 测定方法和步骤 计算方法 环境标准
项目二 水体初级生产力的测定
水体初级生产力：指水生植物（主要 是浮游植物）进行光合作用的强度。
任务一 叶绿素a的测定
一、测定意义
1.是水中浮游植物生物量的指标 2.直接反映水体富营养化的程度
二、测定原理
叶绿素a是有机物，不溶于水，但能溶于有机溶剂。先用醋 酸纤维滤膜抽滤水样，然后破碎细胞，用90%丙硐提取叶 绿素a，再用分光光度计测叶绿素a的吸光度，最后利用公 式计算叶绿素a的含量。
❖4. 将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读 取 750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90% 的丙酮作空白吸光度测定
任务一 叶绿素a的测定
四、计算方法
叶绿素a=
[11.64(D663
D750 )
2.16(D645 V
D750 )
•
0.10(D630
D750 )] V1
总P(mg/L)
BOD(mg/L )
水色
< 0.001 <1
蓝绿色
中营养
0.1～0.3 0.001～
0.01 1～10
2-4叶绿素a测定
实验题目: 湖塘水体叶绿素a测定姓名：学号：班级：组别：第一组指导教师：1.实验概述1.1实验目的及要求(1)初步了解叶绿素a测定的原理和常规测定方法;(2)通过实验，掌握叶绿素。
的测定方法及富营养化水样的前处理方法;(3)熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。
1.2实验原理浮游植物的主要光合色素是叶绿素((Chlorophyll)，常见的有叶绿素a、b和c。
叶绿素a (chl-a >存在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1-2%，是估算浮游植物生物量的重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛应用。
浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法<HPLC法)、荧光光度计法和分光光度计法等。
高效液相色谱法能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐，一般不能用于野外大量样品的快速分析。
荧光光度计也能够精确地测定叶绿素a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。
因此，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。
在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和乙醇等，再根据比色所用的，又分为单色法和多色法(例如单色丙酮法和四色丙酮法)等。
主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。
尽管丙酮现在仍厂泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。
不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。
超声破碎法因快速、提取效率高等特点也被研究者所青睐。
本实验介绍一种以热乙醇为萃取溶剂，结合超声细胞破碎法为基础的叶绿素a含量侧定方法。
2.实验内容2.1实验方案设计每组选择一个池塘，实地取水样，测定水样的叶绿素a含量。
水质 叶绿素 a 的测定 分光光度法
水质叶绿素 a 的测定分光光度法以水质叶绿素 a 的测定分光光度法为标题叶绿素是植物和藻类等光合生物中的一种重要色素，它在光合作用中起到接收和转换光能的作用。
因此，叶绿素的测定对于研究光合作用、水质监测以及环境保护等方面具有重要意义。
本文将介绍一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法——分光光度法。
分光光度法是通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定其中叶绿素 a 的含量。
首先，我们需要准备一定浓度的叶绿素 a 标准溶液作为参照物。
然后，将待测样品中的叶绿素 a 提取出来，通常采用酒精提取法或醚提取法。
提取后的溶液中，叶绿素 a 会表现出特定的吸光度谱，即在特定波长下吸收特定的光线。
接下来，我们需要使用分光光度计来测定叶绿素 a 的吸光度。
首先，调节分光光度计到叶绿素 a 吸收峰值波长，通常为665 nm。
然后，将标准溶液和待测样品溶液分别放入光度计的比色皿中，设置比色皿为空白。
在特定波长下测量样品的吸光度，并记录下数值。
在得到吸光度数值后，我们可以利用标准曲线来计算出样品中叶绿素 a 的浓度。
标准曲线是通过制备一系列已知浓度的叶绿素 a 标准溶液，并测定它们的吸光度得到的。
通过绘制标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度数值，在曲线上找到相应的浓度值。
需要注意的是，分光光度法测定叶绿素 a 的时候，样品中可能存在其他物质的干扰，这会导致测定结果的误差。
为了减小干扰，我们可以采用去色处理，即利用活性炭或其他吸附剂去除样品中的色素。
此外，为了保证测定结果的准确性，我们需要进行多次测定，并计算平均值。
总结起来，分光光度法是一种常用的测定叶绿素 a 含量的方法。
通过分光光度计测量样品在特定波长下的吸光度，并利用标准曲线计算出叶绿素 a 的浓度。
该方法简单、快速，并且具有较高的准确性和重复性。
在水质监测、环境保护和光合作用研究等领域，分光光度法都发挥着重要的作用。
通过准确测定叶绿素 a 的含量，我们可以更好地了解光合生物的生长状况和环境状况，为相关研究和应用提供可靠的数据基础。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定
叶绿素a是植物细胞中的主要叶绿素类型之一，它在光合作用中起着关键作用。
测定叶绿素a的含量可以揭示植物的光合作用活性和叶片的健康状态。
以下是一种常用的测定叶绿素a的方法：
1. 取少量新鲜的叶片样品。
2. 将叶片样品置于琼脂杯中，加入适量的乙醇。
3. 使用玻璃棒或研钵对叶片进行研磨，使叶绿素a溶解在乙醇中。
4. 将溶液转移到离心管中，使用超高速离心将样品离心，以去除残留的植物细胞。
5. 将上清液取出，加入一定体积的乙醇使溶液体积为10mL。
6. 使用光度计将溶液的吸光度测量在多个波长下，包括
663nm和645nm。
7. 使用下列公式计算叶绿素a的浓度：叶绿素a (mg/L) = (12.25 * A663 - 2.79 * A645) * V/M
其中，A663和A645分别为溶液在663nm和645nm处的吸光度，V为体积（mL），M为叶片的质量（g）。
8. 根据测定结果，可以计算叶绿素a的浓度或相对含量。
需要注意的是，以上方法是一种常见的叶绿素a测定方法，具体测定步骤和浓度计算公式可能会有所不同。
因此，在具体操作时，建议参考实验方法或使用商业化的叶绿素测定试剂盒，以确保准确性和可重复性。
叶绿素a的测定
叶绿素a的测定叶绿素a是一种广泛存在于植物、藻类和某些细菌中的绿色色素。
它在光合作用中起着至关重要的作用，能够吸收光能并将其转化成化学能，为生物体提供能量。
因此，对叶绿素a的测定具有重要的科研和应用价值。
叶绿素a的测定方法有很多种，其中比较常用的包括光度法、荧光法和高效液相色谱法等。
下面我将分别介绍这几种测定方法的原理和步骤。
光度法是一种通过测量叶绿素a溶液对特定波长光线的吸光度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液与一定体积的溶剂混合均匀，然后使用分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度。
根据比色法原理，吸光度与溶液中叶绿素a的浓度成正比，通过与标准曲线对比，可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
荧光法是一种通过测量叶绿素a溶液在受到激发光后发射的荧光强度来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液置于荧光测量仪器中，通过激发光源激发溶液中的叶绿素a分子，叶绿素a分子吸收光能后会发出特定波长的荧光。
测量仪器会记录下荧光的强度，根据荧光强度与叶绿素a浓度之间的关系，可以确定待测溶液中叶绿素a的浓度。
高效液相色谱法是一种通过将待测叶绿素a溶液进行色谱分离并测定其峰面积来确定其浓度的方法。
具体步骤如下：首先，将待测叶绿素a溶液注入高效液相色谱仪中，通过色谱柱的分离作用，将溶液中的叶绿素a与其他组分分离开来。
然后，通过检测器检测叶绿素a的吸光度，并计算出其峰面积。
根据标准曲线可以得出待测溶液中叶绿素a的浓度。
除了上述几种常用的测定方法外，还有一些其他的测定方法，如超声波法、电化学法等。
这些方法在特定的研究领域或实际应用中具有一定的优势和适用性。
叶绿素a的测定是研究光合作用和植物生长发育等领域的基础工作。
不同的测定方法在原理和步骤上存在一定的差异，但都能够准确地测定叶绿素a的浓度。
科研工作者和应用人员可以根据实际需要选择合适的测定方法，并结合其他相关指标对叶绿素a进行综合分析和评估，为科学研究和实践应用提供有力的支撑。
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数据处理
①和②为湖塘混合水样的两个平行样，③和④为铜绿微囊藻稀释液的两 个平行样。
665a、750a——未加酸提取液在波长665nm、750nm处吸光度 665b、750b——加酸后提取液在65a—750a ； 665b（校正值）=665b—750b 计算方式：
⑵Chl-a的提取：将滤膜剪碎，放入具塞离心管，加入6mL热乙醇 （75℃恒温提取2min后用细胞破碎仪破碎，超声时间3s，间隔2s，破碎 3min后，用少量上清液清洗细胞破碎仪探头（小于1mL）。将装有提取液 的离心管放入离心机，转速4000r/min下离心10min，将上清液移入10mL 比色管中，再用2mL热乙醇提取液清洗、离心二次取得上清液。最后将提 取液定容到10mL。 ⑶Chl-a含量的测定：用含90%的乙醇溶液作为空白 对分光光度计调零。分别记录在750nm与665nm处各自的吸光度（分别记 为750a和665a），750nm处的测定是用来进行浊度校正的，吸光度应很低。 665nm处的吸光度应在0.1~0.8单位之间。在比色皿内加入1滴1mol/l盐酸 使酸化，混匀1min。再记录750nm和665nm处的吸光度（记为750b和665b）
增量和迭代
目标和过程
❖ 渐修和顿悟 ❖ 量变带来质变 ❖ 由事入理还是由理入事 ❖ 渐是顿的实践，顿是渐的启发 ❖ 顿悟仅仅是开始
工具和结果
❖ 渡河弃筏和上岸拽筏 ❖ 执指为月和弃指求月 ❖ 工欲善其事，必先利其器 ❖ 工具仅仅是加速器 ❖ 不要沉迷于工具而迷失方向
路径和回溯
F
G
A
B GooCgle D
实验步骤
⑴水样前处理：当天现取水样，装成2个500mL平行样，再将实验室 原来配好的铜绿微囊藻稀释液取2个30mL平行样。将水样通过醋酸纤维滤 膜抽滤，抽滤时负压不应大于0.5大气压（50kPa）。抽滤完毕后，用镊 子小心的取下滤膜，将其对折（有浮游植物样品的一面向里），再用普 通滤纸吸压，尽量去除滤膜上的水分；滤膜放置表面皿上冷冻12h以上。
时间管理
时间就像海绵里的水，只要愿挤总还是有的! -鲁迅
❖ 从救火到重要紧急事情 ❖ 提升效率是王道 ❖ 防止他人浪费你时间
思维模式
6.深入-背后的背后 5.提升-思维路径
4.任务-发掘事物本质
1.基础-学习积累知识 2.核心-积极思考提问
3.方法-分类无处不在
浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效 液相色谱法（HPLC法）、荧光光度计法和分光光度计法等。高效液相色谱法 能够很精确地测定各种光合色素的含量，但由于仪器昂贵，分析操作步骤繁琐， 一般不能用于野外大量样品的快速分析。荧光光度计也能够精确地测定叶绿素 a的含量，特别是能够测定叶绿素a含量较低的样品，但由于分析过程中容易受 其他色素或色素衍生物的干扰，也不利于快速分析各类不同的野外样品。因此， 分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a含量的测定方法。
E
H
❖ A到E => 过渡依赖搜索引擎 ❖ 知道要通过B->C->D才能够到达E ❖ 知道有多条路径可以达到E ❖ 知道在什么场景下选择什么模式
方法和模式
A
B
C
D
E
方法论
模式1
模式2
模式N
❖ 方法论≠模式 => 知识≠经验 ❖ 知识=>技能=>经验=>模式 ❖ 模式 = 特定场景下问题的解决路径 ❖ 形成模式唯有日积月累
在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和 乙醇法等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色法（例如单色丙酮法 和四色丙酮法）等。主要的细胞破碎法有研磨、低温冻融、超声破碎等。尽管 丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对蓝 藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。 不过，甲醇对人体毒害性大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为 现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。超声波破碎法因快速、提取效率高等特点 也被研究者所青睐。
叶绿素a的测定
The determination of chlorophyll a
第八组：四缺一小组
实验目的与意义
❖ 初步了解a的测定的原理和常规测 定方法
❖ 通过实验水体富营养化水样的前处 理的方法
❖ 熟练掌握抽滤装置及分光光度计的 使用
实验原理
浮游植物的主要光合色素是叶绿素，常见的有叶绿素a、b和c.叶绿素a存 在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1~2%是估算浮游植物生物量的 重要指标，因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物量的重要指标而被 广泛应用。