waters e2695高效液相色谱
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第三十二页，共41页。
色谱图 参数基本概念
峰面积 － Peak Area
峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error
0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Peak
后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰 － Leading Peak
前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰 － Ghost Peak
[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器可和质谱仪
[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可得到分析物的更多综合 的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之为液质联用.
第四页，共41页。
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀
泵
色谱柱
检测器
泵输液 进样
分离
第二页，共41页。
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。
一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的 流速，一般是毫升/分钟。
一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流 动相 ，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。
除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确保样
品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是相互作用。
第二十页，共41页。
运行样品
配置系统项目 管理数据（相当于新建文件夹），鼠标右键选新建，设定项目名
（设定后将出现在运行样品中）。
建立方法组并运行样品
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。
第三十页，共41页。
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号 对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时 间。
基线 ↓
← 色谱峰 峰高
峰宽
保留时间（分）
第三十一页，共41页。
色谱图 参数基本概念
色谱峰 － Peak
色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线
第十六页，共41页。
流动相方面要求
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白 检验）
缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂
流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
第三十六页，共41页。
第三十七页，共41页。
第三十八页，共41页。
关机
数据采集完毕后，关闭检测器电源开关，以节省使用寿命。
使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进 样针和柱塞杆密封垫，确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源 开关。
处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登 记。
样品和化合物分离谱带的通路。
第三页，共41页。
高效液相色谱如何工作
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再将电信 号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光散射检测器
第十九页，共41页。
样品方面要求
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除 由于污染对分析结果的影响。
色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会 使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加 泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
第九页，共41页。
溶剂管理系统的准备
流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】， 进入“ Status （ 1 ）”屏幕
第十页，共41页。
溶剂管理系统的准备
第十一页，共41页。
必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水； 水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流动相； 检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部插 到溶剂瓶底部。
保留体积，VR － Retention volume
组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
第三十五页，共41页。
报告打印
在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择设定好
的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式打印，在待打 印的模式下可以编辑报告显示的信息，比如表头，色谱图的 显示范围，表格中所需内容等。
四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
第八页，共41页。
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测器、 计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
数据处理 都可以在“浏览项目”中完成。 点开“浏览项目”，选定要要浏览的项目，确
定后进入的界面中有如下内容：样品组、进样、 通道、方法、结果组、结果等。
第二十六页，共41页。
PDA数据处理
在浏览项目中，点“通道”→双击要处理的原始数据（点查看图标）→进
入查看主窗口→提取色谱图→点“处理方法向导”图标→新建处理方法
什么是高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出条件剔除不要的峰 →→→……→纯度匹配→PDA光谱对照→处理方法名→完成（然后又出现主窗 口，处理结果自动给出）→点“方法组”图标，选好后点“文件”下的“另存
为”→“方法组”，设定即可。至此选好处理方法。
结果处理：选好数据，右键选处理→选好方法组（上面设定好的） 点结果即可给出处理好的数据 注：通道无论什么时候给出的都是未处理数据。
第二十七页，共41页。
第二十八页，共41页。
第二十九页，共41页。
FD数据处理： 点“处理方法向导”图标→新建处理方法→在新方法（方法类
型中选LC）→新建处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出
条件剔除不要的峰→→→……→处理方法名→完成（然后又出现主窗口，处理结
果自动给出） →至此选好处理方法。
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的 极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也 称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。
常用溶剂的极性顺序：
水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃 > 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯 化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
第十七页，共41页。
色谱柱的使用及操作 流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
第十八页，共41页。
样品管理系统的准备
装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品 仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按 【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
并非由试样所产生的峰；亦称假峰
第三十三页，共41页。
色谱图 参数基本概念
基线 － Baseline
在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift
基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声；N － Baseline Noise
由各种因素所引起的基线波动
谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度 增加的现象
仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机
第七页，共41页。
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元 2498型紫外检测器
色谱管理工作站
打印机
四元梯度洗脱的溶剂输送系统
运行样品
第二十三页，共41页。
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组”来
设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另存为 “方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相统一） →完成。
第二十四页，共41页。
在“运行样品”中打开设定的仪器方法，并在
设针时选定设定的方法组来对样品进行分析。
第二十五页，共41页。
检测
第五页，共41页。
AB C
DE
G
F
记录
液相色谱的各部分示意图
液相色谱实验所需的基本参数--亦称色谱条件 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短
流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等
温度控制
进样量
第六页，共41页。
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱硬件包围住。 检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有颜色，所以
人眼观察不到]。 流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯化的化合物
的该洗脱组分，用于进一步分析。 注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形成流动相、
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
第一页，共41页。
什么是高效液相色谱法
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用
第三十四页，共41页。
色谱图 参数基本概念
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间
保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建仪器方法”来设定使用的
仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进行参数设置）： 仪器方法（新建→仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设 置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器 方法出现在列表中
第二十一页，共41页。
第二十二页，共41页。
第十二页，共41页。
打开真空脱气机（degasser）
第十三页，共41页。
Wet prime（执行湿灌注）
第十四页，共41页。
流动相平衡色谱柱
同理温度、流速都可在此控制面板设定！
第十五页，共41页。
流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改 变，可显著改变组分分离状况；
峰底 － Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height
峰最大值到峰底的距离
峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离
第三十九页，共41页。
HPLC使用常见注意事项
1.夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。 2.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 3. 配制的流动相使用前要脱气，常用超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波
振荡10-15min，此法效果一般，但比较方便。
色谱图 参数基本概念
峰面积 － Peak Area
峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error
0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Peak
后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰 － Leading Peak
前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰 － Ghost Peak
[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器可和质谱仪
[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可得到分析物的更多综合 的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之为液质联用.
第四页，共41页。
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀
泵
色谱柱
检测器
泵输液 进样
分离
第二页，共41页。
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。
一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的 流速，一般是毫升/分钟。
一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流 动相 ，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。
除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确保样
品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是相互作用。
第二十页，共41页。
运行样品
配置系统项目 管理数据（相当于新建文件夹），鼠标右键选新建，设定项目名
（设定后将出现在运行样品中）。
建立方法组并运行样品
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。
第三十页，共41页。
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号 对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时 间。
基线 ↓
← 色谱峰 峰高
峰宽
保留时间（分）
第三十一页，共41页。
色谱图 参数基本概念
色谱峰 － Peak
色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线
第十六页，共41页。
流动相方面要求
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白 检验）
缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂
流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
第三十六页，共41页。
第三十七页，共41页。
第三十八页，共41页。
关机
数据采集完毕后，关闭检测器电源开关，以节省使用寿命。
使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进 样针和柱塞杆密封垫，确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源 开关。
处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登 记。
样品和化合物分离谱带的通路。
第三页，共41页。
高效液相色谱如何工作
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再将电信 号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光散射检测器
第十九页，共41页。
样品方面要求
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除 由于污染对分析结果的影响。
色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会 使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加 泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
第九页，共41页。
溶剂管理系统的准备
流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】， 进入“ Status （ 1 ）”屏幕
第十页，共41页。
溶剂管理系统的准备
第十一页，共41页。
必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水； 水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流动相； 检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部插 到溶剂瓶底部。
保留体积，VR － Retention volume
组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
第三十五页，共41页。
报告打印
在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择设定好
的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式打印，在待打 印的模式下可以编辑报告显示的信息，比如表头，色谱图的 显示范围，表格中所需内容等。
四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
第八页，共41页。
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测器、 计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
数据处理 都可以在“浏览项目”中完成。 点开“浏览项目”，选定要要浏览的项目，确
定后进入的界面中有如下内容：样品组、进样、 通道、方法、结果组、结果等。
第二十六页，共41页。
PDA数据处理
在浏览项目中，点“通道”→双击要处理的原始数据（点查看图标）→进
入查看主窗口→提取色谱图→点“处理方法向导”图标→新建处理方法
什么是高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出条件剔除不要的峰 →→→……→纯度匹配→PDA光谱对照→处理方法名→完成（然后又出现主窗 口，处理结果自动给出）→点“方法组”图标，选好后点“文件”下的“另存
为”→“方法组”，设定即可。至此选好处理方法。
结果处理：选好数据，右键选处理→选好方法组（上面设定好的） 点结果即可给出处理好的数据 注：通道无论什么时候给出的都是未处理数据。
第二十七页，共41页。
第二十八页，共41页。
第二十九页，共41页。
FD数据处理： 点“处理方法向导”图标→新建处理方法→在新方法（方法类
型中选LC）→新建处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定要积分的峰）→给出
条件剔除不要的峰→→→……→处理方法名→完成（然后又出现主窗口，处理结
果自动给出） →至此选好处理方法。
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的 极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也 称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。
常用溶剂的极性顺序：
水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃 > 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯 化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
第十七页，共41页。
色谱柱的使用及操作 流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
第十八页，共41页。
样品管理系统的准备
装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品 仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按 【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
并非由试样所产生的峰；亦称假峰
第三十三页，共41页。
色谱图 参数基本概念
基线 － Baseline
在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift
基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声；N － Baseline Noise
由各种因素所引起的基线波动
谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度 增加的现象
仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机
第七页，共41页。
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元 2498型紫外检测器
色谱管理工作站
打印机
四元梯度洗脱的溶剂输送系统
运行样品
第二十三页，共41页。
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组”来
设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另存为 “方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相统一） →完成。
第二十四页，共41页。
在“运行样品”中打开设定的仪器方法，并在
设针时选定设定的方法组来对样品进行分析。
第二十五页，共41页。
检测
第五页，共41页。
AB C
DE
G
F
记录
液相色谱的各部分示意图
液相色谱实验所需的基本参数--亦称色谱条件 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短
流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等
温度控制
进样量
第六页，共41页。
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱硬件包围住。 检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有颜色，所以
人眼观察不到]。 流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯化的化合物
的该洗脱组分，用于进一步分析。 注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形成流动相、
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
第一页，共41页。
什么是高效液相色谱法
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用
第三十四页，共41页。
色谱图 参数基本概念
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间
保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建仪器方法”来设定使用的
仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进行参数设置）： 仪器方法（新建→仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设 置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器 方法出现在列表中
第二十一页，共41页。
第二十二页，共41页。
第十二页，共41页。
打开真空脱气机（degasser）
第十三页，共41页。
Wet prime（执行湿灌注）
第十四页，共41页。
流动相平衡色谱柱
同理温度、流速都可在此控制面板设定！
第十五页，共41页。
流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改 变，可显著改变组分分离状况；
峰底 － Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height
峰最大值到峰底的距离
峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离
第三十九页，共41页。
HPLC使用常见注意事项
1.夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。 2.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 3. 配制的流动相使用前要脱气，常用超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波
振荡10-15min，此法效果一般，但比较方便。