莫丽银桦组培技术研究

doi ：10．3969/j．issn．1000－8101．2013．01．028
莫丽银桦组培技术研究
张晓明，陈叶，邓小梅*
，赵先海，袁金英
（华南农业大学，广州510642）
摘
要：对园林植物莫丽银桦的组培技术进行研究，结果表明，适合诱导的培养基为MS +6－BA 0．5mg /L +IBA
0．01mg /L +GA 30．5mg /L ，诱导率达58%，腋芽健壮嫩绿;较好的增殖培养基为1/2MS +6－BA 1．0mg /L +IBA 0．05mg /L +GA 30．5mg /L ，芽生长健壮，增殖系数可达3．8以上;较好的生根培养基为1/2MS +IBA 0．5mg /L ，生根率达92%。

移栽基质为泥炭土+珍珠岩(V 泥炭土ʒV 珍珠岩=3ʒ1)，移栽成活率可达90%以上。

关键词：莫丽银桦;组织培养;增殖培养
Studies on tissue culture of Grevillea molly ∥ZHANG Xiao-ming ，CHEN Ye ，DENG Xiao-mei ，ZHAO Xian-hai ，
YUAN Jin-ying
Abstract ：The tissue culture technique for garden plant Grevillea molly was studied in this paper．The results showed that the suitable induction medium was MS +6－BA 0．5mg /L +IBA 0．01mg /L +GA 30．5mg /L ，and the adventitious buds robust growth ，verdant ；The proliferation medium was 1/2MS +6－BA 1．0mg /L +IBA 0．05mg /L +GA 30．5mg /L ，and adventitious buds grew well ，green leaves stretch ，plants were robust and the multiplication coefficient up to 3．8；The me-dium for rooting was 1/2MS +IBA 0．5mg /L ，the rooting rate up to 92%．The transplanting matrix were peat and perlite （V peat ʒV perlite =3ʒ1），
and the transplanting survival rate up to 90%．Key words ：Grevillea molly ；tissue culture ；proliferation culture
Author ’s address ：South China Agricultural University ，Guangzhou 510642，China
收稿日期：2012－10－21修回日期：2012－11－08
基金项目：广东省高等学校人才引进科研资助项目（编号：粤教师200886）。

作者简介：张晓明（1986－），男，硕士生，研究方向为林木遗传育种。

通讯作者：邓小梅，女，教授。

E-
mail ：dxmei2006@scau．edu．cn 莫丽银桦（Grevillea molly ）为山龙眼科银桦属植
物，产于澳大利亚昆士兰的海岸和附近岛屿。

常绿灌木，株高1．5m ，叶背银白色，叶面深绿色，叶子蕨叶状深裂，花序圆柱状，花多，鲜红色，花期为冬春季。

其叶形奇特、花姿优雅，在园林应用中可用作绿篱、庭院观赏树木，也可用作木本切花。

同时，莫丽银桦具有抗病虫害、耐旱等抗性，适生范围广，2003年引入我国广州，目前生长开花正常，
表现出良好的观赏性图1
莫丽银桦花序
（图1），推广应用前景大。

由于莫丽银桦为新引进品种，尽管已正常开花，但不结实，常规主要采用扦插技术进行扩繁，但扦插生根率低，无法达到大
量繁殖的目的。

本研究建立的莫丽银桦组培快繁技术，
将为其规模化育苗及推广应用提供技术支撑。

迄今为止，有关银桦属的红花银桦［1］
、白翅银桦［2］
组培
试验研究在国内外已有报道，但莫丽银桦的组培快繁
试验尚未见报道。

1材料与方法1．1
材
料
以莫利银桦成年树半木质化带芽茎段为试验材料，取自华南农业大学林学院苗圃。

1．2方
法
1．2．1
外植体的处理
采集半木质化嫩枝为外植体，剪去嫩枝上的叶片，之后用5%洗洁精溶液浸泡5min ，用软毛笔清洗叶腋，自来水冲洗干净后备用。

1．2．2
无菌系的建立
在超净工作台上，按外植体的幼嫩程度在0．1%的升汞中消毒3 10min ，最后用无菌水冲洗5 6次，将灭过菌的外植体切成1．0 2．0cm 的带芽茎段，迅速接种于A1 A4号诱导培养基上，每瓶接种1个外植体，每种处理接种50瓶。

30d 后观察外植体的生长情况。

1．2．3丛芽增殖培养
试验选用1/2MS为基本培养基，各激素水平见表2、表3。

每种处理接种5瓶，每瓶接种6个带2个叶腋的茎段，重复3次。

通过激素种类及质量浓度的配比等调控，提高增殖系数及有效芽数。

1．2．4生根培养
选取经继代培养后生长健壮、高在1．0cm以上的芽，将其接种于生根培养基中进行生根培养。

以1/2MS为基本培养基，分别添加4个浓度梯度的NAA和IBA，共9个处理进行生根培养研究。

每种处理接种5瓶，每瓶接种6株芽，重复3次。

21d后观察其生根情况。

1．2．5炼苗移栽
移栽前将生根瓶苗置于温室炼苗7d，之后将洗净的幼苗移栽到消毒好的基质（V泥炭土ʒV珍珠岩=3ʒ1）中，浇透水，再用塑料薄膜覆盖，以便保温保湿。

15d 后，揭开塑料薄膜进行常规管理。

30d后观察统计其移栽成活率。

1．2．6培养条件
接种好的试验材料置于培养室进行培养，温度为（25ʃ2）ħ，以日光灯为光源，光照强度为1500 2000lx，光照时间12h/d［3］。

1．2．7数据计算
诱导率=（萌发腋芽的外植体数/接种外植体数）ˑ100%；增殖系数=每个处理接出的总瓶数/每个处理母瓶数；生根率=（生根芽数/接种芽总数）ˑ100%。

2结果与分析
2．1不同激素处理组合对外植体腋芽诱导的影响激素的种类、浓度及其配比对莫丽银桦腋芽的诱导及生长起着重要作用。

在不添加任何激素的MS 培养基中，没有腋芽萌动，诱导率为0。

在激素浓度较低的2号培养基上，腋芽萌动较慢，虽诱导率达39%，但腋芽生长慢，玻化严重，最后变褐死亡。

在提高细胞分裂素浓度的A3号培养基上，腋芽萌动加快，诱导率提高到56%，但芽伸长生长慢。

在A3号培养基上加入适量的GA3对腋芽的伸长生长有明显的促进作用（表1）。

由此可见，添加激素对诱导莫丽银桦是必需的，较好的诱导培养基为6－BA0．5mg/L、IBA0．01mg/ L和GA
3
0．5mg/L激素组合（图2－A）。

2．2不同基本培养基、激素配比对增殖效果的影响2．2．1基本培养基的筛选
分别以1/2MS与MS作为基本培养基进行筛选，试验结果表明莫丽银桦在1/2MS培养基中的增殖效果优于MS培养基，表现为不定芽生长健壮、叶片舒展。

可能与MS中高含量的无机盐不同程度地诱导不定芽玻璃化的产生有关，这与张宏志等［4］结论相符。

而选用1/2MS作为基本培养基则能有效地减少玻化现象的产生。

表1不同激素处理组合对莫丽银桦外植体
腋芽诱导的影响/（mg·L－1）处理诱导培养基诱导率/%生长情况
A1MS0基本无腋芽萌动
A2MS+6－BA0．2+NAA0．0139
腋芽20d开始萌动，严重玻
化，之后慢慢变褐死亡
A3MS+6－BA0．5+IBA0．0156
腋芽14d开始萌动，芽短，
轻微玻化
A4
MS+6－BA0．5+IBA0．01
+GA30．558
腋芽14d开始萌动，叶绿，
芽长而壮，轻微玻化2．2．2不同细胞分裂素浓度对增殖效果的影响6－BA能有效诱导不定芽的增殖。

试验结果表明，当6－BA浓度从1号处理的0．1mg/L上提高到3号处理的1．0mg/L时，其增殖系数也相应的从1．25提高到了3．82；但当6－BA浓度继续提高到1．5mg/L 及以上时，其增殖系数反而下降（表2），且不同程度地出现了玻化和褐化现象。

如在6－BA浓度达到2．0 mg/L的5号培养基上，丛芽基部有白色愈伤组织的产生，不定芽质量明显下降。

本实验说明高浓度的细胞分裂素容易导致莫丽银桦组培苗玻璃化，而且玻璃化苗发生程度和细胞分裂素浓度呈正相关，这与蔡祖国等［5］结论相似。

表2不同6－BA浓度对莫丽银桦增殖效果的影响
处理
6－BA/
（mg·L－1）
增殖
系数
生长情况
10．11．25D芽生长好且健壮，叶片嫩绿舒展，腋芽少20．52．35C芽生长好且健壮，叶片嫩绿舒展，腋芽少31．03．82A
芽生长好，叶片嫩绿舒展，芽整齐，生长
良好，腋芽较多
41．52．91B
芽生长较好，叶片舒展，芽整齐，生长良
好，腋芽较多，轻微玻化、褐化52．01．17D
芽生长较差，叶片瘦小黄化，玻化、褐化，
基部有白色愈伤
注：本试验添加IBA0．01mg/L、GA30．5mg/L；大写字母表示5%水平的显著差异。

为了探讨生长素浓度对莫丽银桦增殖生长的影响，试验固定6－BA1．0mg/L、GA30．5mg/L，添加不同浓度的IBA。

在IBA浓度分别为0．01、0．05mg/L 的6、7号培养基上，增殖系数及芽生长没有显著差异。

但随着IBA浓度的继续增加，增殖系数下降，玻化、褐化及烂顶现象加重，直接影响不定芽的增殖生长（表3）。

本实验也说明高浓度的生长素同样容易
导致莫丽银桦组培苗玻璃化的产生。

表3
不同IBA 浓度对莫丽银桦增殖效果的影响
处理IBA /（mg ·L －1）增殖系数苗生长情况
60．013．75A 叶片嫩绿舒展，苗长势整齐一致，生长良好，腋芽多70．053．86A
叶片嫩绿舒展，苗长势整齐一致，生长良好，腋芽多
80．13．42AB
叶片舒展，苗较壮，有少量淡黄色愈伤，
轻微玻化、烂顶90．153．22B 叶片嫩绿舒展，玻璃化，苗长势较好，轻微烂顶现象
10
0．2
2．41C
叶片嫩绿舒展，玻化、褐化，苗长势差，烂顶现象严重
注：本试验添加6－BA 1．0mg /L 、
GA 30．5mg /L ；大写字母表示5%水平的显著差异。

综合以上分析，以7号处理（MS +6－BA 1．0mg /L
+IBA 0．05mg /L +GA 30．5mg /L ）的增殖系数最大，不定芽生长健壮整齐，叶片嫩绿舒展，为最佳增殖培养基（图2－B ）。

2．3
不同生长素浓度对莫丽银桦生根效果的影响不添加生长素的C1号培养基上基本没有根的
产生，
而添加不同浓度NAA 或IBA ，均能在一定程度上诱导莫丽银桦生根，植株生长情况见表4。

IBA 对
莫丽银桦的生根效果优于NAA 。

在IBA 浓度为0．5
mg /L 时，生根效果最好，转入生根培养基上7d 后，组培苗基部便膨大；10d 左右可以看到白色的短根从基部长出；30d 生根率达92%，根粗壮且长，苗生长健壮。

但随着生长素浓度的提高，
生根率开始下降（图2－C ）。

莫丽银桦最佳生根培养基为C7处理：1/2MS +IBA 0．5mg /L 。

表4
不同生长素种类及水平对莫丽银桦生根效果的影响
处理NAA /（mg ·L －1）IBA /（mg ·L －1
）生根率/%平均根长/
（cm ·条－1）
植株生长状况C1――00无根萌动，苗生长健壮C20．2―53．032．05根细弱且长势一般，苗生长
健壮
C30．5―57．581．63根粗壮，须根多，苗生长一般C40．8―64．671．80根粗壮且长，有淡黄色愈伤，苗生长一般C51．0―62．122．09根粗壮，愈伤多，苗生长一般C6―0．241．631．64根粗壮且有较多须根，苗生长健壮
C7―0．592．562．14根粗壮且长，苗生长健壮C8―0．846．221．93根粗壮且长，苗生长健壮C9
―
1．0
79．13
2．63
根粗壮且长，
苗生长健壮
2．4生根苗移栽
生根试管苗的移栽是组织培养育苗的重要环节，
生根培养21d 后，将瓶苗放到温室炼苗5 7d ，使幼苗逐渐适应外界环境。

将基质在太阳下充分曝晒后，用800倍多菌灵溶液消毒待用。

将试管苗取出洗净后移栽到基质（V 泥炭土ʒV 珍珠岩=3ʒ1）上，
浇透水，用塑料薄膜覆盖，并遮阴。

结果表明：4月份，移栽后第14
天萌发新芽，第18天萌发新根，第28天新芽抽枝达3cm ，并开始萌发侧根，30d 后苗生长良好，新叶嫩绿光亮，移栽成活率达90%以上。

3讨论
据文献资料所得，在多花银叶树（Leucadendron
floridum ）［6］、澳洲坚果（Macadamia integrifolia ＆Mac-adamia tetraphylla ）［7］、极美泰洛泊（Telopea speciosiss-ma ）［8］等多种山龙眼科植物组织培养试验过程中，在1/2MS 培养基上均能培养成功，而在MS 培养基上则
容易玻化、
褐化，这一结论与本研究实验结果相一致。

培养基中的生长素和细胞分裂素浓度对莫丽银
桦组培苗生长有显著影响。

在增殖培养过程中，较高浓度的生长素和细胞分裂素则容易造成组培苗玻化、
褐化，不利于莫丽银桦不定芽的分化。

本试验得出最佳的增殖培养基为1/2MS +6－BA 1．0mg /L +IBA 0．05mg /L +GA 30．5mg /L 。

以1/2MS +IBA 0．5mg /L 为生根培养基，组培
苗生长健壮，根系质量好，第21天生根率高达92%。

但如要进行规模化生产，还需进一步优化培养基及培养条件，提高生根率。

参考文献
［1］萧洪东，邝健智，胡羡聪，等．红花银桦的组织培养与快速繁殖［J］．植物生理学通讯，2008，44（1）：129－130．
［2］赵平丽，奚如春，叶小玲，等．白翅银桦组培快繁技术研究［J］．江西林业科技，2011（3）：12－15．
［3］潘瑞炽．植物组织培养［M］．广州：广东高等教育出版社，2003．［4］张宏志，唐前瑞，周朴华．观赏植物试管苗玻璃化现象及防治［J］．湖南农业大学学报，2000，26（4）：318－322．
［5］蔡祖国，符树根，黄宝祥，等．植物组织培养中玻璃化现象的研究进展［J］．江西林业科技，2005（2）：35－38．
［6］王奇，胡秀，范贤熙，等．多花银叶树组织培养研究［J］．山东林业科技，2006（5）：11－13．
［7］郭凌飞，彭靖茹，覃剑峰，等．澳洲坚果组织培养研究初报［J］．中国农学通报，2010，26（22）：385－388．
［8］范贤熙，胡秀，王奇，等．木本切花植物极美泰洛泊的组织培养研究［J］．西部林业科学，2006，35（2）：86－89．
(责任编辑史洁葛华忠
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