高考生物一轮复习 第11单元 生物技术实践 第2讲 微生物的培养与应用课件

2．无菌技术 (1)含义：培养微生物的操作中，所有 防止杂菌污染的方法。
(2)关键：防止外来杂菌的污染。
3．无菌技术的方法、类型和对象[连一连] 【答案】 (①②⑥)—b—(Ⅰ Ⅱ) (③④⑤)—a—(Ⅲ Ⅳ)
4．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平 板。 (2)纯化大肠杆菌：
↓ 挑选产生 透明圈 的菌落
网络记忆
考点突破| 领悟高考方向
考点1 微生物的分离与培养 [典例导悟1] (2013·江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废 水处理。下列叙述正确的是( ) A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次
[考点精讲]
1．消毒与灭菌技术的比较
条件
较为温 消 和的物 毒 理或化
学方法
灭 菌
强烈的 理化因 素
结果
仅杀死物体 表面或内部 的部分对人 体有害的微 生物
杀死物体内 外所有的微 生物，包括 芽孢和孢子
常用方法 煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药剂消 毒法 灼烧灭菌法
干热灭菌法
高压蒸汽灭 菌法
应用范围 日常用品
＝(C÷V)×MC[代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板
时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数]”进行计算。
4．分解尿素的细菌的签定 (1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂培养分解尿 素的细菌。 (2)原理：
分解尿素的细菌 ↓
CO(NH2)2＋H2O―脲―酶→CO2＋ 2NH3 ↓
不耐高温的液体
用酒精擦拭双手， 用氯气消毒水源 接种工具 玻璃器皿、金属 工具 培养基及容器的 灭菌
2.两种微生物纯化培养技术的比较
方 法
平板划线项
(1)接种环的灼烧①第一次划线前：杀死接种 环上的微生物，避免污染培养物 ②之后每次划线前：杀死残留菌种，保证每 次划线菌种来自上次划线末端 ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环 境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种， 以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培 养基划破
纤维素分解菌 ↓
刚纤果维红素→ 红色复合纤物―维―素→酶红色消失，出现 透明圈 ②培养基：以 纤维素 为唯一碳源的选择培养基。
(2)实验流程 土壤取样：富含 纤维素的环境
↓ 选择培养：用 选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度
↓ 梯度稀释：制备系列稀释液
↓
涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
酚红指示剂→变红色
三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 (1)组成：纤维素酶是一种 复合酶，一般认为它至少包括三种组分， 即 C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 纤维素―CC―X1酶酶→ 纤维二糖 葡萄――糖→苷酶 葡萄糖
2．纤维素分解菌的筛选 (1)原理 ①筛选方法：刚果红染色法。
目 的
在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落
培 平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入 养 培养基造成污染
[命题视角] 视角 微生物培养的无菌操作技术及纯化培养技术 1．(2013·新课标全国卷Ⅱ)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实 验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操 作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题： (1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用________法或________法将样 本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37 ℃ 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。
知
识
梳 理
第2讲 微生物的培养与应用
分 层
限
[考纲导学] 1.微生物的分离和培养
时 跟
踪
2.培养基对微生物的选择作用
练
考 点 突
三 十 七
破
知识梳理| 夯实高考双基
回扣教材 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)定义：人们按照微生物对 营养物质 的不同需求，配制出供其生长 繁殖的 营养基质 。 (2)成分：一般都含有 水、碳源、氮源、无，机还盐要满足不同微生物生长 对 pH 、特殊营养物质以及 氧气 的要求。 (3)分类：按照物理性质可以分为 液体培养基和固体培养基。
①上图A可表示用 平板划线法 接种获得的平板，菌体的分离是 通过 连续划线 操作实现的。
②上图B可表示用 稀释涂布平板法接种获得的平板，菌体的分散是通
过一系列的 梯度稀释 操作实现的。
③菌种的保存方法： a．对于频繁使用的菌种，可以采用 临时保藏的方法。 b．对于需要长期保存的菌种，可以采用 甘油管藏 的方法。
二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．筛选菌株 (1)寻找目的菌株的原则：根据它对 生存环境 的要求，到相应的环 境中去寻找。 (2)实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以 尿素为唯一氮源的选择培养基 进行培养。 (3)选择培养基：在微生物学中，将允许 特定种类 的微生物生长，同 时 抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．微生物的计数 常用的方法有显微计数法和 稀释涂布平板法。
3．实验流程 (1)土壤取样：富含有机质的土壤 表层 土。 (2)样品的稀释：通常选用 一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获
得菌落数在 30～300 、适于计数的平板。 (3)微生物的培养与观察：根据 菌落 的特征区分微生物。 (4)细菌的计数：统计 菌落的数目，根据公式“每克样品中的菌落数
(1)稀释操作时：每支试管及其中 的9 mL水、移液管等均需灭菌； 操作时，试管口和移液管应在离 火焰1 cm～2 cm处 (2)涂布平板时 ①涂布器用体积分数为70%酒精 消毒，取出时，让多余酒精在烧 杯中滴尽，然后将沾有少量酒精 的涂布器在酒精灯火焰上引燃 ②不要将过热的涂布器放在盛放 酒精的烧杯中，以免引燃其中的 酒精
【解析】 微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板，A项错误； 每一次划线前都要灼烧接种环，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种， B项正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条 件，C项错误；培养过程中观察的间隔时间不能太长，适宜条件下一般不超过 24 h，D项错误。
【答案】 B