简述pcr反应步骤

简述pcr反应步骤
PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反应）是一种利用催化酶（聚合酶）作用，在室温下将极少的特定DNA分子复制出大量的精确的DNA分子的一种技术。

PCR反应是酶学技术中最重要的方法之一，广泛应用于临床诊断、遗传学研究、病原微生物诊断及分子生物学研究等领域。

本文将简述PCR反应的步骤。

首先，需要获得原始模板DNA，此模板DNA可以通过模板DNA扩增技术（TA）、可溶性模板RNA扩增技术（RT-TA）、限制性片段长度多态性（RFLP）、酶联免疫吸附（ELISA）或DNA杂交等方法获得。

其次，将原始模板DNA与核酸复制的反应物质（诸如引物、聚合酶、dNTP等）混合，建立PCR反应体系。

第三，PCR反应体系进入反应温度稳定期，在本阶段，质粒的两个末端将作为引物的结合站，聚合酶将开始从末端进行DNA的复制。

第四，当反应温度升高时，引物从模板DNA上断裂，并结合到新形成的双链DNA上，然后开始新一轮DNA复制，重复反应体系中的此四步，直至获得大量的双链DNA。

最后，可以使用电泳分析技术（如EEG或SDS-PAGE）来确认复制的DNA的精确度，以及在特定位点的碱基变异。

PCR技术具有生物学特性、灵敏度高、反应时间短等优点，至今仍是分子生物学研究中重要的技术手段之一。

总之，PCR反应是由四个基本步骤组成的：1.获得原始模板DNA；
2.将原始模板DNA与反应物质混合建立反应体系；
3.在反应温度稳定
期进行引物结合DNA复制；4.反应温度升高引物断裂新一轮DNA复制，重复反应体系中的此四步，直至获得大量的双链DNA，再用电泳或其他技术分析复制的DNA。

PCR技术的广泛应用，使得以前无法被解释的生物现象得以解释，大大丰富了分子生物学的研究内容。