鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010720531.3
(22)申请日 2020.07.24
(71)申请人 苏州世诺生物技术有限公司
地址 215000 江苏省苏州市吴中区苏州工
业园区若水路388号D座506室
(72)发明人 曹文龙　孔迪　滕小锘　
(74)专利代理机构 南京利丰知识产权代理事务
所(特殊普通合伙) 32256
代理人 王锋
(51)Int.Cl.
A61K 39/12(2006.01)
A61P 31/20(2006.01)
C07K 19/00(2006.01)
C12N 15/62(2006.01)
C12N 15/866(2006.01)
(54)发明名称
鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗
(57)摘要
本发明公开了一种鸡传染性贫血病毒基因
工程疫苗，其包含编码基因序列如SEQ ID NO:1
所示的融合蛋白。

该疫苗的抗原性、免疫原性和
功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原
性强，对鸡等禽类没有致病性，能够在禽类体内
产生较强的体液免疫，免疫后的禽类能够抵御强
毒攻毒，并且该疫苗可以通过生物反应器大规模
无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成
本。

权利要求书1页 说明书17页序列表7页 附图4页CN 111729078 A 2020.10.02
C N 111729078
A
1.一种融合蛋白，其序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述融合蛋白的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

4.包含权利要求2所述编码基因的重组病毒载体或宿主细胞。

5.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。

6.如权利要求5所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载剂包括白油、硬脂酸铝、司本、吐温中的任意一种或者两种以上的组合。

7.一种融合蛋白的制备方法，其特征在于包括：
构建重组杆状病毒表达载体，所述重组杆状病毒表达载体包含权利要求2或3所述的融合蛋白的编码基因；
将所述重组杆状病毒表达载体导入昆虫细胞中，并在允许蛋白质表达的条件下培养所述昆虫细胞，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收融合蛋白。

8.权利要求1所述融合蛋白的制备方法，其特征在于包括：
将所述融合蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统转移载体上，获得重组穿梭载体；
将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，获得重组杆状病毒载体；
以所述重组杆状病毒载体转染昆虫细胞并进行培养，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收所述融合蛋白。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述杆状病毒表达系统转移载体包括pFastBac 1、pVL1393、pFastBac dual中的任意一种。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述昆虫细胞包括Sf9、High Five或 Sf21 细胞。

11.如权利要求1所述融合蛋白或权利要求5或6所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒的检测试剂，在生产用于在受试动物中诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受鸡传染性贫血病毒感染的药剂中的用途。

12.如权利要求1所述融合蛋白或权利要求5或6所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗中的用途。

权　利　要　求　书1/1页CN 111729078 A
鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗
技术领域
[0001]本发明涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗，其制备方法与应用，属于动物免疫药物技术领域。

背景技术
[0002]鸡传染性贫血病（Chicken Infectious Anemia，CIA）是一种由鸡传染性贫血病毒（Chicken Infectious Anemia Virus，CIAV）引起的一种免疫抑制性传染病。

鸡是CIA的主要自然宿主，所有年龄的鸡都易被感染，其中鸡胚和14日龄以内的雏鸡易感性最强，发病率最高。

CIAV感染后特征性病变是贫血、可视粘膜苍白，患鸡临床症状主要表现为精神沉郁、消瘦、喙肛、局部皮肤呈蓝紫色、凝血时间延长等，病理变化主要表现为全骨髓萎缩、出现再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎缩等。

患鸡发病后5～6天大量死亡，发病率一般在20～60％，高时可达100％，死亡率一般在5～10％，严重时可达60％以上。

CIAV可通过垂直或水平的传播方式在鸡群中传播，引起免疫抑制，易导致鸡群对其他病毒、细菌和真菌易感，以及继发感染；亦可干扰其他禽病疫苗的免疫效应，导致免疫失败。

自Yuasa等于1979年首次报道该病毒后，该病在德国、法国等多国陆续有报道，我国于1992年由崔现兰等首次分离到该病毒。

目前，CIA在国内蔓延并呈流行趋势，对养禽业造成重大的经济损失。

[0003]CIAV属于圆环病毒科环形病毒属，是单链圆环状的DNA病毒，电镜下观察呈球形或六角形，表面没有囊膜，整个病毒呈正20面体对称，平均粒径24-26 nm。

CIAV基因组序列全长为2298或2319bp，这与基因组上是否存在4或5个21bp的重复序列有关。

其基因组主要存在三个开放阅读框（ORFs），一个启动子区和一个多聚腺苷的信号区。

三个ORFs分别编码Cap 基因编码衣壳蛋白VPl、磷酸酯酶蛋白VP2和凋亡素VP3蛋白（Meehan B M, Todd D, Creelan J L, et al. Characterization of viral DNAs from cells infected with chicken anaemia agent: sequence analysis of the cloned replicative form and transfection capabilities of cloned genome fragments [J]. Archives of Virology, 1992,124(3-4):301-319.)。

VP1蛋白是CIAV的主要衣壳蛋白和免疫蛋白，VP1蛋白富含精氨酸，与基因组DNA紧密结合，对DNA有保护功能，可刺激机体产生抗体。

VP2蛋白属于非结构蛋白，是一种辅助性蛋白，其主要功能是辅助病毒装配为成熟的病毒粒子。

在杆状病毒表达系统中，VP1和VP2同时合成，可以诱导机体产生针对CIAV的中和抗体，起到保护性免疫应答作用，而将单独表达的产物进行简单的混合并不能刺激机体产生中和抗体(Yamaguchi S. Identification of a genetic determinant of pathogenicity in chicken anaemia virus [J]. Journal of General Virology, 2001,82(5):1233-1238.)。

VP3蛋白通常被称为调亡素，在病毒的生活周期中扮演重要角色，VP3单独作用即可引起细胞凋亡。

[0004]已有一些文献报道了CIAV基因工程疫苗。

例如CN110028558A提供了一种利用截短的CIAV的VP1和VP2蛋白共表达制备亚单位疫苗的方法，由于VP1的N端有大量的R，带有大量正电荷，导致VP1本身容易被碱性蛋白酶降解，使得VP1表达量低，而截短的VP1全部去掉了N
端富含R的部分则不能组装成VLP，即使与VP2共表达，VP1蛋白的表达量和组装效率依旧低。

又如，CN109136198A提供了一种制备表达CIAV VP1、VP2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗的方法，但与杆状病毒相比，痘病毒载体安全性低，且痘病毒载体疫苗的反复接种可能产生抗载体免疫，导致免疫应答的减弱；灭活疫苗则由于CIAV可以引起免疫抑制导致免疫效果不理想；弱毒活疫苗有残存毒力，并且有毒力反强的可能性。

发明内容
[0005]本发明的主要目的在于提供一种鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗，其制备方法与应用，以克服现有技术中的不足。

[0006]为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明实施例提供了一种融合蛋白，包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。

[0007]本发明实施例还提供了所述融合蛋白的编码基因，其包括序列如SEQ ID NO:1所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。

[0008]本发明实施例还提供了包含所述编码基因的重组病毒载体。

[0009]本发明实施例还提供了包含所述编码基因的重组杆状病毒。

[0010]本发明实施例还提供了包含所述编码基因的宿主细胞，主要为昆虫细胞。

[0011]本发明实施例还提供了一种免疫组合物，其包括：所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。

[0012]本发明实施例还提供了一种制备所述融合蛋白的方法，其包括：
构建重组杆状病毒表达载体，所述重组杆状病毒表达载体包含所述融合蛋白的编码基因；
将所述重组杆状病毒表达载体导入昆虫细胞中，并在允许蛋白质表达的条件下培养所述昆虫细胞，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收融合蛋白。

[0013]本发明实施例还提供了一种制备所述融合蛋白的制备方法，其包括：将所述融合蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统转移载体上，获得重组穿梭载体；
将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，获得重组杆状病毒载体；
以所述重组杆状病毒载体转染昆虫细胞并进行培养，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收所述融合蛋白。

[0014]本发明实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒的检测试剂中的用途。

[0015]本发明实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于在受试动物中诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的药剂中的用途。

[0016]本发明实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于预防动物受鸡传染性贫血病毒感染的药剂中的用途。

[0017]本发明实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗中的用途。

[0018]相应的，本发明实施例提供了一种鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗，其包含前述
的任一种免疫组合物。

进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。

[0019]本发明实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组病毒载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于检测动物受鸡传染性贫血病毒感染的试剂的用途。

[0020]本发明实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组病毒载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于在受试动物中诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。

[0021]本发明实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组病毒载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于预防动物受鸡传染性贫血病毒感染的药剂的用途。

[0022]较之现有技术，本发明实施例通过以突变的鸡传染性贫血病毒VP1蛋白和和突变的鸡传染性贫血病毒VP2蛋白连接组装形成融合蛋白，显著提高了VP1蛋白的表达量和组装效率，安全高效，只需要很少量的抗原就能提供很好的免疫效果，利用所述融合蛋白制备的鸡传染性贫血病毒疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，对鸡等禽类没有致病性，并且可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成本。

附图说明
[0023]为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

[0024]图1是实施例1中Fu基因PCR扩增产物的凝胶电泳图，其中在1.7kbp位置出现目的条带。

[0025]图2是实施例1中菌落PCR扩增产物的凝胶电泳图，其中在1.7kbp位置出现目的条带。

[0026]图3是实施例1中含有目的基因的转移载体pF-Fu的结构示意图。

[0027]图4是实施例3所获细胞培养物的SDS-PAGE检测图谱。

[0028]图5是实施例4中SDS-PAGE电泳后产物的Western Blot检测图谱。

[0029]图6是实施例6中的间接免疫荧光检测图谱。

具体实施方式
[0030]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。

除非另有指明，本说明书使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

[0031]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。

如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

[0032]本发明实施例的一个方面提供的一种融合蛋白包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。

[0033]本发明实施例提供的融合蛋白由突变的CIAV-VP1蛋白+Linker+突变的CIAV-VP2蛋白形成，其中通过将VP1蛋白的氨基酸序列的第7、28和42位的带大量正电荷的R突变成电荷中性的A，既增加了VP1的稳定性，又不会导致VP1蛋白结构产生变化，再通过使用Linker 在中间连接突变的VP1和突变的VP2蛋白，该Linker的序列为GSSSSGPPGSSSSG，该序列中的PP既能提供一种柔性肽连接，又能促进VP2和VP1的相互接触和相互作用，促进VP1组装成VLP，该突变的VP2蛋白是经过截短的突变的VP2，经过大量实验后选取其中66-138氨基酸片段，并将68和70位的两个D突变成两个R，进一步维持了VP1蛋白的稳定性以及组装效率。

[0034]本发明实施例的另一个方面还提供了所述融合蛋白的编码基因，其包括序列如SEQ ID NO:1所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。

[0035]本发明实施例的另一个方面还提供了一类重组基因载体，其中包含有所述融合蛋白的编码基因。

[0036]本发明实施例的另一个方面还提供了一类重组杆状病毒，其中包含有所述融合蛋白的编码基因。

[0037]本发明实施例的另一个方面还提供了一类昆虫细胞，其中包含有所述融合蛋白的编码基因。

[0038]进一步的，所述昆虫细胞可以是用包含所述融合蛋白的编码基因的重组杆状病毒基因组质粒转染而形成。

[0039]本发明实施例的另一个方面还提供了一种免疫组合物，其包括：所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。

进一步的，所述医药学上可接受的载剂包括白油、硬脂酸铝、司本、吐温中的任意一种或者两种以上的组合，且不限于此。

[0040]本发明实施例的另一个方面还提供了一种制备所述融合蛋白的方法，其包括：构建重组杆状病毒表达载体，所述重组杆状病毒表达载体包含所述的融合蛋白的编码基因；
将所述重组杆状病毒表达载体导入昆虫细胞中，并在允许蛋白质表达的条件下培养所述昆虫细胞，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收融合蛋白。

[0041]本发明实施例的另一个方面还提供了一种制备所述融合蛋白的方法，其包括：将所述融合蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统转移载体上，获得重组穿梭载体；
将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，获得重组杆状病毒载体；
以所述重组杆状病毒载体转染昆虫细胞并进行培养，之后从所述昆虫细胞的细胞培养物中分离和回收所述融合蛋白。

[0042]进一步的，所述杆状病毒表达系统转移载体包括但不限于pFastBac 1、pVL1393、pFastBac dual中的任意一种，优选为pFastBac1。

[0043]进一步的，所述昆虫细胞包括但不限于Sf9、High Five或 Sf21 细胞，优选为Sf9细胞。

[0044]在本发明的以上实施例中，通过采用杆状病毒昆虫细胞表达系统，并使用悬浮培养Sf9细胞等昆虫细胞进行表达，表达水平较高，蛋白免疫原性好。

[0045]本发明实施例的另一个方面还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒的检测试剂中的用途。

[0046]本发明实施例的另一个方面还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于在受试动物中诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的药剂中的用途。

[0047]本发明实施例的另一个方面还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于预防动物受鸡传染性贫血病毒感染的药剂中的用途。

[0048]本发明实施例的另一个方面还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗中的用途。

[0049]相应的，本发明实施例的另一个方面提供了一种鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。

进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。

[0050]本发明实施例的另一个方面还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于检测动物受鸡传染性贫血病毒感染的试剂的用途。

[0051]本发明实施例的另一个方面还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于在受试动物中诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。

[0052]本发明实施例的另一个方面还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于预防动物受鸡传染性贫血病毒感染的药剂的用途。

[0053]相应的，本发明实施例的另一个方面也涉及一种诱导针对鸡传染性贫血病毒抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向受试禽类动物施用所述鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗。

[0054]相应的，本发明实施例的另一个方面也涉及一种保护受试动物免受鸡传染性贫血病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试禽类动物施用所述鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗。

[0055]本发明实施例的另一个方面还提供一种适用于在受试禽类动物中产生针对鸡传染性贫血病毒的免疫反应的疫苗，所述疫苗包含：本发明的融合蛋白以及佐剂分子。

[0056]进一步的，所述佐剂可为IL-12、IL-15、IL-28、CTACK、TECK、血小板源性生长因子(PDGF)、TNFα、TNFβ、GM-CSF、表皮生长因子(EGF)、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-18、IL-21、IL-31、IL-33或其组合；并且在一些实施方式中，可为IL-12、IL-15、IL-28或RANTES。

[0057]进一步的，所述佐剂可以优选采用苏州世诺生物技术有限公司生产的相关佐剂，以提高疫苗效果。

[0058]在一些实施方式中，一种鸡传染性贫血病毒基因工程疫苗的制备方法具体包括：1）制备用于编码鸡传染性贫血病毒融合蛋白（可以定义为CIAV-Fu）的核酸分子；
2）构建重组载体，将步骤1）的所述核酸分子克隆到穿梭载体中，得到含有目的基因的重组穿梭载体；
3）将所述重组穿梭载体转化DH10Bac菌，挑选重组菌，抽提基因组转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；
4）培育所述Sf9细胞，在细胞内自动组装成病毒样颗粒（VLP），进而重组表达产生融合
蛋白(定义为CIAV-VLP）；
5）将所述CIAV-VLP加入到佐剂中，得到所述疫苗。

[0059]本说明书所用的术语仅仅是出于描述具体实施方式的目的而并不旨在限制。

如在说明书和所述权利要求中所使用，除上下文另外明确规定之外，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式。

[0060]如本说明书所述的“佐剂”意指被添加到本说明书所述的疫苗中来增强由下文所述编码核酸序列的所编码的抗原的免疫原性的任何分子。

[0061]如本说明书所述的“抗体”意指类型IgG、IgM、IgA、IgD或IgE的抗体，或片段、其片段或衍生物，包括Fab、F(ab')2、Fd以及单链抗体、双链抗体、双特异性抗体、双功能抗体及其衍生物。

所述抗体可以是从动物的血清样本中分离出的抗体、多克隆抗体、亲和纯化抗体或其混合物，所述混合物对所需的表位或从其衍生的序列表现足够的结合特异性。

[0062]如本说明书所述的“编码序列”或“编码核酸”意指包含编码蛋白的核苷酸序列的核酸(RNA或DNA分子)。

所述编码序列可以进一步包括可操作地连接至调控元件的起始信号和终止信号，所述调控元件包括能够在施用核酸的个体或动物的细胞中指导表达的启动子和多聚腺苷酸化信号。

[0063]如本说明书所述的“互补体”或“互补”意指核酸可以指在核苷酸或核酸分子的核苷酸类似物之间的Watson-Crick (例如，A-T/U和C-G)或者Hoogsteen碱基配对。

[0064]如本说明书所述的“共有”或“共有序列”意指基于分析特定鸡传染性贫血病毒抗原的一队列的多个亚型的多肽序列。

可制备编码共有多肽序列的核酸序列。

包含蛋白的疫苗可以被用来诱导针对特定鸡传染性贫血病毒抗原的多种亚型或血清型的广泛免疫，所述疫苗包含编码这些蛋白的共有序列和/或核酸分子。

[0065]如本说明书所述的相对于核酸序列的“片段”意指编码能够在与全长野生型病毒株鸡传染性贫血病毒抗原交叉反应的动物中引发免疫反应的多肽的核酸序列或其一部分。

所述片段可以是选自编码下文所述的蛋白片段的各种核苷酸序列的至少一种的DNA片段。

[0066]在本说明书中，就多肽序列来说，“片段”或“免疫原性片段”意指能够在与全长野生型病毒株鸡传染性贫血病毒抗原交叉反应的动物中引发免疫反应的多肽。

蛋白的片段可以包含蛋白的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。

[0067]如本说明书所述的术语“遗传构建体”是指包含编码蛋白的核苷酸序列的DNA或RNA分子。

所述编码序列包含可操作地连接至调控元件的起始信号和终止信号，所述调控元件包括能够在施用核酸分子的个体的细胞中指导表达的启动子和多聚腺苷酸化信号。

如本说明书所述的术语“表达形式”是指基因构建体，所述基因构建体含有可操作地连接至编码蛋白的编码序列的必须的调控元件，以使得当存在于所述个体的细胞中时，编码序列将表达。

[0068]如本说明书所述的术语“同源性”是指互补性程度。

可存在部分同源性或完全同源性(即，同一性)。

至少部分抑制完全互补序列杂交于靶标核酸的部分互补序列是使用功能术语“基本上同源”来提及。

当关于如cDNA或基因组克隆的双链核酸序列使用时，如本说明书所述的术语“基本上同源”是指探针可在低严格性条件下杂交于双链核酸序列的链。

当关于单链核酸序列使用时，如本说明书所述的术语“基本上同源”是指探针可在低严格性条件
下杂交于单链核酸模板序列(即，是单链核酸模板序列的互补序列)。

[0069]在本说明书中，在两种或更多种核酸或多肽序列的情况下，如本说明书所述的“相同”或“同一性”意指在指定区域中序列具有相同残基的指定百分比。

可以通过以下来计算所述百分比：最佳地比对两个序列、在指定区域比较两个序列、确定在两个序列中相同的残基的位置的数量以产生匹配位置的数量、以匹配位置的数量除以在指定区域内的位置的总数量，并且将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。

在两个序列具有不同的长度或者比对产生一个或多个交错的末端并且比较的指定区域仅包括单一序列的情况下，单一序列的残基被包括在计算的分母中而不是分子中。

当比较DNA和RNA时，胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)可以被认为是等同的。

同一性可以手动地或者通过使用计算机序列算法如BLAST或者BLAST 2.0来执行。

[0070]如本说明书所述的“免疫反应”意指响应于抗原如鸡传染性贫血病毒共有抗原的引入，宿主的免疫系统(例如动物的免疫系统)的活化。

所述免疫反应可以是细胞反应或体液反应或两者的形式。

[0071]如本说明书所述的“核酸”或“寡核苷酸”或“多核苷酸”意指共价连接在一起的至少两个核苷酸。

单链的描述还定义了互补链的序列。

因此，核酸还涵盖了所描述的单链的互补链。

核酸的很多变体可以被用于与给定的核酸相同的目的。

因此，核酸还涵盖了基本上相同的核酸和其互补体。

单链提供可以与靶序列在严格的杂交条件下杂交的探针。

因此，核酸还涵盖了在严格杂交条件下杂交的探针。

[0072]在本说明书中，核酸可以是单链的或者双链的或可以含有双链或者单链序列两者的部分。

所述核酸可以是DNA、基因组和cDNA两者、RNA或杂合体，其中所述核酸可以含有脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的组合，以及包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌啉、肌苷、黄嘌呤次黄嘌呤、异胞嘧啶以及异鸟嘌呤的碱基的组合。

核酸可以通过化学合成方法或者通过重组方法来获得。

[0073]在本说明书中，基因的表达是在空间上与之连接的启动子的控制下进行的。

在其控制下，启动子可以被定位在基因的5'(上游)或者3'(下游)。

所述启动子和基因之间的距离可以大约与所述启动子和其在启动子从中衍化的基因中所控制的基因之间的距离相同。

如本领域所已知，这个距离的变化可以在没有失去启动子功能的情况下进行调整。

“启动子”意指合成的或自然来源的分子，所述分子能够赋予、活化或增强细胞中的核酸的表达。

启动子可包含一个或多个特定的转录调控序列以便进一步增强表达和/或改变其空间的表达和/或时间的表达。

启动子还可以包含远端增强子或阻遏元件，它们可以位于从转录的起始点开始的差不多几千对碱基对处。

启动子可以从包括病毒、细菌、真菌、植物、昆虫以及动物的来源中获得。

启动子可以相对于其中发生表达的细胞、组织或器官或相对于发生表达的发育阶段或响应于外部刺激如生理应激、病原体、金属离子或诱导剂而基本地或区别地调控基因组分的表达。

启动子的代表性实例包括噬菌体T7启动子、噬菌体T3启动子、SP6启动子、乳糖操纵子-启动子、tac启动子、SV40后期启动子、SV40早期启动子、RSV-LTR启动子、CMV IE启动子、SV40早期启动子或者SV40后期启动子以及CMVIE启动子。

[0074]在本说明书中，“信号肽”和“前导序列”是指可以被连接在本说明书所述的鸡传染性贫血病毒蛋白的氨基末端的氨基酸序列。

信号肽/前导序列通常指示蛋白的位置。

本说明书所用的信号肽/前导序列优选地促进蛋白从产生其的细胞中分泌。

信号肽/前导序列常常。