注射用曲克芦丁发生临床ADR后动态浊度法测定细菌内毒素含量

注射用曲克芦丁发生临床ＡＤＲ后动态浊度法
测定细菌内毒素含量
于德志１，２，方选２，张琪２，杨钊２
（１．青岛大学药学院，青岛２６６０２１；
２．青岛市食品药品检验研究院，青岛２６６０７１）
摘要　目的：建立细菌内毒素动态浊度法，定量检测涉药物不良反应ＡＤＲ批次与正常批次注射用曲克芦丁中内毒素含量的差异。

方法：依据《中华人民共和国药典》２０１５年版四部通则１１４３“细菌内毒素检查法”中动态浊度法，建立细菌内毒素检查的标准曲线并作可靠性分析，对供试品中的细菌内毒素进行定量检测。

结果：经干扰预试验选择注射用曲克芦丁稀释４０倍即１ ２５ｍｇ·ｍＬ－１浓度时对试验无干扰作用，细菌内毒素回收率均符合５０％～２００％范围要求，６批次供试品中内毒素含量均符合规定，但涉ＡＤＲ的２个批次的内毒素含量显著高于合格样品。

结论：建立的动态浊度法可用于定量检测注射用曲克芦丁的细菌内毒素含量，可更清晰、可靠地用于比较产品批次间质量差异。

关键词：注射用曲克芦丁；细菌内毒素；动态浊度法；含量测定
中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２１）０２－０１８７－０５
ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２１ ０２ ０１８
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄａｆｔｅｒｃｌｉｎｉｃａｌＡＤＲｏｃｃｕｒｒｅｄ
ＹＵＤｅｚｈｉ１，２，ＦＡＮＧＸｕａｎ２，ＺＨＡＮＧＱｉ２，ＹＡＮＧＺｈａｏ２
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＱｉｎｇｄａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６０２１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＱｉｎｇｄａｏＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６０７１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｉｎｏｒｄｅｒｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｂｅｔｗｅｅｎＡＤＲ（ＡｄｖｅｒｓｅＤｒｕｇＲｅａｃｔｉｏｎ）ｂａｔｃｈｅｓａｎｄｑｕａｌｉｆｉｅｄｂａｔｃｈｅｓｏｆｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎｆｏｒｉｎｊｅｃ ｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｉｎｇｅｎｅｒａｌｃｈａｐｔｅｒｓ１１４３ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ２０１５ＶｏｌⅣ，ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｌｉ ａｂｉｌｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｍａｄｅ Ｔｈｅｎｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｔｅｓｔｓａｍｐｌｅｓｗａｓｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄ Ｒｅ ｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｐｒｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎｈａｄｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔａｔ４０ｔｉｍｅｓｄｉｌｕｔｉｏｎ（１ ２５ｍｇ·ｍＬ－１） Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｆｅｌｌｉｎｔｏｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ５０％－２００％．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎ６ｂａｔｃｈｅｓｏｆｓａｍｐｌｅｓｍｅｔｔｈｅｃｒｉｔｅｒｉａ，ｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎ２ＡＤＲｂａｔｃｈｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｑｕａｌｉｆｉｅｄｓａｍｐｌｅｓ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉ ｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ
　第一作者简介：于德志，副主任药师；研究方向：药物分析、药理毒理及质量标准。

Ｔｅｌ：０５３２ ５８７５９１７６；Ｅ ｍａｉｌ：ｑｄｙｕｄｚ＠１６３ ｃｏｍ
通讯作者简介：杨钊，主任药师；研究方向：药物分析及质量标准。

Ｔｅｌ：０５３２ ５８７５９１８８；Ｅ ｍａｉｌ：ｙａｎｇｚｈａｏ＠ｑｉｎｇｄａｏ ｇｏｖ ｃｎ
ｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｔｃｈｅｓｍｏｒｅｃｌｅａｒｌｙａｎｄｒｅｌｉａｂｌｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；ｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
曲克芦丁系通过槐米等植物部位提取后多步合成得到，具有抑制红细胞和血小板凝聚、防止血栓形成、改善微循环、增加血中氧含量、促进新血管生成增进侧支循环，同时能保护血管内皮细胞，降低毛细血管通透性，等等。

能溶于水易吸收，临床应用极为广泛，近年该品种注射剂常用于缺血性脑血管病静脉炎及血管通透性增高所致水肿等症［１］。

前期国内某厂家品种注射用曲克芦丁被监测到发生临床药物不良反应（ＡｄｖｅｒｓｅＤｒｕｇＲｅａｃｔｉｏｎ，ＡＤＲ）聚集性信号，症见热原反应，发热寒战，其中一个批次一天内发生２例无血压变化记录；另两个批次１５天内发生１３例，发热３８ ３～３９ ３℃不等，且个别病例见血压下降，查阅ＡＤＲ报告无进一步诊断分析。

考虑到发生热原反应的常见致热原性物质是细菌内毒素，其化学成分是磷脂 多糖 蛋白质复合物［２］。

分析其致热原反应的原因，细菌内毒素及微粒异物等是重点考察因素［３ ４］。

接到通告后该品种涉及聚集性信号批次被厂家悉数召回，并由法定药检机构按质量标准出具全检报告，各项目均符合规定，其中细菌内毒素检查项目为合格，但实际法定质量标准检验中采用的是凝胶限度法，不能清晰定量比较批间内毒素含量差异情况，查询文献未检索到该品种细菌内毒素定量法报道，为了探讨后续评估风险因素的研究方向，本次研究依据《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）２０１５年版四部通则１１４３“细菌内毒素检查法”［５］项下动态浊度法的要求，建立了动态浊度法并定量测定了相关各批次产品的细菌内毒素含量差异情况，并据此分析讨论其ＡＤＲ、检测、质控及生产相关性。

１　仪器与试药
１ １　仪器
细菌内毒素测定仪，型号：ＢＥＴ ４８Ｇ，天津天大天发科技有限公司；恒温水浴槽，型号：ＰＵＲＡ２２，优莱博技术（北京）有限公司；涡旋振荡器，型号：ＭＳ３ＢＳ２５，艾卡（广州）仪器设备有限公司；电热鼓风干燥箱，型号：ＤＨＧ ９２４５Ａ，上海一恒科学仪器有限公司。

１ ２　试剂及试药
定量鲎试剂，规格：１ ２５ｍＬ·支－１，批号：１９０３２９０，检测范围：１０～０ ０１ＥＵ·ｍＬ－１；凝胶法鲎试剂，规格０ ２５ＥＵ·ｍＬ－１，０ １ｍＬ·支－１，批号：２００２２４３，（湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素工作标准品，批号：１５０６０１ ２０１６８１，８０ＥＵ·支－１，（中国食品药品检定研究院）；细菌内毒素检查用水（以下简称ＢＥＴ水），内毒素含量＜０ ００３ＥＵ·ｍＬ－１，批号：１９０４３００，（湛江安度斯生物有限公司）。

注射用曲克芦丁，规格：０ １ｇ·瓶－１，涉ＡＤＲ批号：ＡＤＲ ００７、ＡＤＲ ２０６、ＡＤＲ ４０７共三批，正常批号：ＮＯＲＭ １０６、ＮＯＲＭ １０７、ＮＯＲＭ ２０７共三批，（均由国内某药业有限公司提供）。

２　方法与结果
２ １　标准曲线绘制及可靠性考察
２ １ １　限值（Ｌ）确认
注射用曲克芦丁临床静脉给药最大用量为每日一次０ ４８ｇ，按人均体重６０ｋｇ计算其内毒素限值Ｌ为０ ６２５ＥＵ·ｍｇ－１［５］，实际该标准中内毒素限值为０ ３ＥＵ·ｍｇ－１，符合《中国药典》２０１５年版四部通则９３０１“注射剂安全性检查法应用指导原则”中细菌内毒素适当严格至计算值的１／３～１／２要求［６］，本研究旨在其原质量标准规定细菌内毒素限值的基础上进行测试比较内毒素含量差异，不对标准中细菌内毒素限值的适宜性进行考察。

２ １ ２　测定条件确定
依细菌内毒素测定仪设定检测波长４０５ｎｍ，供试品稀释后检测时，见试验反应曲线有异常，经空白测定，该波长下供试品空白测定曲线有异常波动，会影响实验结果，分析为曲克芦丁药品的黄色对该波长处有吸收干扰，改用６６０ｎｍ作为本试验检测波长，见供试品空白测定曲线平稳，故选择测试波长定为６６０ｎｍ，以避免供试品本身颜色干扰。

２ １ ３　测定标准曲线绘制
细菌内毒素测定仪的测试定量方法选择反应时间法 ＳＴＰ，温度３７ ０℃，检测波长６６０ｎｍ，预设ＯＤ值０ ０２，零化期时间２６０ｓ，取细菌内毒素工作标准品一支，用细菌内毒素检查用水（ＢＥＴ水）溶解后在涡旋振荡器上震荡混合１５ｍｉｎ以上，用ＢＥＴ水逐级稀释成浓度为２ ０、０ ５、０ １２５、０ ０３１ＥＵ·ｍＬ－１４个标准内毒素浓度点，分别取０ １ｍＬ分别加至
０ １ｍＬ鲎试剂反应管内，混匀检测，每一浓度做３支平行管，同时取ＢＥＴ水０ １ｍＬ加入０ １ｍＬ鲎试剂反应管内设为阴性对照（ＮｅｇａｔｉｖｅＣｏｎｔｒｏｌ，ＮＣ），重复２支ＮＣ平行管，进行标准曲线的可靠性试验。

ＮＣ的吸收度小于或透光率大于标准曲线最低点的检测值，且反应时间大于标准曲线最低浓度点的反应时间时，即将全部数据纳入进行线性回归分析，考察平均反应时间对数值（ｌｇＴ）与内毒素浓度对数值（ｌｇＣ）的相关性，数值采用最小二乘法进行回归处理［７ １０］。

结果见表１。

表１　细菌内毒素标准曲线及可靠性考察（ｎ＝３）
Ｔａｂ １　Ｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎａｎｄｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ（ｎ＝３）
内毒素浓度
（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）／（ＥＵ·ｍＬ－１）
平均反应时间
（ｍｅａｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｉｍｅ）／ｓ
ＲＳＤ／
％
实测值
（ｍｅａｓｕｒｅｄｖａｌｕｅ）／（ＥＵ·ｍＬ－１）
ＮＣ＞５０００／＜ＬＯＤ２ ０６８１１ ６６１ ６６４３０ ５８６８２ ４４０ ５９４８０ １２５１１９５０ ９５０ １５３３０ ０３１１８２０１ １７０ ０２５７
标准曲线的回归方程为ｌｇＴ＝２ ８８５３１－０ ２３５７９ＬｇＣ，相关系数ｒ＝－０ ９９２６，相关系数绝对值大于０ ９８０，平行管之间的变异系数ＲＳＤ均小于１０％，内毒素浓度在０ ０３１３～２ ０ＥＵ·ｍＬ－１范围内线性关系良好，且两支ＮＣ管的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，符合标准曲线的可靠性要求，细菌内毒素标准曲线成立。

２ ２　最大有效稀释倍数（ＭＶＤ）计算及稀释倍数确定
取供试品１支用ＢＥＴ水２ｍＬ溶解，制成５０ｍｇ·ｍＬ－１供试品原液，本品细菌内毒素限值（Ｌ）为０ ３ＥＵ·ｍｇ－１，λ为标准曲线最低点浓度０ ０３１ＥＵ·ｍＬ－１，按照公式ＭＶＤ＝Ｃ·Ｌ／λ，ＭＶＤ＝５０×０ ３／０ ３１２５＝４８０倍［５］。

预干扰试验选择一个供试品批号按２０倍、４０倍、８０倍稀释倍数进行测试，三个稀释倍数回收率均符合５０％～２００％要求，实际试验选择对供试品原液进行４０倍稀释后进行内毒素检测。

２ ３　干扰试验［５］
选择标准曲线靠近中点的一个浓度０ ５ＥＵ·ｍＬ－１作为干扰试验的加标内毒素浓度（设为λ
ｍ
）制备各测试溶液Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ。

Ａ为稀释倍数为４０倍的各批号供试品溶液；Ｂ为加入０ ５ＥＵ·ｍＬ－１内毒素浓度的与溶液Ａ相同稀释倍数的各批号供试品溶液；Ｃ为制备标准曲线的四个标准内毒素浓度，见表１值；Ｄ为阴性对照ＮＣ。

测试平行管设置Ｃ３支，Ａ、Ｂ、Ｄ各２支。

计算各批样品变异系数及回收率［５］，结果见表２。

各测试样品外加内毒素回收率均在５０％～２００％范围内，说明供试品溶液不存在干扰作用，本次试验系统中测得内毒素含量数值可信有效。

２ ４　动态浊度法测定细菌内毒素含量结果
供试品检查同“２ ３”项下的方法，配制的原液５０ｍｇ·ｍＬ－１，计算得到原药细菌内毒素含量测定结果见表２，结果６批样品细菌内毒素含量均小于质量标准规定的限值０ ３ＥＵ·ｍｇ－１，符合规定，但从实验结果中，仍见涉ＡＤＲ的３批次样品中２批次的细菌内毒素含量高于同测的３批正常样品１０倍左右，且接近于限值，经复测的数据及趋势基本与上述结果一致。

２ ５　凝胶法检查细菌内毒素限度验证
本试验依据《中国药典》２０１５年版四部通则１１４３“细菌内毒素检查法”项下凝胶法进行细菌内毒素检查验证，取供试品１支用ＢＥＴ水２ｍＬ溶解，制成５０ｍｇ·ｍＬ－１供试品原液，采用灵敏度０ ２５ＥＵ·ｍＬ－１规格凝胶法鲎试剂，计算ＭＶＤ为６０倍，原液直接按ＭＶＤ倍数稀释后测试，设供试品（ＮＰＣ）２支，阴性对照（ＮＣ）２支，阳性对照（ＰＣ）２支，供试品阳性溶液（ＰＰＣ）２支，结果按照注射用曲克芦丁国家药品标准［１１］内毒素限度判定，见表３。

上述六批次制剂经实验室细菌内毒素凝胶法再验证，细菌内毒素含量均低于０ ３ＥＵ·ｍｇ－１，其中三个涉ＡＤＲ批次内毒素限度结果与国家抽检检验判定结果一致，均符合规定。

表２　干扰试验及供试品细菌内毒素含量的测定结果（ｎ＝２）
Ｔａｂ ２　Ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓ
批号（ｌｏｔＮｏ ）稀释倍数
（ｄｉｌｕｔｉｏｎ
ｔｉｍｅｓ）
外加内毒素
（ａｄｄｅｄｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）／
（ＥＵ·ｍＬ－１）
平均反应时间
（ｍｅａｎｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｔｉｍｅ）／ｓ
ＲＳＤ／
％
回收率
（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）／
％
实测值
（ｍｅａｓｕｒｅｄｖａｌｕｅ）／
（ＥＵ·ｍＬ－１）
原液含量
（ｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎ
ｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）／
（ＥＵ·ｍＬ－１）
原药内毒素量
（ｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎ
ｉｎｄｒｕｇ）／
（ＥＵ·ｍｇ－１）
ＮＣ／／＞５０００／／／＜ＬＯＤ＜０ ０１ＮＯＲＭ １０６４００２０５４１ ４１０ ０１５４０ ６１６０ ０１２ＮＯＲＭ １０６４００ ５８３０１ １１１４１０ ７２０９／
ＮＯＲＭ １０７４００２１１８３ ５１０ ０１３５０ ５４０ ０１１ＮＯＲＭ １０７４００ ５８６１０ ８２１２００ ６１５５／
ＮＯＲＭ ２０７４００２０９９２ ２２０ ０１４１０ ５６４０ ０１１ＮＯＲＭ ２０７４００ ５８３６０ ５１１３６０ ６９７５／
ＡＤＲ ００７４００３０００１ ２５０ ００３１０ １２４０ ００２ＡＤＲ ００７４００ ５８５２０ ５８１２７０ ６４２１／
ＡＤＲ ２０６４００１２６５１ ４５０ １２０４４ ８１６０ ０９６ＡＤＲ ２０６４００ ５８１６０ ０９１３００ ７７０９／
ＡＤＲ ４０７４００１０８０１ ３１０ ２３５４９ ４１６０ １８８ＡＤＲ ４０７４００ ５７９６２ ０４１２４０ ８５６４／
表３　细菌内毒素凝胶法检测结果（ｎ＝３）
Ｔａｂ ３　Ｔｈｅｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎｂｙｇｅｌ ｃｌｏｔｍｅｔｈｏｄ批号（ｌｏｔＮｏ ）ＮＰＣＮＣＰＣＰＰＣ
ＮＯＲＭ １０６－－－－＋＋＋＋
ＮＯＲＭ １０７－－＋＋
ＮＯＲＭ ２０７－－＋＋
ＡＤＲ ００７－－＋＋
ＡＤＲ ２０６－－＋＋
ＡＤＲ ４０７－－＋＋
３　讨论
３ １　建立动态浊度法的意义
动态浊度法属于光度测定法，检测反应混合物的浊度到达某一预设吸光度所需的反应时间，该法具有检测范围宽，灵敏度高，稳定性好，操作简便等优点。

相较于凝胶法干扰实验操作步骤复杂，光度法可通过回收率数值直接判断干扰趋势，操作便捷更具优势，而且能定量区分批次间内毒素含量波动的质量差异情况。

动态法检测限范围宽于凝胶法，目前检测限可达０ ００１ＥＵ·ｍＬ－１，而凝胶法最高灵敏度为０ ０３ＥＵ·ｍＬ－１，由此动态法使有干扰样品具备更多的稀释空间，对部分使用凝胶法干扰不易排除的样品测试更友好。

本研究建立的动态浊度法干扰试验测试稀释倍数外加内毒素标准品回收率符合５０％～２００％的要求，显示无干扰，能满足定量区分批间细菌内毒素含量差异的质量风险控制要求。

３ ２　光度测定法的检测样品颜色干扰问题
注射用曲克芦丁为黄色或浅黄色，４０５ｎｍ波长时有干扰吸收，本试验中采用了６６０ｎｍ波长测试，效果较好。

实际测试中如遇样品颜色干扰可以考虑更换不同波长测试，或换高灵敏度鲎试剂增加稀释倍数，以减少样品颜色对测试数据的干扰影响［１２］。

３ ３　凝胶法与定量法数据比较分析
注射用曲克芦丁６批次经凝胶法与动态浊度法测试，细菌内毒素含量均低于法定标准［１０］“每１ｍｇ曲克芦丁中内毒素的量应小于０ ３０ＥＵ。

”的要求，按标准均符合规定，但凝胶法内毒素的量各批次间无法区别，即合格前提下无法判别各批次内毒素含量质控的优劣差异。

而建立动态浊度法可清晰明确地定量区分各批次间内毒素控制的质量差异，涉ＡＤＲ的三个批次内毒素含量虽低于标准限度值，仍见涉ＡＤＲ的三批次样品中两批次的细菌内毒素含量高于同测的３批正常样品１０倍左右，且接近于限值，存在一定质量风险。

本研究虽未能确定制剂内毒素含量超标原因，但从生产企业角度看，药品生产中间产品及终产品采用光度测定法定量检测细菌内毒素的量，更能清晰掌握批次间细菌内毒素含量的波动情况，更有利于分析和提前把控质量安全风险因素。

３ ４　该制剂可能的风险点的分析
细菌内毒素为最常见的主要外源性致热源，内
毒素主要为脂多糖及其他蛋白质等组成，是注射剂型应严格控制的高风险质量指标，控制不好经静脉进入人体易引起强烈的发热反应，重者血压降低、休克、昏迷甚至危及生命［２］。

本次研究中临床发生ＡＤＲ反应信号涉及的注射用曲克芦丁批次，检查内毒素含量均低于法定质量标准限度值，但从建立的内毒素定量法测试数据见，涉ＡＤＲ的２个批号产品内毒素含量已基本达到标准限值的一半，存在一定风险性，且远高于同测三批正常样品。

其中监测到涉ＡＤＲ批次中ＡＤＲ ２０６批号９ｄ内ＡＤＲ报告５例，ＡＤＲ ４０７批号１２ｄ内ＡＤＲ报告８例，ＡＤＲ ００７批号同日ＡＤＲ报告２例，且从ＡＤＲ病例数及描述看前二者不良反应显著高于后者，能与测试数据对应，ＡＤＲ ００７批号ＡＤＲ不排除其他原因。

基于质量风险控制，建议企业日常生产中通过动态浊度法掌握产品内毒素含量波动情况并建立曲线，同时密切关注内毒素含量偏高批次与临床ＡＤＲ的相关性，如有必要可考虑提高内毒素质量标准限度。

从该涉ＡＤＲ批次产品内毒素含量数值偏高上分析其风险因素，鲎试剂可检测的内毒素为脂多糖，考虑到曲克芦丁主成分为三羟乙基芦丁，来源于槐米提取芦丁经羟乙基化［１］，虽控制纯度及杂质限度，但因其天然产物来源，仍可能引入环境内毒素诸如蛋白质等大分子物质成分，法定标准中并无该类质控指标。

近年见中药注射剂临床不良反应事件频发，其中大分子物质含量控制不到位是一个很大的风险因素［１３］，提示后续研究中涉ＡＤＲ批次注射剂可考虑从大分子物质如多糖、蛋白等维度分析。

参考文献
［１］　曹婉鑫，唐瑶，陈洋 曲克芦丁药理作用的研究进展［Ｊ］．中国食物与营养，２０１５，２１（９）：７３
ＣＡＯＷＸ，ＴＡＮＧＹ，ＣＨＥＮＹ Ｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｒｏｘｅｒｕｔｉｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＮｕｔｒＣｈｉｎａ，２０１５，
２１（９）：７３
［２］　ＳＡＮＤＬＥＴ Ｐｙｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．Ｓｔｅｒｉｌ，ＳｔｅｒｉｌｉｓａｔＳｔｅｒｉｌＡｓｓｕｒＰｈａｒｍ，２０１３，１８（３）：２１
［３］　钟洪兰 输液反应的原因分析和处理［Ｊ］．广东药学，２００２，
１２（４）：４９
ＺＨＯＮＧＨＬ Ｃａｕｓｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎ
［Ｊ］．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍＪ，２００２，１２（４）：４９
［４］　张虞婷，丁苏苏，李倚云 细菌内毒素的研究进展及其检查法的应用［Ｊ］．天津药学，２０１５，２７（５）：６６
ＺＨＡＮＧＹＴ，ＤＩＮＧＳＳ，ＬＩＹＹ Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄａｐｐｌｉｃａ
ｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔ［Ｊ］．ＴｉａｎｊｉｎＰｈａｒｍ，２０１５，２７
（５）：６６
［５］　中华人民共和国药典２０１５年版 四部［Ｓ］．２０１５：１５４ＣｈＰ２０１５ ＶｏｌⅣ［Ｓ］．２０１５：１５４
［６］　中华人民共和国药典２０１５年版 四部［Ｓ］．２０１５：４００ＣｈＰ２０１５ ＶｏｌⅣ［Ｓ］．２０１５：４００
［７］　尹立平 细菌内毒素检查法 动态浊度法［Ｊ］．天津药学，２０１４，２６（１）：５０
ＹＩＮＬＰ Ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔ Ｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ
［Ｊ］．ＴｉａｎｊｉｎＰｈａｒｍ，２０１４，２６（１）：５０
［８］　王尧尧，顾德周，王贺，等 动态浊度法定量检测依地酸二钠中细菌内毒素的含量［Ｊ］．中国药品标准，２０１９，２０（６）：４９５
ＷＡＮＧＹＹ，ＧＵＤＺ，ＷＡＮＧＨ，ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａ
ｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｉｓｏｄｉｕｍｅｄｅｔａｔｅｂｙｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉ
ｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙ［Ｊ］．ＤｒｕｇＳｔａｎｄＣｈｉｎａ，２０１９，２０（６）：４９５
［９］　刘晋，王芳芳，冯宇，等 动态浊度法定量检测乳糖一水合物中细菌内毒素的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２０２０，４０（５）：８８４
ＬＩＵＪ，ＷＡＮＧＦＦ，ＦＥＮＧＹ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｌａｃｔｏｓｅｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅｂｙｋｉｎｅｔｉｃｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔ
ｒｉｃｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍＡｎａｌ，２０２０，４０（５）：８８４
［１０］　姚晶晶，丁苏苏，李倚云 动态浊度法测定注射用头孢唑肟钠细菌内毒素含量［Ｊ］．天津药学，２０１８，３０（１）：１２
ＹＡＯＪＪ，ＤＩＮＧＳＳ，ＬＩＹＹ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ
ｏｆｃｅｆｏｔａｘｉｍｅｓｏｄｉｕｍｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙｋｉｎｅｔｉｃ－ｔｕｒｉｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙ
［Ｊ］．ＴｉａｎｊｉｎＰｈａｒｍ，２０１８，３０（１）：１２
［１１］　国家药品标准 ＷＳ１ ＸＧ ０２８ ２０１４［Ｓ］．２０１４：１
ＮａｔｉｏｎａｌＤｒｕｇＳｔａｎｄａｒｄｓ ＷＳ１ ＸＧ ０２８ ２０１４［Ｓ］．２０１４：１
［１２］　马莉，张凇，王安航，等．细菌内毒素定量检测方法的常见问题剖析［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１３，３３（９）：７３３
ＭＡＬ，ＺＨＡＮＧＳ，ＷＡＮＧＡＨ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｍｍｏｎｐｒｏｂ
ｌｅｍｓｉｎｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．
ＣｈｉｎＨｏｓｐＰｈａｒｍＪ，２０１３，３３（９）：７３３
［１３］　柯瑾，张陆勇，殷华 大分子物质对中药注射剂的安全性影响［Ｊ］．中成药，２０１４，３６（４）：８５５
ＫＥＪ，ＺＨＡＮＧＬＹ，ＹＩＮＨ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓｏｎｔｈｅ
ｓａｆｅｔｙｏｆＴＣＭｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＴｒａｄｉｔＰａｔＭｅｄ，２０１４，３６
（４）：８５５
（收稿日期：２０２０ ０２ １１）。