PCR实验室分区设置和要求PPT培训课件
PCR实验室课件
目的
保护操作人员 保护环境 保护样品
临床PCR实验室工作流程
试剂储存准备
扩增试剂的配制 、分装和保存
标本制备区 装；核 酸提取、保存和加样
扩增反应区
扩增产物的测定、结 果分析、登记及报告
如使用全自动分析 仪，区域可适当合 并,三四区可合并为 扩增产物分析
PCR实验室平面设计
○在入口处设缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。
有问题！
建筑结构
阴角 均采用
圆弧线条密封
洗手池
三、实验室设施、仪器设备
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理的 分区、空间、良好的照明和空调设备
• 实验室仪器设备应保养良好，实验用品要 达到相应的要求。加样器的校准？带滤塞 吸头的使用及质检？离心机？热循环仪？ 水浴箱和/或恒温干浴仪？
人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。
O
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9 超净工作台
O
10 专用工作服和工作鞋
11 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
12 专用办公用品
仪器设备及管理
• 加样器：维护、校准 • 扩增仪：维护、校准 • 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 • 离心机：维护 • 生物安全柜：维护 • 冰箱：维护
PCR实验室各区的设备配置表
序号
名称
PCR实验室规范化管理与质量控制ppt演示课件
第二部分 临床基因扩增实验室质量控制
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为什么特别强调质量控制？？
• 容易污染－假阳性 • 处理不当－假阴性
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24
假阳性问题：
• 标本、试剂及实验场地的污染 • 试剂盒的质量问题
UNG酶是一种选择，但不 可因此而高枕无忧
加强管理最为重要
选择优质试剂盒
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假阴性的问题：
原因： 1.标本处理等操作过程问题 2.标本中存在抑制剂 3.由于基因突变所致
(3)记录的保密：
a.“data”由系统设置密码保护； b. 结果资料在报告系统设置密码保护； c. 在用的及保存的文字记录须随时在实验室工作人 员的监管下，脱离本室人员视线监管的须存放在 上锁的抽屉或文件柜内，钥匙由该工作人员保管。 d. 记录不能涂改，需修改时可用红笔在修改内容上 加双斜杠并在备注栏中说明、签字
. 13
(3)标本废弃处理
废弃样本经确认后，保持容器完整， 置于废弃标本处，经密闭收集，统一焚 烧处理,并有记录。
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7. PCR试验记录的管理
（1）记录方法
a.接受标本记录： 以书面形式记录病人信息、样本信息、是否 保存，同时对样本作标识，记录人签名； 检验时，将标识的样本带入样本处理间处理。 b.PCR扩增检测记录： 检测结果以清楚的唯一标识保存于PCR扩增 仪的电脑的指定文件夹内，并定期进行备份与 整理。
怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容 （必要时首先稳定抱怨者情绪）。
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(2) 抱怨的处理（投诉）
a. 能当时处理的抱怨及时解决，记录。 b. 不能当即答复的,按逐级授权,汇报解决。 c. 抱怨的处理以病人满意为目的， 但必须以遵重科学，遵重事实为原则， 在不违背科学原则，医疗行为规范的基础上， 争取抱怨者最大程度的理解。
PCR实验室分区设置和要求, PPT课件
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意 避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在 使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用 洗板机洗板，废液必须收集至1mol/L HC1中，并 且不能在实验室内倾倒，而应至远离PCR实验室的 地方弃掉。用过的吸头也必须放至1mol/L HCl中浸 泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。
怎样编写SOP？
知识回顾 Knowledge Review
扩增区
PCR 扩增区工作细则 1. 操作者应穿本区工作服，戴双层手套，自核酸样品制备区来者不
必更换手套。 2. 按 PCR 仪操作规程创建自己的反应程序，记录自己的反应程序号，
以后直接运行该程序。 3. 如果创建反应程序过程中，机器出现某程序号与其他程序号相关
联的情况，要另选新的程序号，以免误将别人的程序篡改。 4. 每次运行程序前一定要核对该程序的内容。 5. 运行结束后，及时取出反应管，关闭机器并填写记录，勿使机器
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺 序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备 区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增 区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区 别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作 者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带 出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因， 因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩 增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应 有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物 质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故应 注意实验人员的安全防护。
本区的清洁消毒和紫外照射方法同前面区域。本区 如采用负压条件或减压情况下(如安装排风扇)可减 少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性。
PCR实验室规划布局设计,一切从零开始 (全了)
如何建设一个标准的PCR实验室？PCR实验室如何设计规划才堪称专业？PCR实验室管理又有哪些注意要点？标准的PCR 实验室分为四个区域，分别为：n1.试剂配制区；n2.样品处理区；n3.核酸扩增区；n4.产物分析区；PCR实验室设计规划找博尔实验室如使用全自动分析仪，区域可适当合并。
（进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服，例如不同的颜色。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出）PCR实验室平面布局【各区的功能分别为】试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。
样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。
扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
博尔实验室PCR实验室工程案例扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。
使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内：在生物安全柜内操作；每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材；盛放污染材料的器皿密封并一次性使用；用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
PCR实验室建设规划要点1、主体结构：主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节：将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR 实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。
3、消毒：在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。
PCR实验室要求
P C R实验室设计要求及功能分区PCR实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出，四区域分别为：1.试剂配制区n2.样品处理区n3.核酸扩增区n4.产物分析区n如使用全自动分析仪，区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是：1.1.1试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。
1.1.3扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。
1.3使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内：1.4.1在生物安全柜内操作。
1.4.2每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求：PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。
完成一组PCR实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
PCR实验室分区设置及要求
严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经 高压处理。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本 工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠 的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的 紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离 和能量对去污染的效果非常关键，因此可使 用可移动紫外灯(254nm波长)，在工作完成 后调至实验台上60~90cm内照射。由于扩增 产物仅几百bp，对紫外线损伤不敏感，因此 紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好 是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有 日常记录。
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲区 专用走廊
缓冲区
缓冲区 工作流向
错误的设计
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区 域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区 域都必须有明确的标记，以避免设备物品如 加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而 造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。
用于RNA扩增检测的样本制备好以后，应 立即进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA 稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应 的需要，应在标本制备区设置一个以上的 温育装置。
cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定， 倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓 冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的 DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后 再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩 增发生污染的可能性降低。
分子生物学实验室设置及要求
甘肃省疾病预防控制中心 二○一一年四月 张林才
设计根据
在由中华人民共和国卫生部办公厅于 2002年1月14日下发的《临床基因扩增检 验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10 号文)附件《临床基因扩增检验实验室基 本设置标准》。
PCR实验室分区设置和要求
空气净化
采用高效过滤器对实验室内的空气进行净化，确保空气洁净度符合标准要求，降 低空气传播病原体的风险。
环境消毒
定期对实验室环境进行彻底清洁和消毒，包括实验台面、地面、设备等，以消除 潜在的污染源。
05 pcr实验室的实验操作规 范
实验操作的流程和注意事项
样本处理
将样本进行离心、提取核酸等预处理；
pcr实验室分区设置和要求
目录
• pcr实验室分区概述 • pcr实验室的清洁和消毒 • pcr实验室的设备配置 • pcr实验室的安全管理 • pcr实验室的实验操作规范
01 pcr实验室分区概述
分区的目的和原则
目的
PCR实验室的分区设置是为了确保实 验过程中的生物安全和实验结果的质 量，降低交叉污染和实验室感染的风 险。
可靠性
设备应具备较高的稳定性 和可靠性，确保实验结果 的准确性和可重复性。
安全性
设备应符合安全标准，能 够有效防止交叉污染和意 外事故的发生。
设备配置清单
pcr仪
离心机
移液器
冰箱和冷藏柜
用于DNA扩增的仪器， 具备温度控制和实时监
测功能。
用于样品分离和洗涤， 能够调节转速和时间。
用于精确移取样品和试 剂，具有多种量程可选。
核酸ห้องสมุดไป่ตู้增
将核酸加入PCR反应体系中，进行扩 增；
实验操作的流程和注意事项
• 结果分析：对扩增产物进行电泳、荧光检测等分 析。
实验操作的流程和注意事项
注意事项
确保PCR反应体系的准确 性和一致性；
严格遵守无菌操作，避免 交叉污染；
注意安全防护，避免扩增 产物对环境和人员造成危 害。
实验操作的记录和报告
PCR实验室建立及预防污染ppt课件
污染原因
(二) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR 试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双 蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.
污染原因
(三) PCR扩增产物污染: 这是PCR反应中 最主要最常见的污染问题，因为PCR产物 拷贝量 大，远远高于PCR检测数个拷贝的 极限，所以极微量的PCR产物污染，就可 造成假阳就可形成假阳性。
扩增反应混合物配制和扩增区
• • • • 核酸扩增仪 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处 理的离心管和加样器吸头（带滤心） • 专用工作服和工作鞋 • 专用办公用品
扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下： 1、 微量加样器（覆盖1-1000ul） 2、 可移动紫外灯（近工作台面） 3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、 加样器吸头（带滤心） 4、 专用工作服和工作鞋 5、 专用办公用品
污染原因
还有一种容易忽视，最可能造成PCR 产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液 体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比 较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及 污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而 污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷 贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别 重视的问题.
防止污染的方法
(四) 防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应 一次性使用。
(五) 设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增 条带的最低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能 性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被 扩增核酸的样品作阴性对照。
(六) 选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸 的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至 管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。
PCR实验室分区设置及要求,
用于RNA扩增检测的样本制备好以后，应 立即进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA 稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应 的需要，应在标本制备区设置一个以上的 温育装置。 cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定， 倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓 冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的 DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后 再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩 增发生污染的可能性降低。 待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区， 不得在本区对样本进行PCR扩增。
产物分析区
产物分析区工作细则 1. 操作者应穿本区工作服，戴双层手套、口罩。工作时关闭隔断门。 2. 电泳区备有小型、大型水平电泳槽，垂直电泳槽，以及 8×12 孔 HLA 基因分型专业电泳槽， 可作各种琼脂糖凝胶电泳， 聚丙烯酰胺 凝胶电泳检测，定性、定量检测核酸及蛋白质。 3. 200ul、20ul 加样器各 1 把，此外还备有 8 道排枪 1 把，均为电泳 区专用，不得拿出电泳区。 4. 电泳所用缓冲液与配胶所用缓冲液同期配制。 5. 上样缓冲液为 6×，使用时，取 1 份上样缓冲液，加 5 份样品，可 在封口膜上混均，也可在样品管中进行。注意：当对提取核酸进 行检测时，切不可将样品直接拿到电泳区检测，应在试剂准备区 外间把上样缓冲液点道封口膜上，取适量样品混均并记下样品顺 序，将点有样品的封口膜拿到电泳区检测。 6. 电泳缓冲液用量要合适，以刚好浸没过胶面为宜。过多溢出可能 有触电危险，过少影响电泳质量。 7. 电泳结束关闭电泳仪后才可取出凝胶成像。 8. 凝胶放入暗箱，关好暗箱门。电脑和凝胶成像仪上方的摄像设备 是清洁的，应摘下手套调节。 9. 按照凝胶成像仪操作规程调节获取满意的图象，照相后立即关闭 紫外灯并将凝胶取出，切勿使其在暗箱中干燥板结。 10.珍惜打印用纸，只在必要时打印图象。 11.每天工作结束后打开紫外灯照射 30 分钟。 12.每周一，三除尘并倒垃圾。 13.当机器发生故障时，立即上报负责人。
临床PCR实验室的设计及管理体系的建立PPT课件
阳性室内质控物来源：
浓度及批号：
扩增位置：
阴性室内质控物来源：
批号：
扩增位置：
所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：
1
9
17
25
2
10
18
26
3
11
19
27
4
12
20
28
5
13
21
29
6
14
22
30
7
15
23
31
8
16
24
32
核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。
仪器设备使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒温仪温度校准： ℃
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制
毫升；
其他：
仪器设备使用：
离心机： 正常 不正常
振荡器： 正常 不正常
实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，
并进行紫外照射30分钟以上。
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
第2页/共66页
理想的PCR实验室设计B
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
第3页/共66页
PCR实验室设计的一般原 则
“十六字口诀”
第4页/共66页
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门 试剂准备区
临床PCR实验室基本设置要求50页PPT
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
临床PCR实验室基本设置要求
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的— —洛克
临床PCR实验室建设及注意事项共41页PPT
31、园日涉以成趣，门虽设而常关。 32、鼓腹无所思。朝起暮归眠。 33、倾壶绝余沥，窥灶不见烟。
34、春秋满四泽，夏云多奇峰，秋月 扬明辉 ，冬岭 秀孤松 。 35、丈夫志四海，我愿不知老。
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
临床PCR实验室建设及注意事项PPT共41页
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
PCR实验室设计PPT课件
临床PCR实验 室设计
可编辑课件
1
临床基因扩增检验实验室设计
❖ 依据：卫生部颁发的《临床基因 扩增检验实 验室管理暂行办法》 （卫医发[2002]10号）
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
可编辑课件
5
理想的PCR实验室设计B
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
可编辑课件
6
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门
❖ 《医疗机构临床基因扩增管理法》 (卫办医政发〔2010〕194号)
可编辑课件
2
实验室设计
❖ 空间充分合理的空间 ❖ 良好的照明 ❖ 空调设备
可编辑课件
3
临床PCR实验室设计的一般原则
❖ 各区独立
❖ 注意风向 “十六字口诀”
❖ 因地制宜
❖ 方便工作
可编辑课件
4
理想的PCR实验室设计A
产物分析区
试剂准备区
门
外走廊门Leabharlann B扩增及产物分 析区
标本制备区 门
试剂准备区 门
门
可编辑外课走件廊
门
7
可编辑课件
8
可编辑课件
9
可编辑课件
10
可编辑课件
PCR实验室设计
1 PCR实验室平面布局PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室平面布置示意图如图1所示图12实验室空调通风系统设计及压力控制PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。
同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
试剂贮存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
标本制备区该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
扩增反应混合物配制和扩增区该区域主要进行的操作为DNA扩增。
此外，已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。
个别操作如加样等应在超净台内进行。
扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
3污染的预防与控制PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。
pcr基因扩增实验室建设布局
基因扩增实验室又称PCR实验室，是以临床诊断治疗为目的，以扩增检测DNA或RNA 为方法的检测技术。
如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的放大系统（TAS）自主序列复制系统（3SR）和链替代扩增（SDA）等。
PCR实验室分为4各区即试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区。
PCR实验室建设布局：工作区域应设置缓冲间，工作间和缓冲间之间要配备连锁装置，实验室之间不能直通，不同的实验室应有独立的空间环境。
各区之前如果是紧密相连，需要安装物品传递窗。
每个工作区域的顶部应安装紫外灯。
紫外灯的波长为254nm，安装数量为每20m?an安装一支40w打的紫外线。
实验室较为理想的布局模式为有一个专用走廊，试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区很规范的排列在一起，前三个区各有一个缓冲间，可供换工作服和工作鞋使用，顶上可装一紫外线。
内实验室应设为正压状态，缓冲间为负压状态，每一区域都须有明确的标记，工作按试剂准备区、标本制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行，各区的仪器设备包括工作服、鞋、实验室记录本和笔等都必须专用。
如果无法做到以上模式，以下基本要求必须做到：1、四个区域必须是相互独立的。
2、各区的仪器设备及各种物品必须专用的。
3、各区完全独立，缓冲间可有可无，如果一个区套一个区的模式，区间不能直通，应有缓冲间，拱换工作服及鞋子用，并保证两个区间始终处于完全的分隔状态。
4、产物分析区应安装排风扇或其他抽风装置，维持负压。
5、PCR实验室通风系统及压力控制。
6、各区域之间应具备单向的实验工艺流、气流、物流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求，为了能够避免交叉污染应采用全送全排的气流组织形式，严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
PCR分区图及介绍
接样室实验员进入接样室后，更换实验室专业服及手套等。
外来送样人员通过传递窗传递样品，接收样品时，实验员做好样品登记（如养殖场信息，血清类型，检测项目，检测数量等）。
对接收的样品进行消毒处理，先在外包装四周喷洒消毒剂。
如果外包装是纸箱子，则打开纸箱子，露出泡沫箱，然后在纸箱子内侧和泡沫箱四周全部喷洒消毒剂，作用30分钟（为防止喷洒的消毒液干燥，中途再喷洒一次），将消毒后的样品放入样品制备室。
配液室配置：1. 至少为-20℃及2-8℃双层冰箱，用于储存试剂(此屋不可存放样品)；2.一套移液器（10ul、50ul及200ul），用于配制反应液及加阴性对照；3.一台离心机，用于对反应液瞬时离心，防止泄露；4.其他相关耗材，如手套，1.5ml离心管，PCR仪配套反应管、盖，大小载板架，废液桶等。
备注：明确今天所做试验后在配液室拿出所需项目试剂盒，在该室按照说明书配制反应体系，配制完成后进行分液，加阴性对照。
然后将反应管放入传递窗。
不同区域内移液器及手套等不能混区，阳性对照放入传递窗。
样品制备室配置：1. 至少为-20℃及2-8℃双层冰箱，用于储存样品；配液室配好的反应液可先放置2-8℃冰箱冷藏（勿开管盖）。
2.一套移液器（10ul、200ul及1000ul），用于样品处理；3.一台离心机，用于对样品的提取等；4.研磨仪：研磨组织样品；5.生物安全柜：样品预处理及提核酸时需在安全柜内进行；6.紫外灯：实验结束后照射环境可防止气溶胶污染；7.其他相关耗材，如手套，1.5ml离心管，大小载板架，废液桶等。
备注：接收到的样品如无需立即检测可放入冰箱低温保存；需立即检测时则再次对自封袋消毒放入生物安全柜，进行样品处理，处理后的样品放入新的自封袋中，提取后的核酸及反应液放入传递窗进行下一环节。
不同区域内移液器及手套等不能混区。
加样室配置：1.一套移液器（至少一把10ul量程），用于加样品核酸及阳性对照；2.一台离心机，用于对样品核酸及阳性对照管瞬时离心，防止开盖时污染环境等；3.生物安全柜：加样（样品核酸及阳性对照）需在安全柜内进行；4.紫外灯：实验结束后照射环境可防止气溶胶污染；5.其他相关耗材，如手套，1.5ml离心管，大小载板架，废液桶等。
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含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应 快速离心数秒。大多数用于扩增的试剂都应 冰冻贮存。为避免因单次反应取液而频繁的 冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。 贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一 次测定所需的扩增反应数来决定。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适 用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果 必须有书面报告。对于"热启动"技术(在第一 个高温变性步骤后加入酶)，聚合酶也可不包 含在主反应cDNA扩增。 此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来 自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自 试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也 可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常 在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式 扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须 在本区内进行。
PCR实验室分区设 置和要求
设计根据
在由中华人民共和国卫生部办公厅于 2002年1月14日下发的《临床基因扩增检 验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10 号文)附件《临床基因扩增检验实验室基 本设置标准》。
临床PCR诊断实验室设计方案
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向
空气流向
在整个本区的实验操作过程中，操作者必须 戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一 次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经 高压处理。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本 工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠 的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的 紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离 和能量对去污染的效果非常关键，因此可使 用可移动紫外灯(254nm波长)，在工作完成 后调至实验台上60~90cm内照射。由于扩增 产物仅几百bp，对紫外线损伤不敏感，因此 紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好 是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有 日常记录。
待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区， 不得在本区对样本进行PCR扩增。
扩增区设置要求
Cobas Amplicor
· NucliSens EasyQ · LightCycler 荧光定量PCR仪
LightCycler Capillary Releaser 专用工作服 PCR扩增仪
不能从本区再进入任何"上游"区域，可降低 本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本 区内的走动。如有加样则应在超净台内进行。 打开预处理过的反应混合液时必须防止液体 溅出，尤其是在巢式扩增步骤之间。一个简 单的方法是在打开反应管前快速离心数秒。 可使用体积较小的离心机，因其所占实验台 面小，易于用一只手操作，适合于大多数超 净台。防潮屏障如石蜡油或轻矿物油也具有 防污染作用，但必须注意的是，矿物油本身 也可能成为一种持续性的污染源。用过的加 样器必须注意清洁消毒。
试剂准备区设置要求
超净工作台或试剂配置箱 试剂冰箱 可调移液器一套（四支）， 配有带滤芯（防止气溶胶）及无 RNase酶的吸嘴 无粉的乳胶手套 涡旋器 专用工作服 无菌离心管
下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、 试剂的分装和主反应混合液的制备。
贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运 送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分 析区。在打开含有反应混合液的离心管或 试管前，应将其快速离心数秒。试剂原材 料必须贮存在本区内，并在本区内制备成 所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查 可用后，应将其分装贮存备用，避免由于 经常打开反应管吸液而造成污染。
完成操作及每天工作后都必须对实验室台面 进行清洁和消毒，紫外照射方法与前面区域 相同。如有溶液溅出，必须处理并作出记录。
标本制备区设置要求
生物安全柜 样本冰箱 可调移液器一套（四支）， 带滤芯（防止气溶胶）及无RNase酶的吸 嘴 台式微型离心机（最大RCF 16000g，
最小RCF12500g）； 试管架（Sarstedt 93.1428） 无粉的乳胶手套 涡旋器 专用工作服 无菌离心管 加热块
用于RNA扩增检测的样本制备好以后，应 立即进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA 稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应 的需要，应在标本制备区设置一个以上的 温育装置。
cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定， 倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓 冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的 DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后 再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩 增发生污染的可能性降低。
空气流向
缓冲区 专用走廊
缓冲区
缓冲区 工作流向
错误的设计
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区 域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区 域都必须有明确的标记，以避免设备物品如 加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而 造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺 序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备 区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增 区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区 别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作 者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带 出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因， 因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩 增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应 有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
下述操作在该区进行：临床标本的保存， 核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至 扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
要正确使用加样器。由于在加样操作中可 能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免 在本区内不必要的走动。可通过在本区内 设立正压条件避免从邻近区进入本区的气 溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加 入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的 反应管。对具有潜在传染危险性的材料， 必须有明确的样本处理和灭活程序。