《白细胞检验》PPT课件

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（四）单核细胞
呈不规则的圆或椭圆形，为外周血中最大的细胞．直径15μm ～ 25μm 。细胞核大呈不规则圆形、肾形、马蹄形，或不规则分叶有时折叠卷曲。染色质细致疏松如网状，染淡紫红色。胞质量丰富．染淡蓝、灰蓝色不等，常呈毛玻璃样半透明。胞质内含有大量细小灰尘样紫红色嗜天青颗粒。核凹陷处胞质染色较淡．偶见无颗粒胞质是伪足样伸出。
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学习目标
1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项。 2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法 3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态。 4.学会白细胞分类计数方法。
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显微镜计数法
【原理】用白细胞计数稀释液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在显微镜下计数一定容积内的白细胞数，经换算即可求得每升血液中白细胞的总数。
白细胞检验
第一节白细胞生理概要
• • 外周血常见白细胞的种类与功能白细胞的寿命和归宿
学习目标
1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项 2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法 3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态 4.学会白细胞分类计数方法
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外周血常见白细胞的种类与功能
按常规取血稀释后数得4个大格共有白细胞280个，求白细胞计数结果？解：WBC＝280/4×10×20×106 ＝14×109/L
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请您练习
取血40ul加入稀释液0.36ml，镜下计数了8个大格共有白细胞320个，求其白细胞计数结果？答案：稀释倍数＝（360＋40）／40 ＝10 WBC＝ 320／8×10×10×106 ＝ 4×109/L
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显微镜计数法
3.计数池
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显微镜计数法
3.计数池各池刻划有9ｍｍ2面积的刻度，分为 9 个大方格，每格长、宽各1ｍｍ，面积1 ｍｍ2，体积为 0.1ｍｍ３，容量 0.1μl。
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计数白细胞的四个大方格
四个角的大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的（白）细胞用。
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第三节白细胞分类计数
一、外周血常见白细胞的形态二、白细胞分类计数
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学习目标
1. 叙述外周血常见白细胞的形态２.分析白细胞在血涂片上的分布，正确选择分类计数区域３.述说显微镜白细胞分类计数法
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一、外周血常见白细胞的形态
经瑞特染色后外周血中常见各种成熟白细胞形态如下：
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显微镜计数法
【器材】 1.显微镜（目镜10×；物镜10×） 2.微量吸管（Hb吸管）传统的Hb吸管玻璃上有10µ l和20µ l（误差＜±1%）两个刻度。使用前应经严格校正。橡胶乳头提供负压
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Hb吸管的消毒清洗
每次使用后，应经2ｇ/Ｌ过氧乙酸浸泡2ｈ消毒。然后依次用蒸馏水冲洗， →0.95Ｌ/Ｌ乙醇除脂脱水，→乙醚干燥后，才能再次使用。注意清洗的顺序不可颠倒。
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显微镜计数法
【操作】１．取小试管１支，加入白细胞稀释液0.38ｍｌ。２．用微量吸管准确吸取外周血20ul。３．擦去管尖外部余血，立即将吸管插入盛有稀释液的试管底部，轻轻将血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３次，注意每次不能冲浑稀释液，最后用手振摇试管混匀。
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显微镜计数法
【试剂】白细胞稀释液冰乙酸 2.0ｍｌ 10g／Ｌ亚甲蓝（或结晶紫）数滴蒸馏水加至100ｍｌ
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稀释液中各组分的作用
蒸馏水— 低渗溶解红细胞，乙酸— 可加速红细胞溶解，同时乙酸能固定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨认。染料— 使核略着色，且易与红细胞稀释液区别。
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白细胞的寿命
粒细胞： 10～15天淋巴细胞：数天～20余年单核细胞：数月
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白细胞的归宿
•
衰老的粒细胞被单核-吞噬细胞系统清除，也有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排出。 • B淋巴细胞经抗原刺激后分化为浆细胞，产生特异性抗体，参与体液免疫。 T 淋巴细胞经抗原致敏后，可产生多种免疫活性物质，参与细胞免疫。 • 粒 - 单核系祖细胞在骨髓经分化成原始单核细胞后发育为成熟单核细胞，释放入血液。
操作
４.充液将计数板和盖玻片擦净，盖片盖在计数池上，用毛细滴管或玻璃棒取已混匀的细胞悬液1 滴，充入计数池与盖玻片间的缝隙中，静置2min～3min，待白细胞下沉。
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镜下白细胞形态
似成熟蚕卵，中央核深染，胞质色淡。
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显微镜计数法
5.计数方法用低倍镜依次计数四角的四个大格内的白细胞数。对于压线的白细胞，应采取数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则，保证计数域的一致性，使计数准确。
细胞大小、形态细胞核形态、染色质结构细胞浆、特异性颗粒
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（一）中性粒细胞
胞体呈圆形，直径10μｍ～15μｍ，约为红细胞的２倍。胞质量丰富染粉红色，含大量细小均匀的紫红色中性颗粒。细胞核染色质粗糙不匀，排列紧密成小块状．染深紫红色。根据核的形状分为中性杆状（带状）核粒细胞和中性分叶核（多节核）粒细胞两种。
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（三）嗜碱粒细胞
圆形，直径10μm～1２μm ，较其他粒细胞小。胞核常被颗粒遮盖，核染色质粗着色较浅，分叶常不明显．形态不规则，清楚时可见２叶～４叶。胞质量较少，常呈淡红或淡紫红色，含少量粗大，但大小不均、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常盖于核上。嗜碱性颗粒易溶于水，故染色时易被溶解消失，而呈淡红色空穴状。
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总
结
1.白细胞的种类按形态分类包括：三类五种 2.显微镜法计数原理：用稀乙酸溶液将血液稀释并破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在镜下计数一定容积中的白细胞数，经换算求得每升血液中的白细胞总数。
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总
结
3. 计数池的结构：分为 9个大方格，每个大方格长、宽各1ｍｍ，面积ｌｍｍ2，体积为 0.1ｍｍ３，容量 0.1µ l。 4. 稀释液中各组分的作用为：蒸馏水低渗溶解红细胞；乙酸加速红细胞溶解同时固定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨认；染料使核略着色，且易与红细胞稀释液区别。
根据统计学研究，白细胞在计数池内的随机分布符合泊森分布。从计算公式中可以看出计数范围越大，计数的细胞越多，计数域误差越小。
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注意事项
1、稀释液要过滤使用，试管、计数板等均须清洁。 2、计数池内细胞分布要均匀。总数在参考范围内，每个大方格间白细胞数不得相差8个以上，两次重复计数误差不得超过 10%，否则要重新充液计数。 3、遇白细胞数太低者、白细胞数太高者稀释倍数应灵活掌握。 4、当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正除去。
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总
结
5. Hb吸管的清洗顺序是：蒸馏水冲洗 →95%乙醇脱水除脂→ 乙醚干燥 6.镜下计数时要遵循一定顺序，对于压线的白细胞，应采取:数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则计数。
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总结
计算公式四个大格白细胞数白细胞数／Ｌ＝———————— ×10×20×106 4
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（五）淋巴细胞
• • • • •
按其个体可有大小之分。小淋巴细胞：呈圆形，直径6μm ～10μm 。胞核圆形。偶见凹陷，染色质粗糙紧密，排列均匀，无空隙。常有隐约成块现象，核周常有染色质浓集，核膜明显，有时可见潜在核仁。 • 胞质量极少，仅在核的一侧出现一线天蓝或深 • 蓝色，有的甚至完全不见。胞质中一般无颗粒 • 存在，偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒。
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胞嗜酸性粒细嗜中性粒细胞
嗜碱性粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
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二、白细胞分类计数
步骤 1．制备血涂片 2．血涂片染色 3．白细胞分类 4．计算百分率
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白细胞总数与分类白细胞数的关系
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（一）中性粒细胞
中性分叶核粒细胞的核分２叶～５叶或更多叶，以３叶～４叶为常见．叶间以核丝或核桥相连。分叶的大小、形状和排列各不相同。
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中性分叶核粒细胞的核
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杆状核和分叶核的划分标准
胞核完全分离或核间以丝状相连，或核叶重叠，使核的轮廓看不清，划分为分叶核粒细胞。胞核细长多样，弯曲盘绕，可呈C型、S型、V型或不规则型，划分为杆状核粒细胞。为不完全成熟细胞。
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返回Leabharlann 杆状核粒细胞的核形上一页下一页
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（二）嗜酸粒细胞
圆形，直径13μm～ 15μm，略大于中性粒细胞。胞核常分两叶，似眼镜形。也可见３叶～４叶者。核染色质粗。染紫红色。胞质中充满粗大、均匀、整齐、紧密排列的橘红色嗜酸性颗粒。偶见少许淡蓝或无色胞质。嗜酸粒细胞较易碎，破碎后颗粒多散在胞核附近。
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稀释倍数的确认
稀释倍数＝（溶质＋溶剂）/溶质注意：体积单位需一致后方能运算。
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请您练习
求以下操作的稀释倍数：稀释液（ml）＋血液（µ l）稀释倍数 20 0.38 20 25 0.48 20 40 0.39 10 201 2.00 10
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请您练习
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大淋巴细胞：
体积较大直径 10μm ～ 15μm ，胞核染色质比小淋巴细胞疏松，胞质量丰富，呈透明的淡蓝色，常有少量大小不等的嗜天青颗粒。
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五种白细胞鉴别要点
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点评
三种粒细胞主要依据胞质中颗粒形态和染色性质去相互鉴别；淋巴细胞与单核细胞则重点根据细胞核的特征去区别。
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让我们共同计数下列大格的细胞
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让我们再试一次：
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显微镜计数法
【计算】四个大格白细胞数白细胞数／Ｌ＝ ———————— × 10× 20× 106 4 式中：÷４ ×10 ×20 ×106 得每个大格（即 0.1µ l）内白细胞平均数因一大格容积为0.1µ l，换算为1µ l 血液稀释倍数。将1µ l换算为 1Ｌ。
容量： 0.1μl/大方格
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计数红细胞的五个中方格
中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400 个小方格，供计数密度大的（红）细胞用。
容量： 0.1μl/大方格 0.004μl/中方格
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４.盖玻片
特制的计数池专用盖片，要求玻璃表面平整光滑，有一定重量，不被细胞悬液所抬浮，厚度应为0.4ｍｍ～0.7ｍｍ。盖玻片两面的平整度是：0.002ｍｍ以内，大小: 24mm×20mm×0.6mm。
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白细胞的功能
中性粒细胞：具有较强的运动能力和吞噬活性。胞内酶有复杂的杀菌系统。嗜酸粒细胞：可作变形运动，吞噬抗原抗体复合物，灭活组织胺减轻过敏反应。嗜碱粒细胞：与IgE具有较强的结合力，脱粒释放组胺导致速发性变态反应。淋巴细胞：参与体液免疫和细胞免疫。单核细胞：有强大的吞噬功能，传递抗原信息。
(一)外周血常见白细胞的种类 1.白细胞的形态：无色有核，球形，直径7μm～25μm。 2.白细胞的种类（形态分类）：三类五种--------
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粒细胞
中性粒细胞（N）嗜酸粒细胞（E）嗜碱粒细胞（B）（ L）
白细胞
淋巴细胞
单核细胞
（ M）
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白细胞的发育
起源于骨髓多能造血干细胞。
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白细胞计数计数误差
1.技术误差: 由于操作不正确和仪器不精确造成的误差。 2.固有误差: 因每次白细胞分布不可能完全相同所造成的偏差属固有误差，也称计数域误差。
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常见技术误差：
血液凝固稀释倍数不准充液不当识别错误器材不符合要求
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固有误差(计数域误差)