Vitek 2 Compact GN卡用于不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定结果分析

果分析
黄梅会１，郑霄２，吴华１，王旭明１（１． 海南省人民医院检验科，海口 ； ５７０３１１ ２． 中国疾病预防控制中心传染病预 防控制所，北京 ） １０２２０６
摘要：目的 评估不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌在 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 中的鉴定结果。方法 收集 ２０１０ 年 ６ 月至 ２０１７ 年 ５ 月海南省人民医院分离的类鼻疽伯克霍尔德菌 １２７ 株，分别接种于哥伦比亚羊血平板（ＣＢＡ）、麦康凯平板（ＭＡＣ）和流感嗜 血巧克力平板（ＣＨＡ）上，以多位点序列分型（ＭＬＳＴ）为金标准，评估 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ ＶＴ２．Ｒ７．０１ 版 ＧＮ 卡对不同培养基上生长 的类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定准确性。结果 ＣＢＡ 平板上生长的类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定准确率最高，为 ９８． ， ４％ ２ 株被错 误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌；ＭＡＣ 次之，准确率为 ９４．５％，其中 ４ 株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌，２ 株为伯克霍尔德菌某 种，１ 株被错误鉴定为铜绿假单胞菌；ＣＨＡ 鉴定准确率最低，为 ９１．３％，其中 ４ 株被错误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌，２ 株为伯克 霍尔德菌某种，５ 株无鉴定结果。结论 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ ＧＮ 卡对不同培养基上类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定准确率不同，建议优 先选择 ＣＢＡ 平板上菌落。 关键词：类鼻疽伯克霍尔德菌；培养基；Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标志码：Ａ
ＣＨＣＡ 基质液（法国生物梅里埃公司）；ＴＣ４８／ Ｔ／ Ｈ
（）ａ ＰＣＲ 扩增仪（Ｂｉｏｅｒ 公司）；ＤＮＡ 提取试剂盒、
Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ（大连宝生物公司）；ＬＢ
琼脂平板、ＣＢＡ 平板、麦康凯平板（ＭＡＣ）、流感嗜血
巧克力平板（ＣＨＡ，郑州安图生物公司）；引物由天
一辉远公司合成。
１ 材料与方法
１．１ 菌株来源 收集海南省人民医院 ２０１０ 年 ６ 月 至 ２０１７ 年 ５ 月临床分离 １３７ 株 Ｂｐ，常规分离后均 采用哥伦比亚羊血平板（ＣＢＡ）进行转种，珠海迪尔
细菌鉴定系统、Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 及质谱仪（本实验室
已成功建立本地的 Ｂｐ 参考质谱图库）共同鉴定后
－８０ ℃贮存。经中国疾病预防控制中心通过 ＭＬＳＴ
分型确认的其中 １２７ 株菌株进行本研究。质控菌株
阴沟肠杆菌 ＡＴＣ仪器及试剂 ＤＬ９６ 细菌测定系统（珠海
迪尔生物公司）；Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ（软件版本为 ＶＴ２．
Ｒ７．０１）及 配 套 ＧＮ 卡、Ｖｉｔｅｋ ＭＳ 质 谱 仪 及 配 套
， 聚 合 酶 （ ） ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ ４ μＬ Ｔａｑ ＤＮＡ
５ Ｕ ／ μＬ
０．４ μＬ，上、下游引物 （２０ ）各 μｍｏＬ／ Ｌ １ μＬ，模板
。 反应条件： ； ， ＤＮＡ １ μＬ ＰＣＲ
９４ ℃ ７ ｍｉｎ ９４ ℃ ４５ ｓ
１．３ 质谱鉴定 质谱图库建立：获取经分子确认 ３０
株 Ｂｐ 质谱图，将质谱结果导入 ＳＡＲＡＭＩＳ 数据库，
创建 Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｅ 数据库。选取 １３０ 株菌对其
进行验证，准确率为 ９８％。菌株鉴定：挑取单个细
菌菌落均匀涂布于靶板，待完全干燥后加 １ μＬ
ＣＨＣＡ 基质液形成结晶，按照仪器科研库操作说明
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临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ， ， ， ２０１９ ７ ３７ ７ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ Ｊｕｌ． ２０１９ Ｖｏｌ．３７ Ｎｏ．７
： ＤＯＩ １０．１３６０２ ／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０１９．０７．０９
·临床实验研究·
Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ ＧＮ 卡用于不同培养基生长类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定结
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， ＤＮＡ １ ∶５０ 稀释后作为 ＰＣＲ 模板使用。ＰＣＲ 反应
体系 ： ， ， ５０ μＬ ｄｄＨ２Ｏ ３７．６ μＬ １０ ×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ ５ μＬ
类鼻疽病（ｍｅｌｉｏｉｄｏｓｉｓ）是类鼻疽伯克霍尔德菌 （ ， ）引起的一种起病急、 Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ Ｂｐ 进展快和致死率较高的感染性疾病。当前检测 Ｂｐ 的方法有质谱技术、分子生物学方法、生化鉴定等。 质谱技术鉴定 Ｂｐ 具有简便、快速、可重复性高等特 点［１］，但由于商业化的质谱图库尚无 Ｂｐ 的参考图 谱，需各地区建立本地的 Ｂｐ 参考质谱图库。分子 生物学方法如 １６Ｓ 、多 ｒＲＮＡ 位点序列分型［２］（ｍｕｌｔｉ ， ）、实时荧光环介导等温 ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ ＭＬＳＴ 扩增技术［３］等鉴定快速、准确，但因其技术要求较 高，需要特殊的仪器而无法常规应用。快速生化分 析系统如 ＡＰＩ 鉴定 ２０ＮＥ［４］ Ｂｐ 准确率可达 ８０％以 上，但其结果不稳定，检测周转时间较长。Ｖｉｔｅｋ ２ 可快速鉴定大部分细菌（包括 Ｂｐ）及酵母菌，但其存 在将 Ｂｐ 误鉴定为洋葱伯克霍尔德或无鉴定结果的 情况［５］。本研究应用 Ｖｉｔｅｋ ２ Ｃｏｍｐａｃｔ 对 ３ 种不同 培养基上生长的 １２７ 株类鼻疽伯克霍尔菌进行鉴 定，以期进一步了解不同培养基对该菌鉴定准确率 的影响。
书进行鉴定。
１．４
分型鉴定 ＭＬＳＴ
［２］
细菌基因组 ＤＮＡ 制备：选
取单个菌落密集划线接种于新鲜 ＬＢ 琼脂平板，
３５ ℃培养 ２４ ｈ 后使用 ＤＮＡ 提取试剂盒提取基因组
基金项目：海南省重点研发项目（ＺＤＹＦ２０１８１１３）；海南省自然科学基金（８１７３１９）。 作者简介：黄梅会，１９８６ 年生，女，硕士研究生，主治医师，从事临床微生物研究。 通信作者：王旭明，副主任技师，大学本科，Ｅｍａｉｌ：ｗｘｍｈｎ１２６０＠ 。 １６３．ｃｏｍ