噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽
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中图分类号： Ｒ７３７９ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７－６６１１（２０１９）０２－０１５９－０４ ＤＯＩ：１０．１３７５３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６６１１．２０１９．０２．００８
Байду номын сангаас
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ ＺＨＡＮＧＦａｎ１，ＪＩＡＸｉｎ１，ＹＡＯＨｏｎｇ１，ＬＵＸｉａｏｑｉｎｇ１，ＧＵＯＣｈａｏ１，ＹＡＮＧＸｉａｏｆｅｎｇ２ （１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｒｉｎａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｃｏｒｒｅ ｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅｍａｉｌ：ｙｘｆｙｌｑ＠１６３．ｃｏｍ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｓｃｒｅｅｎｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｖｉｔｒｏｔｈａｔｃａｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｂｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＲａｎｄｏｍ ＨｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅｓＬｉｂｒａｒｙ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄａｓｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｓ，ａｎｄｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＭＣＦ１０Ａｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎａｓａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｃｅｌｌｓ．ＴｈｅＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＲａｎ ｄｏｍ ＨｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅＬｉｂｒａｒｙｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｆｏｕｒｒｏｕｎｄｓｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎｂｉｏｐａｎｎｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｗｉｔｈｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｏｆｐｈａｇｅｔｏｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．ＴｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｐｈａｇｅＤＮＡｗｉｔｈｈｉｇｈａｆ ｆｉｎｉｔｙｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｈｏｍｏｌｏ ｇｙｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒｆｏｕｒｒｏｕｎｄｓｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ，ｔｈｅｐｈａｇｅｓｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ｈｉｇｈｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄ．Ｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｐｈａｇｅ１，３，５，６，８，１２，１４，１６，１７，１８ａｎｄ２０ｈａｄｓｔｒｏｎｇａｆｆｉｎｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｗｉｔｈｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙ ｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓ．ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗａｓＬＸＲＮＴＮＸ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＬＸＲＮＴＮＸｔｈａｔｃａｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｉｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄｉｎｖｉｔｒｏｕｓｉｎｇ ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ａｆｔｅｒｒｅｔｒｉｅｖａｌ，ｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅｓｅｇｍｅｎｔｉｓｎｏｔｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｗｉｔｈｋｎｏｗｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｏｉｔｓｈｏｕｌｄｂｅｌｉｋｅｌｙｔｏｂｅｃｏｍｅ ａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔａｒｇｅｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ； Ｂｃａｐ３７； ｉｎｖｉｔｒｏｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｓｐｅｃｉｆｉｃｂｉｎｄｉｎｇｐｅｐｔｉｄｅｓ
乳腺癌（ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ）是全世界女性最常见的 恶性肿瘤，其病死率居于女性肿瘤之首。我国乳腺 癌患者死亡率高于国外患者，但治愈率较低，严重威 胁着女性的生命健康，近年来乳腺癌靶向药物显著 提高了患 者 治 疗 效 果［１］。 目 前 迫 切 需 要 研 发 新 的 诊断和治疗手段以提高乳腺癌患者的治愈率和降低 死亡率。而寻找无创、敏感性高、特异性强且简单可 行的肿瘤标志物作为乳腺癌的早期诊断和治疗工具
摘要： 目的 利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异性结合的小分子多肽。 方法 培养人乳 腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞作为靶细胞，人正常乳腺上皮细胞 ＭＣＦ１０Ａ为吸附细胞，将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞进行减性体外筛选，用 ＥＬＩＳＡ法鉴定噬菌体对人乳腺癌 Ｂｃａｐ３７细胞的亲和力。提取亲和力较高的单克隆噬菌 体 ＤＮＡ，测定 ＤＮＡ序列并翻译出相应的氨基酸序列，进行同源性分析。 结果 利用噬菌体随机七肽库通过 ４轮减性筛选 获得了与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异结合的小分子多肽。ＥＬＩＳＡ法表明，第 １，３，５，６，８，１２，１４，１６，１７，１８和 ２０号单克隆 噬菌体与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞有很强的亲和力和特异性。测序结果显示，重复性最高的序列为 ＬＸＲＮＴＮＸ。 结论 利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异性结合的小分子多肽 ＬＸＲＮＴＮＸ，经检索该肽段与已知 蛋白尚无同源性，因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点。 关键词： 噬菌体展示技术； 乳腺癌； Ｂｃａｐ３７； 体外筛选； 特异性结合肽
山西医科大学学报，２０１９年 ２月，第 ５０卷 第 ２期
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噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽
张 帆１，贾 昕１，姚 红１，逯晓青１，郭 超１，杨晓峰２ （１山西医科大学微生物学与免疫学教研室，太原 ０３０００１；２
山西医科大学第一医院泌尿外科；通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｙｘｆｙｌｑ＠１６３．ｃｏｍ）
Байду номын сангаас
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ ＺＨＡＮＧＦａｎ１，ＪＩＡＸｉｎ１，ＹＡＯＨｏｎｇ１，ＬＵＸｉａｏｑｉｎｇ１，ＧＵＯＣｈａｏ１，ＹＡＮＧＸｉａｏｆｅｎｇ２ （１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｒｉｎａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｃｏｒｒｅ ｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅｍａｉｌ：ｙｘｆｙｌｑ＠１６３．ｃｏｍ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｓｃｒｅｅｎｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｖｉｔｒｏｔｈａｔｃａｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｂｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＲａｎｄｏｍ ＨｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅｓＬｉｂｒａｒｙ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄａｓｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｓ，ａｎｄｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＭＣＦ１０Ａｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎａｓａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｃｅｌｌｓ．ＴｈｅＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＲａｎ ｄｏｍ ＨｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅＬｉｂｒａｒｙｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｆｏｕｒｒｏｕｎｄｓｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎｂｉｏｐａｎｎｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｗｉｔｈｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｏｆｐｈａｇｅｔｏｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．ＴｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｐｈａｇｅＤＮＡｗｉｔｈｈｉｇｈａｆ ｆｉｎｉｔｙｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｈｏｍｏｌｏ ｇｙｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒｆｏｕｒｒｏｕｎｄｓｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ，ｔｈｅｐｈａｇｅｓｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ｈｉｇｈｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄ．Ｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｐｈａｇｅ１，３，５，６，８，１２，１４，１６，１７，１８ａｎｄ２０ｈａｄｓｔｒｏｎｇａｆｆｉｎｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｗｉｔｈｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙ ｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓ．ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗａｓＬＸＲＮＴＮＸ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＬＸＲＮＴＮＸｔｈａｔｃａｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒＢｃａｐ３７ｃｅｌｌｓｉｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄｉｎｖｉｔｒｏｕｓｉｎｇ ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ａｆｔｅｒｒｅｔｒｉｅｖａｌ，ｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅｓｅｇｍｅｎｔｉｓｎｏｔｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｗｉｔｈｋｎｏｗｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｏｉｔｓｈｏｕｌｄｂｅｌｉｋｅｌｙｔｏｂｅｃｏｍｅ ａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔａｒｇｅｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ； Ｂｃａｐ３７； ｉｎｖｉｔｒｏｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｓｐｅｃｉｆｉｃｂｉｎｄｉｎｇｐｅｐｔｉｄｅｓ
乳腺癌（ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ）是全世界女性最常见的 恶性肿瘤，其病死率居于女性肿瘤之首。我国乳腺 癌患者死亡率高于国外患者，但治愈率较低，严重威 胁着女性的生命健康，近年来乳腺癌靶向药物显著 提高了患 者 治 疗 效 果［１］。 目 前 迫 切 需 要 研 发 新 的 诊断和治疗手段以提高乳腺癌患者的治愈率和降低 死亡率。而寻找无创、敏感性高、特异性强且简单可 行的肿瘤标志物作为乳腺癌的早期诊断和治疗工具
摘要： 目的 利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异性结合的小分子多肽。 方法 培养人乳 腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞作为靶细胞，人正常乳腺上皮细胞 ＭＣＦ１０Ａ为吸附细胞，将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞进行减性体外筛选，用 ＥＬＩＳＡ法鉴定噬菌体对人乳腺癌 Ｂｃａｐ３７细胞的亲和力。提取亲和力较高的单克隆噬菌 体 ＤＮＡ，测定 ＤＮＡ序列并翻译出相应的氨基酸序列，进行同源性分析。 结果 利用噬菌体随机七肽库通过 ４轮减性筛选 获得了与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异结合的小分子多肽。ＥＬＩＳＡ法表明，第 １，３，５，６，８，１２，１４，１６，１７，１８和 ２０号单克隆 噬菌体与人乳腺髓样癌 Ｂｃａｐ３７细胞有很强的亲和力和特异性。测序结果显示，重复性最高的序列为 ＬＸＲＮＴＮＸ。 结论 利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌 Ｂｃａｐ３７细胞特异性结合的小分子多肽 ＬＸＲＮＴＮＸ，经检索该肽段与已知 蛋白尚无同源性，因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点。 关键词： 噬菌体展示技术； 乳腺癌； Ｂｃａｐ３７； 体外筛选； 特异性结合肽
山西医科大学学报，２０１９年 ２月，第 ５０卷 第 ２期
·１５９·
噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽
张 帆１，贾 昕１，姚 红１，逯晓青１，郭 超１，杨晓峰２ （１山西医科大学微生物学与免疫学教研室，太原 ０３０００１；２
山西医科大学第一医院泌尿外科；通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｙｘｆｙｌｑ＠１６３．ｃｏｍ）