微生物菌种保藏的原理和方法

微生物菌种保藏的原理和方法
一、原理：
1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。

2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。

3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。

4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。

二、方法：
1.冷冻保存：
（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。

（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。

（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。

（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。

（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。

2.干燥保存：
（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。

（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。

（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。

（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。

（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。

3.冻干保存：
（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。

（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。

（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。

（4）将混合物分装到冻干瓶中。

（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。

（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。

4.长期保存：
通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。

在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：
1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。

2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。

3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。

4.记录保藏信息：对每个菌种进行标记和记录，包括菌种名称、保存时间、保存条件等信息。

5.定期检测和维护：定期检测保存液和保存条件，确保菌种的保存质量和有效性。

总之，微生物菌种保藏的原理是通过降低温度、去除水分等手段，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程，从而实现长期保存。

不同的保存方法适用于不同的菌种和要求，合理选择保存条件和操作方法对于保存菌种的效果至关重要。