2020-2021学年甘肃省白银市会宁四中高三(上)第四次月考生物试卷(附答案详解)

2020-2021学年甘肃省白银市会宁四中高三（上）第四次
月考生物试卷
1.下列关于糖类和脂质的叙述，正确的是（）
A. 脂质的元素组成都只有C、H、O
B. 淀粉、麦芽糖和蔗糖彻底水解的产物都是葡萄糖
C. 糖原只存在于动物的肝脏中，是重要的储能物质
D. 人体血液中的胆固醇过多可能引发心脑血管疾病
2.下列关于细胞代谢的叙述，正确的是（）
A. 液泡主要存在于植物细胞中，可以调节植物细胞内的环境
B. 类囊体薄膜上的类胡萝卜素主要吸收红光用于光合作用
C. 线粒体内[H]与O2结合的过程能使ADP含量增加
D. 核糖体能够合成具有生物活性的分泌蛋白
3.如图为某哺乳动物处于不同分裂时期的细胞示意图。

下列叙述正确的是（）
A. 细胞①中有两个四分体，发生过交叉互换
B. 细胞②有四个染色体组。

可来自于细胞①
C. 细胞③、④可以来自于同一个卵原细胞
D. 细胞③中有同源染色体，也有等位基因分离
4.小鼠有20对染色体，若用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷酸标记小鼠精原细胞的染色体DNA
分子，再在不含有标记的培养液中连续分裂2代，下列判断错误的是（）
A. 在形成的第2代子细胞中，所有染色体均含有3H
B. 在形成的第1代子细胞中，所有染色体均含有3H
C. 第二次分裂后期，含有3H的染色体有40条
D. 第一次分裂中期，含有3H的DNA单链有80条
5.如图是生态系统中某元素循环的模式图，以下相关叙述中正确的是（）
A. 图中缺少的生理过程在线粒体中进行
B. 增加图中各营养级生物的种类可提高生态系统的抵抗力稳定性
C. 温室效应主要由过程②③④造成的
D. ④是微生物的有氧呼吸
6.下列与病原体有关的叙述，正确的是（）
A. 抗体可以进入细胞消灭寄生在其中的结核杆菌
B. Rous肉瘤病毒不是致癌因子，与人的细胞癌变无关
C. 抗体抵抗病毒的机制与溶酶体杀死细菌的机制相同
D. 人感染HIV后的症状与体内该病毒浓度和T细胞数量有关
7.某研究小组为探究影响过氧化氢分解的因素，做了三个实验，相应的实验结果如图
所示（实验1、实验2均在最适条件下进行，实验3其他条件适宜）请分析回答：
（1）实验1、2、3中的自变量分别为______、______、______；实验1的无关变量可能有______（答出两种）；
（2）实验1可以体现了酶具有______，原理是______；
（3）实验2的bc段O2产生速率不再增大的原因最可能是______有限；
（4）实验1若温度升高10℃，加过氧化氢酶的催化反应曲线斜率将______（填“增大”或“减小”）；
（5）实验3的结果显示，过氧化氢酶的最适pH为______，实验结果表明，当pH 小于d或大于f时，过氧化氢酶的活性将永久丧失，其原因是______。

8.对某植物的光合作用和呼吸作用进行研究，根据实验数据绘制了如下三条曲线，图
甲表示光合作用速率与光照强度之间的关系（氧气浓度为15%）、图乙表示呼吸作用速率与氧气浓度之间的关系、图丙表示光合作用速率和呼吸速率与温度之间的关系。

请据图回答下列问题：
（1）在光合作用过程中，光反应为暗反应提供了两种物质，光反应的场所是______请写出在光反应中形成这两种物质的反应式：①______②______．
（2）影响图甲中a曲线A点上下移动的主要外界因素是______；图乙中细胞呼吸有关曲线的数据需在______条件下测量。

（3）由图丙可知，40℃时，植物体______（填“能”或“不能”）显示生长现象；
而5℃时的状态可用图甲中______（填“A”、“B”或“C”）点表示。

（4）用大棚种植蔬菜时，白天应控制光强为______点对应的光照强度，温度为______℃最佳。

（5）由图甲看，当植物生长在缺镁元素的土壤中时B点向______移动．
9.如图为甲状腺激素分泌的分级调节示意图，其中A、B、C表示三种不同的激素。

回答下列问题：
（1）当机体受到寒冷刺激时，血液中C的含量增加，则机体的产热量会______，除此作用之外，C的作用还有______（答出两点即可）。

（2）B由垂体细胞产生，能够对甲状腺细胞起作用的原因是会与甲状腺细胞上的______结合。

若某患者误口服了过量的B，则物质C的分泌量______，原因是______。

（3）若要验证B的生理作用，______（填“能”或“不能”）用去除甲状腺小鼠作为实验动物，其原因是______。

10.豌豆子叶的黄色（Y）对绿色（y）为显性，圆粒种子（R）对皱粒种子（r）为显
性．某人用黄色圆粒和绿色圆粒的豌豆进行杂交，发现后代出现4种类型，对性状的统计结果如图所示，根据图回答问题．
（1）亲本的基因组成是______（绿色圆粒），______（黄色圆粒）．
（2）在后代中，表现型不同于亲本的是______、______，它们之间的数量比为______．F1中杂合子占的比例是______．
（3）F1中黄色圆粒豌豆的基因组成是______，如果将F1中的全部黄色圆粒豌豆与绿色皱粒豌豆杂交，得到的F2的性状类型有______种，数量比为______．（写表现型及比例）
11.哺乳动物成熟的红细胞，在生命科学研究中有着广泛的应用。

请回答下列有关问题：
（1）从哺乳动物成熟的红细胞中提取血红蛋白时，首先要用相当于红细胞液体体积五倍的______洗涤红细胞，直至______，表明红细胞已经洗涤干净。

然后用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。

（2）得到血红蛋白混合液之后，可先用离心法进行样品的处理及粗分离，再通过______法进一步纯化。

使用该方法纯化时，首先分离得到大分子蛋白质的原因是______。

（3）用凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，需要在凝胶中加入SDS，目的是______，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。

（4）若要分解血红蛋白，需要用到蛋白酶。

固定化酶常用______法，将酶进行固定化的优点是______。

12.如图是运用生物工程技术培育“转基因试管牛”的图解。

请回答下列相关问题：
（l）图中①过程之前通常采用______法对采集的良种公牛精子进行获能处理。

精子和卵子在发生上的重要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在
______完成的。

（2）图中③过程通常选择发育到______阶段的胚胎进行移植，移植后的胚胎能在
受体子宫中存活的生理基础是______
（3）构建药用蛋白基因表达载体需要将药用蛋白基因与______的启动子等调控组件重组在一起，通过______方法导人到性染色体组成为______的受精卵中。

（4）若得到的药用蛋白不稳定，在体外保存期短。

为解决这一问题，可通过对药用蛋白基因进行______来实现对现有药用蛋白的改造。

答案和解析
1.【答案】D
【解析】解：A、脂质中的磷脂含有的元素为C、H、O、N、P，A错误；
B、淀粉、麦芽糖彻底水解的产物都是葡萄糖，而蔗糖彻底水解的产物是葡萄糖和果糖，B错误；
C、糖原存在于动物的肝脏和肌肉中，是重要的贮能物质，C错误；
D、人体血液中的胆固醇过多可能引发心脑血管疾病，D正确。

故选：D。

糖类与脂质的比较
本题考查糖类和脂质的相关知识，要求考生识记糖类的种类、分布和功能；识记脂质的种类及功能，能结合所学的知识准确答题。

2.【答案】A
【解析】解：A、液泡主要存在于植物细胞中，可以调节植物细胞内的环境，A正确；
B、类囊体薄膜上的类胡萝卜素主要吸收蓝紫光用于光合作用，B错误；
C、线粒体内[H]与O2结合的过程会合成大量的ATP，因此能使ADP含量降低，C错误；
D、核糖体合成的是多肽链，还需要经过加工才成为具有生物活性的分泌蛋白，D错误。

故选：A。

各种细胞器的结构、功能
本题考查细胞结构和功能，重点考查细胞器的相关知识，要求考生识记细胞中各种细胞器的结构、分布和功能，能结合所学的知识准确答题。

3.【答案】C
【解析】解：A、细胞①中的同源染色体并没有联会，因此不含四分体；一条染色体的姐妹染色单体上有A、a基因，而其同源染色体上只要a基因，可见并没有发生过交叉互换，而是发生了基因突变，A错误；
B、细胞②中着丝点分裂，处于有丝分裂后期，有四对同源染色体，四个染色体组，但不是来自于细胞①，B错误；
C、据细胞③、④中的染色体组成可知，它们可以来自于同一个卵原细胞，C正确；
D、细胞③中没有同源染色体，有等位基因A、a的分离，D错误。

故选：C。

根据题意和图示分析可知：①为某哺乳动物体细胞中部分染色体及其上的基因示意图；
②细胞中含有同源染色体，且着丝点分裂，处于有丝分裂后期；③细胞中含有同源染色体，且同源染色体分离，处于减数第一次分裂后期；④细胞中不含同源染色体，染色体排列在赤道板上，处于减数第二次分裂中期。

本题结合细胞分裂图，考查有丝分裂和减数分裂过程，解答本题的关键是细胞分裂图象的识别，要求学生掌握有丝分裂和减数分裂过程特点，能正确区分两者，准确辨别图示细胞的分裂方式及所处时期。

细胞分裂图象辨别的重要依据是同源染色体，要求学生能正确识别同源染色体，判断同源染色体的有无，若有同源染色体，还需判断同源染色体有无特殊行为。

4.【答案】A
【解析】解：A、由于姐妹染色单体分离后形成的子染色体随机组合，因此在形成的第2代子细胞40条染色体中，含有3H的染色体数目为0-40条，A错误；
B、在形成的第1代子细胞过程中，DNA只进行1次半保留复制，因此所有染色体均含有3H，B正确；
C、第二次分裂后期共有80条染色体，其中只有一半染色体含有3H，即含有3H的染色体有40条，C正确；
D、根据DNA半保留复制特点可知，第一次分裂中期，含有80个DNA分子，每个DNA 分子都有一条链含有3H，因此含有3H的DNA单链有80条，D正确。

故选：A。

1、DNA复制方式为半保留复制。

2、有丝分裂不同时期的特点：（1）间期：进行DNA的复制和有关蛋白质的合成；（2）前期：核膜、核仁逐渐解体消失，出现纺锤体和染色体；（3）中期：染色体形态固定、数目清晰；（4）后期：着丝点分裂，姐妹染色单体分开成为染色体，并均匀地移向两极；（5）末期：核膜、核仁重建、纺锤体和染色体消失。

本题考查细胞的有丝分裂、DNA分子的复制，要求考生识记细胞有丝分裂不同时期的特点；掌握DNA半保留复制方式，能结合所学的知识准确判断的各选项。

5.【答案】B
【解析】解：A、图中A→CO2的呼吸过程，该过程在细胞质基质和线粒体中进行，A 错误；
B、增加图中各营养级生物的种类，会使营养结构更加复杂，这样可提高生态系统的抵抗力稳定性，B正确；
C、温室效应主要由煤、石油等化石燃料燃烧造成的，C错误；
D、微生物的异化类型包括好氧型、厌氧型及兼性厌氧型，因此④表示微生物的有氧呼吸和无氧呼吸，D错误。

故选：B。

分析题图：图示是生态系统中某元素循环的模式图，其中A为生产者、B和C为消费者、d为分解者；①表示光合作用；②③表示呼吸作用；④表示动植物遗体和排泄物；⑤表示微生物的分解作用。

本题结合生态系统中某元素循环的模式图，考查生态系统的功能，要求考生识记生态系统的功能，尤其是生态系统的碳循环，能准确判断图中各成分及各生理过程的名称，再结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。

6.【答案】D
【解析】解：A、抗体存在于细胞外液，只能消灭细胞外的抗原，A错误；
B、Rous肉瘤病毒是生物致癌因子，与人的细胞癌变有关，B错误；
C、抗体抵抗病毒属于特异性免疫，溶菌酶能分解细菌属于非特异性免疫，两者原理不同，C错误；
D、人感染HIV后的症状与体内该病毒浓度和T细胞数量有关，D正确。

故选：D。

体液免疫过程：
细胞免疫过程：
本题结合人体的特异性免疫过程，考查人体免疫系统在维持稳态中的作用，要求考生识记人体免疫系统的组成，掌握特异性免疫过程。

7.【答案】催化剂的种类H2O2浓度pH 温度、PH 高效性酶降低活化能的作用更显著酶的数量（浓度）减小 e 酶的空间结构被破坏
【解析】解：（1）由曲线图分析可知，实验1、2、3中的自变量分别为催化剂的种类、H2O2浓度、pH．温度、PH都影响酶活性，实验1的无关变量可能有温度、PH。

（2）酶的催化效率远大于无机催化剂，故实验1的结果体现了酶的高效性，原理是酶降低活化能的作用更显著。

（3）实验2结果反映，在b、c所对应的H2O2浓度范围内，过氧化氢溶液浓度不会影响过氧化氢酶的活性，bc段O2产生速率不再增大的原因最可能是酶的数量有限。

（4）实验1在适宜条件下进行，若温度升高10℃，加过氧化氢酶的活性将会降低，其催化的反应曲线斜率将减小。

（5）实验3的结果显示，过氧化氢酶的最适pH为e，实验结果表明，当pH小于d或大于f时，酶的空间结构被破坏，导致过氧化氢的活性将永久丧失。

故答案为：
（1）催化剂的种类 H2O2浓度 pH 温度、PH
（2）高效性酶降低活化能的作用更显著
（3）酶的数量（浓度）
（4）减小
（5）e 酶的空间结构被破坏
实验组：经过处理的组是实验组。

对照组：未经过处理的组是对照组。

变量：实验过程中可以变化的因素称为变量。

自变量：想研究且可人为改变的变量称为自变量。

因变量：随着自变量的变化而变化的变量称为因变量。

无关变量：在实验中，除了自变量外，实验过程中存在一些可变因素，能对实验结果造成影响，这些变量称为无关变量。

自变量是可以人为直接改变或施加的变量，因变量是随自变量变化而变化的量，只能观察或测量获得。

要注意无关变量应该相同且适宜。

实验设计时要注意单一变量原则和对照原则。

本题结合曲线图，考查影响酶活性的因素，意在考查考生分析曲线图提取有效信息的能力；能理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识和观点，对生物学问题作出准确判断和得出正确结论的能力。

8.【答案】类囊体薄膜ADP+Pi+→酶ATP 2H2O→酶O2+4[H] 温度无光或黑暗不
能 B C 25 右侧
【解析】解：（1）在光合作用过程中，光反应为暗反应提供了ATP和[H]，光反应的场所是类囊体薄膜，方程式为ADP+Pi+→酶ATP，2H2O→光4[H]+O2．
（2）图甲中曲线上的A点表示植物的呼吸强度，影响A点上下移动的主要外界因素是温度，图乙中细胞呼吸有关曲线的数据需在无光或黑暗条件下测量。

（3）由图丙可知，40℃时，植物体由于呼吸速率大于光合速率，故不能生长，而5℃时的光合速率=呼吸速率，可用图甲中B点表示。

（4）用大棚种植蔬菜时，白天应控制光强为C点（光饱和点），对应温度为25℃．（5）由图甲看，当植物生长在缺镁元素时光反应强度低，B点向右侧移动。

故答案为：
（1）类囊体薄膜①ADP+Pi+→酶ATP ②2H2O→4[H]+O2
（2）温度无光或黑暗
（3）不能 B
（4）C 25
解答本题需掌握：图甲中曲线上的A点表示植物的呼吸强度，图甲中的B点表示光合作用速率与细胞呼吸速率相等，其主要影响因素是光照强度。

图乙是细胞呼吸与氧气浓度之间的关系，D点表示光合作用释放的氧气量与二氧化碳的消耗量相等，即细胞只进行有氧呼吸；图丙是光合作用速率和呼吸作用速率与温度之间的关系，影响两种作用速率大小的主要外界因素是温度；真正光合速率=表观光合速率+细胞呼吸速率，表观光合速率为零，植物无法生长。

6CO2+12H2O→酶C6H12O6+6O2 +6 H2O；
O2（水的光解）；ADP+Pi→ATP （递能）
光反应：H2O→2[H]+1
2
暗反应：CO2+C5化合物→2C3化合物（二氧化碳的固定）；NADP++2e-+H+→NADPH （递氢）；2C3化合物+4NADPH+ATP→（CH2O）+C5化合物+H2O（有机物的生成或称为C3的还原）ATP→ADP+PI（耗能）
酒精发酵：C6H12O6→酶2C2H5OH+2CO2+能量；
有氧呼吸：C6H12O6+6O2+6 H2O→酶6CO2+12H2O+能量
本题主要考查光合作用的相关知识，意在考查考生对相关知识的理解把握知识间内在联系的能力。

9.【答案】增加影响神经系统的发育和功能；提高神经系统的兴奋性；促进机体的生长发育特异性受体不变B的化学本质是蛋白质（或多肽），口服时被消化道消化不能甲状腺细胞是B的靶细胞，因此，去除甲状腺不能验证B的生理作用
【解析】解：（1）当机体受到寒冷刺激时，血液中C甲状腺激素的含量增加，甲状腺激素促进细胞代谢使机体的产热量增加，除此作用之外甲状腺激素还会影响神经系统的发育和功能：提高神经系统的兴奋性：促进机体的生长发育。

（2）B为促甲状腺激素由垂体细胞产生，但能够对甲状腺细胞起作用的原因是甲状腺细胞膜上有B的特异性受体，B随血液循环到达甲状腺细胞时，与其细胞膜上的受体作用；若某患者误服了过量的B，则物质C的分泌量不变，原因是B的化学本质是蛋白质（或多肽），口服时被消化道消化。

（3）若要验证B促甲状腺激素的生理作用，不能用去除甲状腺小鼠作为实验动物，其原因是甲状腺细胞是促甲状腺激素的靶细胞，因此，去除甲状腺不能验证促甲状腺激素的生理作用。

（1）增加 影响神经系统的发育和功能；提高神经系统的兴奋性；促进机体的生长发育
（2）特异性受体 不变 B 的化学本质是蛋白质（或多肽），口服时被消化道消化 （3）不能 甲状腺细胞是B 的靶细胞，因此，去除甲状腺不能验证B 的生理作用 1、由图可知，甲状腺能够分泌甲状腺激素，则C 为甲状腺激素；垂体分泌的激素B 作用于甲状腺，则B 为促甲状腺激素；下丘脑分泌的激素A 作用于垂体，使垂体分泌促甲状腺激素，则A 为促甲状腺激素释放激素。

2、寒冷时，下丘脑分泌促甲状腺激素释放激素促进垂体分泌促甲状腺激素，促进甲状腺分泌甲状腺激素，促进代谢增加产热。

当甲状腺激素含量过多时，会反过来抑制下丘脑和垂体的分泌活动，这叫做负反馈调节。

3、甲状腺激素的作用：①促进生长发育，②促进新陈代谢，③提高神经系统的兴奋性。

本题考查激素的调节的相关知识，重点考查甲状腺激素的调节过程和作用，难度较小，解题的关键是识记、理解甲状腺激素的分级调节、甲状腺激素的作用。

10.【答案】yyRr YyRr 黄色皱粒 绿色皱粒 1：1 34 YyRr 或YyRR 4 黄色圆粒：绿色圆粒：黄色皱粒：绿色皱粒=2：2：1：1
【解析】解：（1）两对基因同时分析时符合基因的自由组合定律．通过对性状的统计结果分析，圆粒：皱粒=3：1，黄色：绿色=1：1，所以亲本的基因组成是yyRr （绿色圆粒），YyRr （黄色圆粒）．
（2）根据题意可知，亲本表现型为黄色圆粒和绿色圆粒，因此在杂交后代中表现型不
同于亲本的是黄色皱粒、绿色皱粒，其中黄色皱粒=12×14=18，绿色皱粒=12×14=18．
YyRr 和yyRr 杂交，后代中纯合子占=12×12=14，因此杂合子的比例为34．
（3）亲本的基因型是YyRr 和yyRr ，因此F 1中黄色圆粒豌豆的基因组成是YyRr 或YyRR ，如果将F 1中的全部黄色圆粒豌豆（13YyRR 、23YyRr ）与绿色皱粒豌豆（yyrr ）杂交，得到的F 2的性状类型有4种，其中黄色圆粒=13×12×1+23×12×12=13，绿色圆粒=13×12×1+23×12×12=13，黄色皱粒=23×12×12=16，绿色皱粒=23×12×12=16，即数量比为黄色圆粒：绿色圆粒：黄色皱粒：绿色皱粒=2：2：1：1．
故答案为：
（1）yyRr YyRr
（2）黄色皱粒绿色皱粒 1：1 3
4
（3）YyRr或YyRR 4 黄色圆粒：绿色圆粒：黄色皱粒：绿色皱粒=2：2：1：1
根据题意和图示分析可知：黄色圆粒和绿色圆粒进行杂交的后代中，圆粒：皱粒=3：1，说明亲本的基因组成为Rr和Rr；黄色：绿色=1：1，说明亲本的基因组成为Yy和yy．本题考查了基因分离定律和自由组合定律的应用，要求考生首先能够根据柱形图中的表现型比例确定亲本的基因型，再根据题干要求利用遗传定律进行有关计算．
11.【答案】生理盐水上清液不再呈现黄色凝胶色谱相对分子量较大的蛋白质不能进入凝胶内部的通道，移动速度较快掩盖不同蛋白质间的电荷差别化学结合或物理吸附法方便回收和重复利用
【解析】解：（1）从哺乳动物成熟的红细胞中提取血红蛋白时，首先要用相当于红细胞液体体积五倍的生理盐水洗涤红细胞，直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已经洗涤干净。

然后用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。

（2）得到血红蛋白混合液之后，可先用离心法进行样品的处理及粗分离，再通过凝胶色谱法进一步纯化。

凝胶色谱法的原理是：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（3）用凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，需要在凝胶中加入SDS，目的是掩盖不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。

（4）若要分解血红蛋白，需要用到蛋白酶。

固定化酶常用化学结合或物理吸附法，这是因为酶分子的体积较小，易从包埋材料中漏出，将酶进行固定化的优点是方便回收和重复利用。

故答案为：
（1）生理盐水上清液不再呈现黄色
（2）凝胶色谱相对分子量较大的蛋白质不能进入凝胶内部的通道，移动速度较快（3）掩盖不同蛋白质间的电荷差别
（4）化学结合或物理吸附法方便回收和重复利用
1、血红蛋白的提取分离：
（1）样品处理
①红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液
体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

②血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。

加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。

（2）粗分离
①分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。

第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。

将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。

②透析：取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。

透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。

（3）纯化：调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口→加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。

加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后，关闭出口→调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度→洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱→收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。

（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

该方法可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子的大小的原因是：SDS能使蛋白质发生完全变性：SDS能与蛋白质形成SDS蛋白质复合物，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别。

只有在这种情况下，才可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子质量的大小。

2、凝胶色谱法（分配色谱法）：
（1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。

（3）分离过程：混合物上柱-洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子。

洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

（4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。

3、固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。

一般来说，酶更合适采用化学结合和物。