细菌内毒素检测法与家兔法检测门冬氨酸钾镁注射液热原的比较

热原和细菌内毒素的区别

热原和细菌内毒素一、热原(progon)医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。

为提高药品质量和用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。

在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。

家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。

所以，在半个多世纪以来热原检查法，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。

但随着制药工业的发展和临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。

这种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业发展的需要。

其缺点：①标准化程度低，无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。

②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。

③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗生素、生物制品等），实验结果难以判断。

④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种药品需要几百元/次，而鲎试剂仅几十元/次。

综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。

什么是热原？目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。

欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。

在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。

生物药物分析第三章作业答案

单选题1、家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法中将一定剂量的供试品溶液注入家兔体内的方式是A.静脉注射B.动脉注射C.腹腔注射D.灌胃正确答案：A试题解析：家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法系将一定剂量的供试品溶液，以静脉注射的方式注入家兔体内，在规定的时间内，对家兔体温升高情况进行观察，通过观察结果判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

所以答案为A。

2、用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，若再想供热原检查用，则至少应休息A.12小时B.24小时C.36小时D.48小时正确答案：D试题解析：用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用。

所以答案为D。

3、细菌霉内素检查法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由（）产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

A.革兰阳性菌B.革兰阴性菌C.金黄色葡萄球菌D.大肠埃希菌正确答案：B试题解析：本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

所以答案为B。

4、下列有关细菌内毒素检查法的叙述哪一项是错的A.每批鲎试剂的灵敏度须用细菌内毒素工作标准品复核B.凝胶法的原理是鲎试剂与内毒素产生凝集反应C.抗生素类药物因具有抗菌活性，不能用凝胶法检查细菌内毒素D.凝集反应的温度规定为37℃±1℃E.凝集反应的时间规定为60分钟±2分钟正确答案：C试题解析：抗生素类药物可以用凝胶法检查细菌内毒素。

所以答案为C。

5、细菌内毒素检查法又称为A.鲎试验法B.临床检查法C.生物效应法D.家兔热原试验法E.放射性检验法正确答案：A试题解析：细菌内毒素检查法又称为鲎试验法。

本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原的比较

ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｏｒｔｓｏｎｄａｎｓｈｅｎｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＢｏｔｈｂａｃｔｅｉｒａｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔａｎｄｒａｂｂｉｔｓｔｅｓｔａｒｅｆｅａｓｉｂｌｅｉｎｐｙｒｏｇｅｎｔｅｓｔｏｆｄａｎｓｈｅｎｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｐｙｒｏｇｅｎｔｅｓｔｏｆｄａｎｓｈｅｎｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙｓｉｍｕｌｔａ－
ｎｅｏｕｓｕｓｅｏｆｂａｃｔｅｒｉａｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔａｎｄｒａｂｂｉｔｓｔｅｓｔ
ＷＡＮＧＷｅｎ－ｊｉａ死ＰＡＮＧＺｈｉ－ｈｕｉＨＥＨｕａ－ｈｏｎｇＬＩＷｅｉ
ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０１６０，Ｃｈｉｎａ
【摘要】目的考察细菌内毒素检查法和家兔法对丹参川芎嗪注射液检查的可行性。方法采用《中国药典｝２０１０

家兔法与内毒素法检查生物材料热原的适用性研究

摘要: 药品与生物材料在生物安全性评价方法上有着很大的区别。临床上广泛运用内毒素法检查药品热原, 然而, 运用细菌内毒素法进行部分组成成分较为复杂的生物材料的热原试验是否适当有待明确。本研究在 2005 版药典的基础上, 分别运用内毒素法和家兔法对两种组织工程支架材料进行热原试验的比较研究, 实验结果表明运用内毒素法得到的试验结果为阴性, 运用家兔法得到的试验结果为阳性。这两种方法分别测定每种材料所得到的热原试验结果不相符合, 表明对组成成分复杂的生物材料, 含热原的因素较为复杂, 用家兔法进行试验检测热原可能更加灵敏。
关键词: 生物材料; 热原试验; 内毒素法; 家兔法; 温度变化中图分类号: R318 文献标识码: A 文章编号: 1672- 6278 ( 2011) 03- 0155-04
Applicability Research for the Bacteria Endotoxin Test Method and Rabbit test Method to Detect Pyrogen
ZOU Wen1, 2 , YUAN Tun1, 2 , CAI Yongfu2 , LIANG Jie1, 2
( 1. National Engineering Research Center f or Biomaterials, Sichuan University , chengdu 610064, China; 2. Sichuan Testing Center f or Biomaterials and Medical devices , Chengdu 610064)
Key words: Biomaterial; Pyrogen; Endotoxin test; Test method for rabbit; Change of temperature

细菌内毒素检查法研究进展

细菌内毒素检查法研究进展摘要：细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖，在极微量（1-5ng/kg体重）的情况下便可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、全身炎症反应及多器官功能衰竭等严重不良反应，所以在药物生产中，尤其是注射剂的生产中，细菌内毒素的控制与检测非常重要，关乎人们的生命安全。

本文对细菌内毒素检查法研究进展进行探讨。

关键词：细菌内毒素检查法；鲎试剂；微量凝胶法；重组C因子法引言：细菌内毒素广泛存在于人们的生活中，可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、内毒素休克、弥散性血管内凝血等症状，在药品生产过程中不可避免地会引入细菌内毒素，所以药品质量控制中对内毒素的检测尤为重要。

目前，细菌内毒素的检测方法有家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。

文章对这几种检测方法进行综述，比较各自的优缺点，以期为内毒素的检测提供更合理有效的方法。

概述细菌内毒素的检测方法：家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。

《中华人民共和国药典》（2015版）规定细菌内毒素的检测采用鲎试剂检测法。

鲎试剂是由美洲鲎或东方鲎的血液中变形细胞的溶解物提取而成。

我国每年对鲎试剂的需求为1000万支，使我国鲎资源面临着巨大压力。

由于近些年浅海环境的恶化，人们肆意地捕食，我国的鲎资源急剧减少，所以，寻找细菌内毒素检查法的替代方法和补充方法已经迫在眉睫。

二、细菌内毒素检查方法分析1、家兔法由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以，采用家兔耳缘静脉注射的方式，监测家兔体温，用来定性检测热原。

但是家兔法存在很多缺点，如：不能定量检测热原、使用动物实验、检测周期长、灵敏度低等，因此家兔法正在逐步被取代。

2、鲎试剂法鲎试剂法是目前检查细菌内毒素的常用标准，鲎试剂主要含有：C因子、B因子、G因子、凝固蛋白酶原等物质，其反应原理是：首先C因子与细菌内毒素结合被激活为酶活性形式，然后活化的C因子将B因子活化，活化的B因子将凝固蛋白酶原活化为凝固蛋白酶，凝固蛋白酶将凝固蛋白原转化为凝固蛋白形成凝胶。

输液热原反应与细菌内毒素的定量研究

输液热原反应与细菌内毒素的定量研究作者：李楚云詹云丽来源：《中国实用医药》2010年第10期【摘要】目的介绍细菌内毒素检查法在药品热原方面的研究和应用。

方法查阅相关文献,并进行综合、分析和归纳。

结果细菌内毒素检查法具有快捷、准确、简便、经济等优点,但我国细菌内毒素定量法的应用与国外相比还存在一定的差距。

结论在临床上及早开展细菌内毒素的定量检查是输液治疗安全、有效的有力保证,也将使我国药品质量控制上新台阶。

【关键词】热原反应;细菌内素素;定量静脉输液具有药效快的特点,是临床常用的治疗手段,但在输液过程中时有不良反应发生,其中热原反应最为常见且后果严重。

引起人体致热的物质主要是细菌内毒素,当进入体内的内毒素累积量超过人体的耐受量时,便发生热原反应。

主要的临床表现为体温升高甚至高热,伴以发冷、寒战、出汗、恶心呕吐等,严重者甚至导致休克、死亡。

因此控制进入人体内毒素的限量,是减少上述临床热原反应的必要措施。

近几十年来,内毒素的检测研究已成为医药卫生领域的重要课题之一,本文就细菌内毒素检查法在药品热原方面的研究和应用作一概述。

1 细菌内毒素与热原反应细菌内毒素(bacterial endotoxin)是革兰阴性细菌细胞壁的产物,具有多种生物活性,尤以致热性最为突出,临床上易引起热原反应[1]。

细菌内毒素是一个量的概念,具有累加性。

在医院临床中常遇到这样的情况,输液、配伍药、输液器具各自的细菌内毒素检查均符合规定,但同批号混合用于患者后却发生了热原反应。

据报道某医院对混合残留液进行内毒素限量检查,结果其内毒素检出阳性率高达79.6%[2],这说明细菌内毒素具有累加结果,虽然检测单个药品细菌内毒素含量均在标准要求范围内,即内毒素检查为合格,但联合用药后内毒素量加合后却不一定合格,极可能超过人体承受的限量,因此不可避免地发生热原反应。

2 细菌内毒素检查法概述细菌内毒素检查法又称鲎试验法(bacterial endatoxin text,BET),是利用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应,来检查药品中内毒素含量是否符合规定的一种方法。

热原是一种致热物质

热原是一种致热物质，有两种来源，一种是来自生产环境的污染程度，即产品的初始污染菌，这种致热原可用细菌内毒素的方法检测出来；而另一种致热原则来自于材料，材料对人体的致热程度是无法用细菌内毒素的方法检测出来的，必须用家兔法进行检查。

所以，你的产品如果是首次注册，材料中的致热程度还不明确的时候，不能只检测细菌内毒素，也需要用家兔法检测热原。

如果你的产品重新注册，材料中的致热原已经被排除，那么只需检测细菌内毒素就可以了。

个人观点，供参考。

1．1热原的本质M.Thm as等[1]指出，热原（Pyrogen）又称内毒素（Endotoxin）,产生于革蓝氏阴性（Gram-nagative）细菌的细胞外璧，亦即细菌尸体的碎片。

它是一种脂多糖物质（Lipopoly-saccharide），简称LPS，其相对分子质量从几千到几十万不等，根据产生它的细菌种类而定。

在水溶液中，其相对分子质量可为几十万到几百万不等。

最近已揭示了类脂A （Lipid）也是热原物质，构成为危害人体的内毒素，相对分子质量大约为2000。

永田彦等指出[2]，发热性物质即热原有两类：一类是低相对分子质量发热物质（Pyretice），另一类是高相对分子质量发热物质（Pyrogen），它们统称为内毒素。

一般认为热原是指细菌发热物质，它由革蓝氏阴性细菌的细胞壁的外膜构成。

更进一步分析其主要成份是脂多糖（LPS）及类脂A，是热原的活性部分。

它们的相对分子质量一般为1万～2.5万，在水溶液中形成缔合体，相对分子质量可达50万～100万。

这类物质具有耐热性和化学稳定性，不易被除灭。

1．2热原的定量表示热原可以用浓度来定量标度。

文献大都以每毫升克数为浓度单位，一般单位为ng/ml，即10-9g/ml，或pg/ml，即10-12g/ml。

也有采用EU/ml为热原单位。

我国1998年药典确定用EU/ml为热原单位。

两个单位之间的换算关系比较复杂，因为来自不同种类细菌的热原毒性表现不尽一致。

热原检查中家兔注射细菌内毒素后的升温情况考察

·71·药品评价 Drug Evaluation 2021,18（02）热原检查中家兔注射细菌内毒素后的升温情况考察李杨1，张晓杰1，尹敏1，王立增1，曹大伟1，郑霞2 1.山东泰邦生物制品有限公司，山东泰安 271000；2.泰安市妇幼保健院，山东泰安 271000［摘要］目的：考察细菌内毒素剂量与热原检查家兔法家兔体温的关系。

方法：选择未进行任何实验的家兔，每1 kg 家兔体质量分别静脉注射细菌内毒素0.25、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0 EU ，观察家兔注射细菌内毒素后的升温情况。

结果：细菌内毒素注射剂量在0.5 EU/kg 之下时，家兔的体温稳定，在0.5 EU/kg 以上的细菌内毒素注射剂量时，家兔呈现不同温差的升温度数，注射剂量超过2 EU/kg 时，每组有至少一只家兔升温超过0.6 ℃。

结论：热原检查家兔法内毒素剂量>5 EU/kg ，家兔总体均有明显升温；内毒素注射剂量与家兔升温度数存在剂量关系。

［关键词］热原；内毒素类；体温变化；热原检查法；灵敏度；因果律DOI: 10.19939/ki.1672-2809.2021.02.03The Investigation on the Sensitivity of Rabbit Pyrogen TestLI Yang 1, ZHANG Xiaojie 1, YIN Min 1, WANG Lizeng 1, CAO Dawei 1, ZHENG Xia 21. Shandong Taibang Biological Products Co.,Ltd., Taian Shandong 271000, China;2.Taian Maternal and Child Health Care Hospital, Taian Shandong 271000, China.[Abstract] Objective: Investigate the relationship between the dose of bacterial endotoxin and the body temperature of rabbits with pyrogen test. Methods: Rabbits that have not undergone any experiment were selected, and 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 2.5, 5.0, and 10.0 EU were injected intravenously with bacterial endotoxin per 1kg rabbit body weight. Observe that the temperature rise after the rabbits were injected with bacterial endotoxin. Results: The effects of different doses of endotoxin on the body temperature of rabbits are significantly different. When the injection dose of bacterial endotoxin is 0.5 EU/kg, the body temperature of rabbits is stable. When the injection dose of bacterial endotoxin is above 0.5 EU/kg, the rabbits showed different temperature differences 。

两种生物材料细菌内毒素检查和热原检查方法比较的研究

#基础研究#两种生物材料细菌内毒素检查和热原检查方法比较的研究温庭民,祝君梅,姜华,史弘道摘要:目的本试验对样品管腔支架(镍钛)和支架输送系统进行热原检测。

方法采用细菌内毒素检查和家兔检查法。

结果细菌内毒素试验表明,两样品不合格;热原试验表明,两样品合格。

结论导致鲎试剂凝集不一定就能引起生物体的热原反应。

出现这种不相一致结果的原因很多。

所以在评价生物材料和医疗器械时,建议做热原试验。

关键词:生物材料;细菌内毒素试验;热原试验;生物学评价中图分类号:R31811文献标识码:A文章编号:1009-7090(2001)04-0193-02Com parative Study on Bacterial Endotoxin Test and Pyrogen Test in Evaluation of Two Biomateria ls WE N Ting-min,ZHU Jun-mei,JIANG Hua,SHI Hong-dao Tian j in Institute o f Me dical an d Pharmaceutical Sciences,Tian jin300070Abstract:Objective The pyrogen test was performed in NiTi stent and its delivery system.Methods Bacterial endotoxin test and rabbit test were adopted in this experi ment.Results It was demonstrated the two samples that had passed pyrogen test but both werenot qualified by bacterial endotox in test.Conclusion The result of agglutination in li mulus lysate tes t for a biomaterial i s not assoc-iated with the posi tive pyrogen test.The reasons in causing the inconsistent result are various.Thus the pyrogen test is suggested in e-valuation biomaterials and medical i ns tru ments.Key words:biomaterial;bacterial endotox i n test;pyrogen test;biological evaluation随着生物材料、医疗器械等高新技术的迅猛发展和医疗器械管理法的实施,生物材料和医疗器械在临床使用的安全性问题越来越被重视,对其进行系统的生物学评价则是必要的。

细菌内毒素检查法与家兔法检测注射用甲磺酸帕珠沙星热原的比较

2019 年第 6 卷第 90 期2019 Vol.6 No.90177临床医药文献电子杂志Electronic Journal of Clinical Medical Literature中结气，饮食积聚，寒热邪气，推陈致新。

久服轻身、明目、益精，与天竺黄合用共为君药；僵蚕祛风定惊，化痰散结，钩藤味甘苦，微寒，归经肝经、心经，具有清热平肝、熄风止痉之功效，主治小儿惊风、夜啼、热盛动风、子痫、肝阳眩晕、肝火头胀痛，茯苓利水消肿，渗湿，健脾，宁心，《神农本草经》：“主胸胁逆气，忧恚惊邪恐悸，心下结痛，寒热，烦满，咳逆，口焦舌干，利小便。

久服安魂、养神、不饥、延年。

”脾为生痰之源，茯苓助天竺黄祛其顽痰，姜半夏降逆止呕，降其气机，僵蚕、钩藤、茯苓、姜半夏共为臣药；芍药味苦、酸，气平、微寒，可升可降，阴中之阳，有小毒。

入手足太阴，又入厥阴、少阳之经。

能泻能散，能补能收，赤白相，无分彼此。

其功全在平肝，肝平则不克脾胃，而脏腑各安，火热自散，郁气自除，白术；味苦，甘，性温。

归脾、胃经。

健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎。

用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。

芍药、白术二药相合共为佐药。

综上所述，通过平风化痰汤对脾虚肝旺型小儿多发性抽动症进行治疗可提高治疗的总体效果，降低并发症的发生率，值得推广。

参考文献[1] 王重斌,高瞻.平风化痰汤治疗脾虚肝旺型小儿多发性抽动症的疗效观察[J].现代实用医学,2019,31(05):641-643.本文编辑：刘欣悦·实验研究·细菌内毒素检查法与家兔法检测注射用甲磺酸帕珠沙星热原的比较朱文灯1,2，马晨晨1,2，高晓艳1,2，凌娅1,2（1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏连云港 222001； 2.中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏连云港 222001）【摘要】目的考察注射用甲磺酸帕珠沙星进行细菌内毒素检查的可行性。

方法进行注射用甲磺酸帕珠沙星细菌内毒素检查的干扰试验，对家兔热原试验的注射用甲磺酸帕珠沙星用细菌内毒素检查法进行比较。

细菌内毒素检测无法完全取代家兔热原法

细菌内毒素检测无法完全取代家兔热原法关键词细菌内毒素热原鲎试剂试验用家兔在药品药理检测中，目前有两种常用的热原检测方法细菌内毒素法（鲎试剂法）和家兔法。

虽然细菌内毒素检测法具有简便、快速、灵敏、重现性好等优点，且原来许多利用家兔热原检查法检测的药品均被细菌内毒素检查法所替代。

但由于部分中药注射剂成分较复杂无法通过稀释法消除干扰，再加上鲎试剂对革兰阴性菌以外的内毒素不够灵敏，故细菌内毒素检测法无法完全取代家兔热原检测法。

概述热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

通常所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及细菌内毒素。

可见细菌内毒素是热原之一种。

细菌内毒素一般可分为外毒素和内毒素两类：外毒素是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质，产生外毒素的细菌主要是革兰阳性菌。

内毒素是革兰阴性菌细胞壁的产物，一般活体细菌不会产生，只有当细菌死亡或黏附在其它细胞时，才会释放出内毒素，而脂多糖是内毒素的主要成分，具有特别强的热原活性。

热原按检查法可分为两种，一种是内毒素热原，是革兰阴性细菌细胞壁的组分；另一种是非内毒素热原，除内毒素外的热原。

目前热原常用的检测方法主要是家兔法和细菌内毒素检测法（鲎试剂法）。

热原检查法（家兔法）可用于检测上述两种原因产生的热原反应；细菌内毒素检查法只检测产品的细菌内毒素含量。

当前医药工业中普遍接受的观点是：在生产质量管理规范（GMP）条件下控制内毒素污染就等于控制了热原污染，这也是内毒素检查法迅速普及的原因。

热原检查法家兔热原检测法的建立：由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以半个世纪以来用家兔来检测热原，为保障药品质量和人类用药安全发挥了重要作用。

目前家兔法仍为各国药典规定的检查热原的法定方法。

《中国药典》2010年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

卫生学检查技术—热原和细菌内毒素检查法

若2支供试品管均为(−)，判定供试品符合规定；
若均为（+），判定供试品不符合规定；
若2支供试品管中1支为(+)，1支为(−)，则另取4支复试，4 支中有1支为(+)即认为不合格。
四、注意事项
1．防止鲎试验用水被污染； 2．开启内毒素标准品和鲎试剂时，要将粘附在安瓿瓶上的粉末尽可能弹落下去。用砂轮划过安瓿后，要用酒精棉（最好能用沾异丙醇的无纺布，以避免产生假阳性结果）擦拭，防止开启时玻璃屑落入安瓿内。开启内毒素标准品时，要在安瓿曲颈上部，并尽可能保留较长的安瓿颈，准确加入1.0ml鲎试验用水复溶。
（二）检查方法即凝胶法和光度测定法。凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集
反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。是中国药典的“仲裁” 方法。
二、仪器和试剂
37±1℃恒温水浴或适宜的恒温器具、超净工作台、漩涡混合器、内毒素工作标准品、加样器、鲎试剂、鲎试验用水、pH调节剂等。
鲎试剂
漩涡混合器
加样器
三、测定方法
实验流程
供试品
限值确定
最大有效稀释倍数（MVD）确定
供试品干扰实验
正式实验
结果判断
供试品内毒素检查：凝胶限度试验
编号
A B C D
内毒素浓度／被加入内毒平行管
素的溶液
数
无／供试品溶液22λ／供试Fra bibliotek溶液2
2λ／检查用水
2
无／检查用水
2
A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml)。
将试管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃的恒温器中，保温60±2分钟后，将试管取出，缓缓倒转180°，若管内凝胶不变形，不从管壁脱落为阳性(+)，凝胶不能保持完整并从管壁脱落为阴性(-)。

细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原的比较

细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原的比较目的考察細菌内毒素检查法和家兔法对丹参川芎嗪注射液检查的可行性。

方法采用《中国药典》2010年版一部附录细菌内毒素检查法，对家兔试验进行比较试验。

结果丹参川芎嗪注射液稀释至160倍时，用灵敏度为0.06 EU/ml的鲎试剂进行实验，干扰消失。

家兔热原检查法与细菌内毒素检查法相吻合。

结论采用细菌内毒素检查法和家兔检查法检测丹参川芎嗪注射液热原均可行。

标签：丹参川芎嗪注射液；细菌内毒素；干扰试验；热原丹参川芎嗪注射液为复方制剂，其组分为盐酸川芎嗪和丹参素。

临床用于闭塞性脑血管疾病，如脑供血不足、脑血栓形成、脑栓塞及其他缺血性心血管疾病[1]。

目前《中国药典》2010年版并未收录该品种，本品的现行标准是国家药品监督管理局国家药品标准（试行）WS-10001-（HD-1138）-2002，该标准规定了热原检查法，参照《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧB中药注射剂安全性检查法应用指导原则，该标准的热原检查剂量设计不符合《中国药典》规定，而且无细菌内毒素检查的规定。

为此，本文对本品进行了细菌内毒素检查和热原检查的方法进行研究，报道如下。

1 材料与方法1.1 仪器MS-1型旋涡振荡器（德国IKA）；SUB14型四孔水浴锅（英国GRANT）。

1.2 试剂鲎试剂（TAL）：规格均为0.1 ml/支，湛江安度斯生物有限公司，批号为1109011和1305131，标示灵敏度分别为0.25 EU/ml和0.06 EU/ml；福州新北生物工业有限公司，批号为12020912和12070312，标示灵敏度（λ）分别为0.25 EU/ml和0.06 EU/ml。

细菌内毒素工作标准品（CSE）：中国药品生物制品检定所，批号为150601-201174，规格160 EU/支。

细菌内毒素检查用水（BET水）：湛江安度斯生物有限公司，批号为1109020，规格50 ml/支。

门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查法的研究

门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查法的研究目的建立门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查方法。

方法按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，采用2个不同厂家的鲎试剂对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行研究。

结果根据临床实际应用情况，确定门冬氨酸鸟氨酸注射液的内毒素限值L = 10 EU/mL；本品稀释20倍以后，对细菌内毒素检查无干扰；按拟定标准检验，该品种2个厂家6批样品细菌内毒素检查结果和家兔热原检查结果均符合规定。

结论细菌内毒素检查法可代替家兔热原检查法用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的质量控制。

标签：门冬氨酸鸟氨酸注射液；细菌内毒素检查；干扰试验门冬氨酸鸟氨酸注射液为肝胆疾病辅助用药，临床上主要用于因急、慢性肝病（如各型肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝炎后综合征）引发的血氨升高及治疗肝性脑病，尤其适用于治疗肝昏迷早期或肝昏迷期的意识模糊状态。

国内市场上已有本品的进口药品，目前尚无国内药厂的门冬氨酸鸟氨酸注射液上市。

门冬氨酸鸟氨酸注射液的国家食品药品监督管理局进口药品注册标准采用家兔法进行热原检查，本实验根据《中国药典》2010年版二部“细菌内毒素检查法”[1]99-101和“化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则”[1]212-213，以及相关细菌内毒素检查的文献[2-12]，对门冬氨酸鸟氨酸注射液应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性进行了研究并建立了门冬氨酸鸟氨酸注射液的细菌内毒素检查方法。

1 仪器与试药1.1 仪器VS-1300L-U洁净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司），S648 恒温水浴锅（上海医疗器械七厂），XW-80A混旋仪（上海沪西分析仪器厂有限公司），微量取液器（50～250 μL，上海荣泰生化工程有限公司），细菌内毒素检查用具（湛江博康海洋生物有限公司），智能热原仪（天津大学无线电厂精密仪器厂，ZRY-2D型）。

1.2 细菌内毒素检查用水细菌内毒素检查用水（福州新北生化工业有限公司，批号：11102021，规格：100 mL/瓶）。

辅酶Q10注射液热原标准的研究

辅酶Q10注射液热原标准的研究作者：王丽娟肖中元，周玲，杨红涛，陈真文，程永刚来源：《科技视界》 2015年第17期王丽娟肖中元周玲杨红涛陈真文程永刚（西南药业股份有限公司，中国重庆 400038）【摘要】目的：探讨细菌内毒素检查法测定辅酶Q10注射液中细菌内毒素含量的可行性，并以此建立辅酶Q10注射液热原的质量标准。

方法：按照《中国药典》2010版二部XIE进行。

结果：细菌内毒素法能够用于辅酶Q10注射液的细菌内毒素的测定，检测结果与家兔法一致，其质量内控指标为：将样品稀释400倍后，按《中国药典》2010版二部细菌内毒素法测定，应符合规定。

结论：细菌内毒素法质量内控指标可用于辅酶Q10注射液生产中的质量控制。

【关键词】辅酶Q10；细菌内毒素；质量指标作者简介：王丽娟（1978.01.21—），女，汉族，重庆人，大学学历，西南药业股份有限公司，工程师，主要从事药品检测方法的研究。

辅酶Q10注射液广泛应用于充血性心力衰竭、冠心病、高血压、心律失常、原发性继发性醛固酮增多症、颈部外伤后遗症、脑血管障碍、失血性休克及肝炎等疾病的辅助治疗，但是，国家食品药品监督管理局明文规定，其成品进入市场前必须按照《中国药典》2010版二部的相关规定检查热原。

目前，辅酶Q10注射液热原测定主要采用家兔法，该方法虽然准确度较高，然而存在操作不变且难以到达快速检测的目的等缺陷。

研究表明，细菌内毒素检查法又称鲎试验法(bacterial endatoxin text，BET)检测药品中内毒素含量具有快速、灵敏、经济、重现性好等优点，并在国内外得到了日益广泛的应用。

基于此，本文旨在研究细菌内毒素法检测辅酶Q10注射液中细菌内毒素的可行性，以期建立辅酶Q10注射液热原检测的替代质量标准。

1 试验材料及仪器1.1 辅酶Q10注射液规格：2ml：辅酶Q10 5mg，批号：140808，141101，141102,141103,141104,141105,141106。

门冬氨酸细菌内毒素检查法的研究

门冬氨酸细菌内毒素检查法的研究
廖艳玲
【期刊名称】《广西轻工业》
【年(卷),期】2009(025)008
【摘要】为建立注射用L-门冬氨酸细茵内毒素检查法,按中国药典2005年版附录86"细菌内毒素检查"进行实验和结果判断.通过加入适量1mol/L NaOH溶液和1mol/L HC1溶液调节L-门冬氨酸溶液pH值的方法,L-门冬氨酸(C=1.25%)对东方鲎试剂无干扰,检测细菌内毒素的东方鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml.结论为注射用L-门冬氨酸可用灵敏度为0.25EU/ml的东方鲎试剂检查其细菌内毒素用以代替家兔法检查热原.
【总页数】2页(P8-9)
【作者】廖艳玲
【作者单位】南宁赢创美诗药业有限公司质量控制部,广西,南宁,530100
【正文语种】中文
【中图分类】R927
【相关文献】
1.细菌内毒素检查法检测注射用盐酸大观霉素中细菌内毒素的研究 [J], 孙菊元;顾炳仁
2.门冬氨酸鸟氨酸细菌内毒素检查方法的研究 [J], 马蕴韬;冀增
3.门冬氨酸钾镁注射液的内毒素检查法研究 [J], 黄其春
4.门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查法的研究 [J], 许雷鸣;武谷;顾倩
5.醋酸氯己定冲洗剂细菌内毒素检查法研究 [J], 黄婧;白玲玲;王婷;苏华;王银娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

门冬氨酸注射液热原与致敏物质研究

门冬氨酸注射液热原与致敏物质研究
何晓艳;周辉;扈麟;李子珊
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2024(36)4
【摘要】目的考察门冬氨酸钾镁注射液对家兔给药后是否有热原反应及对豚鼠给药后是否有全身过敏反应,评价该品种安全性,为临床用药提供技术支撑。

方法设置(0.5 mL·kg^(-1))和(1.0 mL·kg^(-1))两组给药剂量,考察18个生产企业18批样品对家兔的热原反应;致敏试验参照Chp 2020年版四部附录1147和《药物非临床研究质量管理规范》方法,考察18批样品、原辅料及主要杂质对豚鼠的致敏反应,通过建立高血钾模型,结合豚鼠血钾浓度进行结果分析。

结果门冬氨酸钾镁注射液对家兔给药后无热原反应,18批样品及门冬氨酸钾辅料有致敏反应。

结论建议现行标准中热原检查项统一给药剂量(1.0 mL·kg^(-1));门冬氨酸钾镁注射剂导致豚鼠发生的过敏症状为高钾血症所致,提示用该品种进行治疗时应关注血钾浓度。

【总页数】5页(P21-25)
【作者】何晓艳;周辉;扈麟;李子珊
【作者单位】湖南省药品审核查验中心;湖南省药品检验研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R965
【相关文献】
1.刺五加注射液致敏性物质筛选的初步研究
2.细菌内毒素检测法与家兔法检测门冬氨酸钾镁注射液热原的比较
3.刺五加注射液致敏物质检测及去除方法
4.注射用双黄连致敏检测方法和致敏物质基础的研究进展
5.HPLC法测定门冬氨酸钾镁注射液中门冬氨酸有关物质及含量
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热原与内毒素的区别

热原与内毒素的区别预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

所以热原有外生致热原和内生致热原之分。

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。

一般来说内毒素是热原,但热原不全是内毒素。

欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。

在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。

热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查法，现已在《中国药典》2010年版二部、三部内广泛应用，但在《中国药典》2010年版一部内一个药品都未运用，这主要是由细菌内毒素检查法的持点所决定的：细菌内毒素检查法具有较家兔热原检查法灵敏、快速、简便易行、重现性好、结果准确等优点，目前细菌内毒素检查法已广泛应用于西药、生物制品。

但同时也应该指出，细菌内毒素检查是一复杂的酶促反应过程，生产工艺的细微变化都可能引起其干扰的增加，然而根据中药制剂，成分复杂，影响因素多的特点，因此，中药注射剂一般还是采用传统的家兔热原检查法。

但是对一些具有解毒降温作用的药物，因会干扰家兔的生理活性，引起体温下降，用家兔法检测不准，还是应考虑用细菌内毒素检查法。

灯盏花素注射液细菌内毒素检查法的研究

灯盏花素注射液细菌内毒素检查法的研究矫建;姜素云;汤新强;张婷婷【摘要】目的建立灯盏花素注射液的细菌内毒素检查法.方法根据<中国药典>2005年版二部收载的细菌内毒素检查法的要求建立实验方法.用所建立的细菌内毒素检查法与家兔法同时对148批样品进行比较试验.结果灯盏花素注射液的浓度在0.625 mg/mL以上对鲎试验的凝胶形成有抑制作用,0.3 mg/mL以下无抑制作用;家兔热原检查法和细菌内毒素检查法的比较试验结果显示,家兔法的阳性率为2.0%,细菌内毒素检查法的阳性率为14.2%,其中有10批样品细菌内毒素为阳性,家兔法全部为阴性,没有出现家兔法阳性而内毒素检查法为阴性的结果;灯盏花素注射液对细菌内毒素的致热活性有一定的抑制作用.结论用细菌内毒素检查法替代家兔法检查热原法是可行的.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2010(031)002【总页数】4页(P76-79)【关键词】灯盏花素注射液;细菌内毒素检查;鲎试剂;热原【作者】矫建;姜素云;汤新强;张婷婷【作者单位】大连医科大学附属第一医院西药局,辽宁,大连,116011;大连药检所药理室,辽宁,大连,116021;大连医科大学附属第一医院西药局,辽宁,大连,116011;大连药检所药理室,辽宁,大连,116021【正文语种】中文【中图分类】R283.3灯盏花素(Breviscapin)是从中药材灯盏花中提取的黄酸类物质，药理研究证明灯盏花素具有保护心脏、肾组织、糖尿病性肝脏，抗血栓形成、心律失常，减少脑组织缺血及再灌注损害，改善糖尿病肾病血液流变学等作用[1-3]。

国内已有多家药厂生产灯盏花素注射液，临床上被广泛用于心、脑血管疾病等的治疗。

目前对灯盏花素的质量标准均采用家兔法检查热原，由于存在成本高、时间长、影响因素多、灵敏度低等缺点，我们进行了细菌内毒素检查法的研究，现将结果报告如下。

1.1 实验材料灯盏花素注射液，批号：060803、060804、060805，规格：2 mL/支，含5 mg，大连弘丰制药厂生产；鲎试剂，批号：060617、060930、060708，灵敏度(λ)分别为0.5 EU/mL、0.125 EU/mL和0.125 EU/mL，湛江生物制品厂生产；细菌内毒素国家标准品，批号：061、924，规格分别为9 000 EU/支和12 000 EU/支。

鲎法与兔法检测9个品种注射剂中热原的比较

鲎法与兔法检测9个品种注射剂中热原的比较
郭修琼
【期刊名称】《中南医学科学杂志》
【年(卷),期】1989(000)002
【摘要】热原检查法至今仍是唯一的古典的限度测定方法——(?),该法存在着一些缺点:1、不能进行比较试验,只能作限度检查;2、很不经济,因做热原的房屋设备和家兔的选择等要求条件高;3、不能用于干扰动物正常生理反应的药物的检查,如对某些放射性药品、洋地黄毒甙及某些激素等。

因而寻找检测热原的新方法,就成为迫切需要解
【总页数】4页(P190-193)
【作者】郭修琼
【作者单位】衡阳医学院第二附属医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.用鲎法与兔法检测大输液的热原比较 [J], 杨新涌
2.鲎法检测50批5％碳酸氢钠注射液中热原的探讨 [J], 孔东升;张裕民
3.兔法与鲎试剂法检测大输液热原控制标准探讨 [J], 司增银;姜隆梅
4.鲎法和兔法检查四种水针剂热原比较 [J], 张志国;赵智华
5.鲎法与兔法检测热原的比较研究 [J], 许文福;吴晓玲
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